液态活检与你同行培训课件

液态活检与你同行MITTechnologyReview杂志发布了2015年度十大突破技术(10BreakthroughTechnologies2015)的榜单。液态活检技术光荣上榜。2液态活检与你同行3“液态活检”ChristianRolfo,BiochimicaetBiophysicaActa,2013.LowesLE,etal.[J].Internationaljournalofmolecularsciences,2016,17(9):1505.

Aliquidbiopsyisaliquidbiomarkerthatcanbeeasilyisolatedfrommanybodyfluidsblood,saliva,urine,ascites,pleuraleffusion,etc.)and,aswellasatissuebiopsy,arepresentativeofthetissuefromwhichitisspread.包括：循环肿瘤细胞（CTC）;循环肿瘤DNA（ctDNA）;肿瘤外泌体（exosome）3液态活检与你同行液体活检发展历程01液体活检临床应用02液体活检VS组织检测03CONTENT4液态活检与你同行Part1液体活检发展历程5液态活检与你同行6癌症患者的ctDNA、cfDNA及其发现cfDNA即循环游离DNA，机体细胞释放入外周血液循环后发生部分降解的内源性DNA。ctDNA即循环肿瘤DNA，是指肿瘤细胞DNA经脱落或细胞凋亡后释放进入循环系统。可来自原发肿瘤或转移形成的新肿瘤。（是cfDNA的一种）甚至在肿瘤形成早期血液中往往还没有CTCs但是却已经开始有ctDNA。MaM,etal.[J].Annalsoftranslationalmedicine,2015,3(16).6液态活检与你同行1991膀胱癌患者尿液DNA-TP53突变1999乳腺癌TP53突变胰腺癌KRAS突变2004肝癌和卵巢癌发现TP53突变2007食管癌CpG岛甲基化2003结直肠癌发现KRAS突变2007肺癌发现KRAS突变；黑色素瘤BRAF突变ctDNA成为肿瘤研究热点，下一代癌症指标几十年来，人们发现ctDNA与肿瘤密切相关，能够准确反映肿瘤的动态变化。肾癌DNA不稳定性2008……7液态活检与你同行8循环肿瘤细胞（CTCs）循环肿瘤细胞（CTCs）指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环的肿瘤细胞。1869澳大利亚医生Ashworth发现CTCs1989肿瘤转移中发现CTC1999-2003开展大量临床实验201319761976年CTC细胞被重新定义20042017……FDA批准用于临床单细胞测序技术确立CTC的肿瘤替代性CTC可能在肉眼可见肿瘤形成之前进入外周血，是肿瘤转移的“种子”。8液态活检与你同行9外泌体及其发现RaposoG，etal.[J].JCellBiol,2013,200(4):373-383.外泌体研究尚处于临床早期，全球临床试验26例198620131996膜性囊泡研究的三位科学家获得诺贝尔奖发现外泌体EB病毒转化的B细胞内膜性囊泡可激活T细胞天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳。外泌体(Exosome)是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体)的膜性囊泡。9液态活检与你同行10液体活检技术对比ctDNA富集容易检测难但肿瘤代表性较强CTC检测容易富集难外泌体的稳定性较强，但距临床应用还较远10液态活检与你同行Part2液态活检临床应用11液态活检与你同行ctDNA的临床应用HeitzerE,etal.[J].Clinicalchemistry,2015,61(1):112-123.早期诊断，检测残余病灶动态监测治疗反应；指导靶向用药判断预后12液态活检与你同行14ROS1融合基因2007年全基因组分析在肺癌上发现ROS1基因。在前期临床的研究中，crizotinib显示出对抗ROS1驱动的肿瘤细胞的活性。活NatMed.2012Feb12;18(3):378-81.14液态活检与你同行15ROS1融合基因（临床研究PROFILE1001）ShawAT,etal.].NEJM,2014,371(21):1963-1971.入组病例：ROS1队列研究入组ROS1突变阳性患者50人检测方法：FISH检测研究结果：ORR：72%，mPFS为19.2个月15液态活检与你同行16ROS1融合基因（临床研究OO-1201）.吴一龙2016CSCO关键入组标准集中RT-PCR检测ROS1-阳性确认ALK融合阴性局部晚期或转移性NSCLC既往接受过≤3线的系统治疗ECOGPS0or1可评估的疾病治疗稳定的脑转移患者可入组克唑替尼250mgBidPO，持续剂量28天一周期（N=127）临床终点主要终点：ORR次要终点：持续响应时间

响应时间疾病控制率PFSOS

安全性

临床结局OO-1201是一项针对东亚人群（中国、日本、韩国）的Ⅱ期临床研究，其中包括中国患者74例，是迄今为止规模最大的ROS1阳性NSCLC临床研究。16液态活检与你同行17ROS1融合基因（临床研究OO-1201）.吴一龙2016CSCO基线统计与疾病特点17液态活检与你同行18ROS1融合基因（临床研究OO-1201）.吴一龙2016CSCO基线疾病变化百分比IRR-评估的靶病变疾病变化百分比18液态活检与你同行19ROS1融合基因（临床研究OO-1201）.吴一龙2016CSCO治疗中发生≥10%的不良反应19液态活检与你同行Part3液态活检VS组织检测20液态活检与你同行21血液检测肿瘤基因突变的关键问题血液检测是否有生存获益?1血液检测与组织的一致性程度?221液态活检与你同行血液检测的优势与临床获益进展追踪（比影像学更早）血液检测无痛微创、容易获取无取样空间限制22液态活检与你同行23ctDNA检测RAS突变与组织检测的一致性VidalJ,etal.[J].AnnalsofOncology,2017,28(6):1325-1332.IF:11.85555例组织中检测阳性的患者，53例血液样本阳性，总体一致率达到96.4%。60例组织检测RAS野生型的患者，54例血液检测中为野生型，总体符合率90%。其余6例患者，血液检测到突变而组织未检测到。55例组织阳性60例组织阴性115例转移型mCRC患者的组织和血液样本研究结论：115例mCRC患者组织和血浆样本RAS分析总一致性为93%。血液检测的可靠性不亚于组织检测，甚至高于组织检测23液态活检与你同行24ctDNA检测与组织检测的一致性VidalJ,etal.[J].AnnalsofOncology,2017,28(6):1325-1332.临床案例：NRAS61等位基因突变的术前术后动态监测案例KRAS146等位基因突变的术后监测案例一个IV期结直肠癌肝转移的患者，检测到血浆和组织NRAS61突变后4周后开始贝伐单抗-FOLFOX治疗，显著的ctDNA下降与疾病稳定和12周时CT扫描结果相关联；八个月后，患者疾病复发，RAS等位基因突变率相应增加，启动二线治疗方案FOLFIRI-阿柏西普三个月后，CT检测并且稳定，此时检测不到ctDNA

RAS突变。一个IV期结直肠癌多发转移的患者，血液活检分析检测到一个KRAS146等位基因突变，随后手术组织样本的检测证实了血液检测的结果。FOLFOX-贝伐单抗的治疗早期，ctDNARAS突变率逐渐降低，12周时检测不到ctDNA，治疗停止后，ctDNAKRAS146突变率增加，随后再次进行化疗，ctDNAKRAS146突变率随之下降。24液态活检与你同行作者年份期刊样本数癌种方法突变一致率ShuY,etal2017ScientificReports605除脑瘤外的29种肿瘤NGS87.0%Ma20162016Gene219III-IV期的NSCLC患者ARMS82%（EGFR）IFUMtrial20142014JournalofThoracicOncology1060NSCLC患者试剂盒94%（EGFR）Villaflor2016OncotargetNSCLC患者NGS79%VidalJ,etal2017AnnalsofOncology115转移型结直肠癌试剂盒93%（RAS）血液检测与组织检测具有较高一致性组织和血液样本的不一致性原因可能有：肿瘤的异质性组织和血液的采样时间差异肿瘤时期肿瘤的类型25液态活检与你同行项目推荐等级适用人群临床应用药物意义EGFR1类推荐所有病理诊断为肺腺癌、含有腺癌成分和具有腺癌分化的NSCLC患者；无嗜烟者、小活检标本或混合组织学类型的患者.厄洛替尼（1类推荐）阿法替尼（1类推荐）吉非替尼（1类推荐）敏感位点：19号外显子缺失、21号外显子（L858R,L861）18号外显子（G719X，G719)，20号外显子（S768I）耐药位点：20号外显子插入突变，KRAS突变ALK1类推荐克唑替尼（1类推荐）色瑞替尼（1类推荐）ALK重排FISH阳性ROS12A推荐克唑替尼（2A推荐）ROS1重排FISH阳性PD-L12A推荐pembrolizumab（1类推荐）PDL1IHC≥50%EGFRT790M2A推荐EGFR-TKI药物耐药进展后Osimertinib（1类推荐）T790M突变阳性脚注：1.NCCN强烈推荐更为广泛的分子检测,包括那些已经有针对性药物的罕见突变,或者有可能进行临床研究。更为

广泛的分子检测是改善NSCLC治疗的关键因素。2.首先考虑活检样本，如果重复活检不可行，也可考虑血浆活检。如果血浆T790M突变检测阴性，可考虑反过来进行组织的基因检测。3.如果活检T790M为阴性，考虑血液检测，如果血浆T790M突变检测阴性，考虑可反过来进行基于组织的检测。NCCN

NSCLC基因检测项目26液态活检与你同行27液体活检的检测方法的选择共识一：精准医学是一项系统工程，包括：发现具有临床意义的基因异常（包括可靶点抑制、预测和／或预后标志物）；发明可靶向特异基因异常的药物；寻找证明其特异的有效性安全性证据应用于临床证明了证据的可重复性。任何一项缺少都不允许。共识二：液体活检的检测对象包括：循环肿瘤细胞，血浆DNA，Exosome。共识三：检测已知的、单个临床可药物抑制