实验报告-质粒提取及检测

：同实验者：唐妍 2017年4月10题目：质粒DNA的提取及检一、实验目DNA二、实验原质粒一种外的稳定遗传因子，大小从1-200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，载体要把一个有用的外源通过工程，转化到细胞中去进行繁殖和表达，的质粒、λ噬菌体、M13噬菌体、噬菌粒外，还有酵母人工载体以及动、植物病分离质粒DNA碱裂解溶液Ⅰ：50mmol/L，10mmol/EDTA-Na，25mmol/LTris-HClDNA溶液Ⅱ：0.4mol/LNaOH，2%SDS，1：1作用：细胞在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变1 ：同实验者：唐妍 2017年4月10题目：质粒DNA的提取及检溶液Ⅲ：5mol/L60ml，11.5ml，电带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。DNA200bp50kbDNADNA（U（TDNA度是非常重要的。提取质DNADNA闭环超螺旋DNA。当提取的质粒DNA电泳时,同一质粒DNA泳动速度：闭环超螺旋〉线核酸含量有关。三、实验材仪恒温摇床，高压灭菌锅，超净工作台，、 材2 ：同实验者：唐妍 2017年4月10题目：质粒DNA的提取及检试LB（Tryptone）10g，酵母提取物（Yeast琼脂（固体培养基）15g，1NNaOHpH7.5;氨苄青霉素抽提液（饱和酚：氯仿：异戊醇无水乙 作用：除去DNA水化层，使DNA沉淀 作用：纯化质粒DNA。g.TE缓冲液或ddH2O DNAGoldview（DNA1×TAE上样缓冲液四、方法和质粒DNA的提370C1.5mLEppendorf，10000rpm×2min，100μLI，10200μL2~35150μL3-53 ：同实验者：唐妍 2017年4月10题目：质粒DNA的提取及检15（6）10000rpm×5min，混匀，10000rpm×10min，将上清液转移至新的离心管中；加入等体积（370μL）氯仿/异戊醇（24:1），混匀，10000rpm2min2200C（10）12000rpm×5min，800μL70%12000rpm1min，倒尽上清液，吸水纸吸干液体，30min，直至变得透明无乙醇味；20μLddH2ODNA5μL-200CDNA琼脂糖凝胶电泳检琼脂糖凝胶板的650C（不烫手为宜），1μLGoldview气泡，缓慢倒入事先准备的制胶有机玻璃槽（插入样品槽模板梳子）30min胶板放入电泳槽中（样品孔位于负极），1×TAE5mm，用取液DNA5μL1μL（6×）1~2cm4 ：同实验者：唐妍 2017年4月10题目：质粒DNA的提取及检DNA五、结果及DNADNADNA3DNADNA，常以超螺旋形式存在；如果两条链DNADNA分子。DNAcccDNA>线性>ocDNADNA的泳动速度最快，电泳速度最快的条带显色最深。闭合环状DNA、开环DNA和线性DNA分子；DNA条带不是特别清晰，分析有以下几个原因：DNA部分降解、电泳缓冲液陈旧、DNA上样量过多、有蛋白污染、DNA变性。5：同实验者：2017410题目：质粒DNA的提取及检六、讨核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的和过高浓度的金属离子其他生物大分子（如蛋白质、多糖和脂类分子）DNARNApH4~10机械剪切力的主要危害对象是大分子量的线型DNA分子，如真核细胞的DNA；对分子量小的环状DNA分子，如质粒DNA及RNA分子则相对少一些。0~4RNApoly(A)RNA(25:24:1)混合液可使者两个问题迎刃而6生命科学学