基础生物学实验方案

基础生物学实验方案指导教师：2012年9月实验一培养基的配制实验目的明确培养基的配制原理。掌握配制培养基的一般方法和步骤。实验内容学习细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物培养基的配制。实验原理培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。I号培养基，培养霉菌常用蔡氏培养基或马铃薯培养基，培长因子及水等几大类。琼脂只是固体培养基的支持物，一般不为微生物所利用。它在96℃以上熔化成液体，而在45℃左右开始凝固成固体。在配制培养基时，根据各类微生物的特点pH偏酸；细菌、放线菌的pH为微碱性。所以每次配制培养基时，都要将培养基的pH值调到一定的范围。以下配方选第三种实验中进行实验牛肉膏蛋白胨培养基配牛肉膏 3.0g蛋白胨 10.0gNaCl 5.0g水 1000mLpH 7.4~7.6高氏I可溶性淀粉20gNaCl 0.5gKNO 1g3KHPO2

·3H2O 0.5g4MgSO4·7H2O 0.5gFeSO4·7H2O 琼脂 15—25g水 1000mLpH 7.4~7.6马铃薯培养基配方马铃薯（去皮） 200g葡萄糖 20g琼脂 15~25g水 1000ml自然pH实验器材和药品琼脂（两瓶），马铃薯（1000g），葡萄糖（两瓶）、蒸馏水等。（3(500mL1（250mL，1），玻棒，小漏斗、电子天平，药匙，报纸，纱布、胶管、试管架、铁架台、电炉、石棉网、剪刀、玻璃棒、培养皿（9cm，每组三个）、高压灭菌锅、胶头滴管、保鲜膜。实验步骤1．牛肉膏蛋白胨培养基配制方法NaCL放人烧杯中。牛肉膏常于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。溶化：在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使脂放入己溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。细菌生长。pH在未调pHpH试纸测量培养基的原始1mol/LNaOH,边加边搅拌，并随时用pHpHpH7.6。反之，用mol/LHCL进行调节。对于有些要求pH较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行。pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。配制pH低的琼脂培养基时，若预先调好pH分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整PH。过滤省去（本实验勿需过滤）。分装按实验要求，可将配制的培养基分装人试管内或三角烧瓶内。液体分装：分装高度以试管高度的l／4左右为宜。分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜1/5不超过三角烧瓶容积的一半为宜。半固体分装：试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。图1-1培养基的分装A漏斗分装装置；B自动分装装置1铁架；2漏斗；3孔胶管；4弹簧夹；5玻璃；6流速调节；7装量调节；8开关分装过程中，注意不要使培养基沾在管(瓶)口上，以免沾污棉塞而引起污染。加塞图1-2 棉塞的制作培养基分装完毕后，在试管口或三角烷瓶口上塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等松紧都应适当。加塞时的棉塞的总长度的3/5在口外。包扎灭菌将上述培养基以0.103MPa，121℃，20min高压蒸气灭菌。搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至50℃左右〔以防斜面上冷凝水太多〕，将试管口端捆在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。无菌捡查将灭菌培养基放人37℃的温室中培养24—48h，以检查灭菌是否彻底。2．高氏I号培养基配制方法称量和溶化FeSO

O可先配成高浓度的贮备液按比例换算后再加入，方法是先在4 2100mL水中加入1g的FeSO4·7H2O配成0.01g／ml，再在1000mL培养基中加1mL的0.0lg／m1养基，其溶化过程同牛肉膏蛋白胨培养基配制方法。pH3．马铃薯培养基配制方法1500mL0.1MPa灭菌20。4．察氏培养基配制方法方法同牛肉膏蛋白胨培养基配制。实验结果及讨论针对实验原理、步骤、现象进行讨论。实验二、微生物接种及抗菌技术（一）微生物的接种技术目的学习掌握微生物的几种接种技术建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节实验说明操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。实验器材器械和用品和平板培养基。菌种：大豆疫霉培养基：普通PDA琼脂斜面和平板（上次实验制备）实验流程斜面接种法→液体接种法操作步骤斜面接种法斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。基上。操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。())持在左手拇指、食指、45～0并能清楚地看到两个试管的斜面（图4-。以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。棉塞应始终夹在手中如掉落应更换无菌棉塞。将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出，接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。在试管中由下往上做S后，放回原处，并塞紧棉塞。将接种管贴好标签或用玻璃铅笔划好标记后再放入试管架，即可进行培养。液体接种法多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养菌接种液体培养基进行生化试验，其操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同，仅将不同点介绍如下：霉菌菌种时，若用接种环不易挑起培养物时，可用接种钩或接种铲进行。也可根据需要用吸管、滴管或注射器吸取培养液移至新液体培养基即可（图4-。可用酒精棉球灼烧灭菌后，再用消毒液擦净。凡吸过菌液的吸管或滴管，应立即放入盛有消毒液的容器内。抗菌方法介绍，重点平板孔穴法：在铺有试验用的双碟琼脂平板上，用眼科角膜环转或打孔器等距打三个孔,柳叶刀挑出孔穴琼脂后，用相同的移液管定量在每个孔内滴加不同浓度28DMSO溶解，稀释，浓度依次为500,250,125,62.5μg/mL。做好空白对照，平行测三组。采用上述不同浓度药液用平板孔穴法对结果分别记录并描绘平板划线、斜面微生物生长情况和培养特征。实验三 从果皮中提取果胶及果冻的制备一、实验目的了解果胶的用途。了解从植物中提取果胶的原理和操作方法。二、实验用品仪器烧杯200m、100m，玻璃漏斗，纱布药品果皮HC（6mol·-195乙醇，活性炭。柠檬酸，柠檬酸钠，蔗糖三、实验原理0.7~1.5%()7~17％。果胶基本结构是以-1,4苷键连结的半乳糖醛酸，其中部分羧基被甲酯化，其余的羧基四、实验操作果胶的提取150mL60ml2mL热至沸，在搅拌下维持沸腾约30min，趁热用纱布过滤。在滤液中加入少量活性炭于20min进行脱色和除异味，趁热抽滤，得到黄色滤液。滤液转移至100mL95%1.350%～60%10分钟。过滤、果胶