无菌生产工艺验证的主要内容与方法

无菌生产工艺验证的

主要内容与方法1

内容前言-药品的风险无菌生产工艺验证原则与申报资料要求无菌生产工艺验证的内容与方法无菌生产工艺的再验证小结一、前言药品的风险取决于其给药途径1类–注射剂（静脉，肌内，皮内，皮下，脊椎腔，动脉内…）2类–口服制剂3类–局部给药手术、烧伤及严重创伤眼部给药耳、鼻及呼吸道吸入阴道、尿道给药直肠给药4类–含动物组织的口服制剂5类–兼用途径注射剂的风险风险1-微生物污染

风险2-热原的污染风险3-不溶性微粒风险4-纯度

其他风险：安全性（组织的刺激性，毒性发应）渗透压pH注射剂风险控制手段微生物污染风险–注射剂必须是无菌热原污染–控制限度不溶性微粒–控制限度纯度–原料工艺其他风险控制手段：安全性临床实验等渗，等张，pH调节无菌药品的制造工艺类别最终灭菌工艺先将药品的各个部件（产品，容器和密封件）在符合要求的环境下组成最终的包装形式，最后让产品在其最终容器中进行灭菌处理（通常使用热力学灭菌或辐射灭菌）。无菌生产工艺药品的各个部件（产品，容器和密封件）分别经过灭菌处理，再在高洁净度的环境中组装最终产品，但产品装入其最终容器后不再进行灭菌处理。如何制造出高质量的无菌药品？对生产工艺的深刻理解识别、评估各工艺步骤对无菌性，热原，微粒等质量因素及其影响程度在工艺过程中采取有效控制手段对这些手段的有效性进行验证遵循相关法规的要求二、无菌生产工艺验证原则与申报资料要求无菌生产工艺验证原则以无菌保证为核心，在充分评估工艺各步骤微生物污染风险的基础上，利用现有的科学技术，对风险控制手段的有效性进行确认。无菌冻干粉针剂生产工艺流程配料原料，辅料，配料器具，环境，人员操作容器，WFI，配液器具，环境，操作胶塞，过滤器，灌装部件，清洁工具，灭菌釜，清洁及灭菌过程西林瓶，WFI，洗瓶机，干热灭菌设备气体，容器管道过滤器及安装操作，过滤前溶液含菌量环境，人员操作，转移冻干机密闭性压盖前储存时间，转移，胶塞密闭性，压盖后的密闭性无菌工艺无无菌性的保保证因素水原料药辅料气体容器/密封封件设施容器、设备备的清洗灭灭菌配料、配液液、过滤、、灌装全过过程人员环境及培养养基灌装无菌试验无菌包装产品

生产过程原材料遵循的法规规要求中国GMP有关无菌生生产工艺的的有关规定定以及洁净净室悬浮粒粒子、沉降降菌和浮游游菌检测的的国家标准准《药品生产产质量管理理规范实施施指南》中中有关无菌菌生产的指指导原则《药品生产产验证指南南》FDA《无菌生产工艺艺指南》FDA《工艺验证一般般原则》《新新药申报资料料对灭菌工艺艺验证的要求求》欧盟GMP附录1《无菌菌药品生产》》美国FDA要求的新药申申报资料1.适应症2.药学和毒理学学研究3.化合物研究4.生产工艺5.标准和控制6.微生物学研究究7.现场检查8.样品测试9.动物试验10.临床研究11.生物利用FDA新药申报资料料对无菌药品工艺艺验证的要求求原则：只有当当药品的检验验方法、生产产设施、工艺艺流程、包装装等能确保药药品的性质、、含量、质量量和纯度时，，新药申请才才会被批准资料要求：无无菌药品的工工艺验证必须须包含在申报报资料中两级责任制：：CDER负责资料的审审核地方药监负责责现场核查目的1：申报报资料的真实实性目的2：GMP符合性检查FDA新药申报资料料对无菌药品工艺艺验证具体内内容要求（1）A.厂房和设施布局图，包括括洁区划分设备分布图B.总体生产流程程介绍产品过滤溶液储存时间间关键操作C.容器、密封部部件、设备和和器具的灭菌菌去热原过程程分别灭菌溶液液的工艺过程程完整的批生产产记录FDA新药申报资料料对无菌药品工艺艺验证具体内内容要求（2）C.培养基灌装的的程序和标准准灌装房间密封系统类型型和尺寸每个容器灌装装体积培养基类型灌装数量培养数量阳性数量培养条件灌装日期挑战条件叙述述环境监测产品正常工艺艺和培养基灌灌装工艺的工工艺参数FDA新药申报资料料对无菌药品工艺艺验证具体内内容要求（3）E.培养基灌装失失败时的措施施F.环境监测应用的微生物物方法监测酵母菌、、霉菌和厌氧氧菌的方法和和频率超标时的措施施G.密封系统完整整性H.无菌检查方法法和放行标准准I.内毒素检查方方法J.有关上述所有有内容的文件件列表三、无菌生产产工艺验证的的具体内容和和方法厂房和设施（（布局、空气气净化系统包包括HEPA，WFI系统）器具、容器的的灭菌除热原原过程灌装部件、胶胶塞的灭菌过过程洗瓶、干热去去热原过程配液灌、储液液罐及管道、、冻干机灭菌菌过程过滤除菌过程程灌装过程（环环境、人员监监测）容器密闭性综合验证：培培养基灌装试试验（工艺模模拟实验）实验室控制（（微生物测试试标准方法、、无菌检查））3.1原辅辅料的控制无菌原料药其本身的生产产工艺应按无无菌生产工艺艺验证原则进进行包装和运输应应是考察重点点非无菌原料或或辅料尽可能降低微微生物负荷-<50CFU/g生产的洁净环环境设备与其他物物料及人员生产用水非无菌原料或或辅料关键控控制点精烘包阶段环环境至少十万万级以上人员着装、人人流物流控制制，环境清洁洁规程设备清洁规程程，设定内控控限度预先先采采取取高高温温或或过过滤滤是是降降低低微微生生物物污污染染的的有有效效方方法法生产产用用水水需需要要达达到到纯纯化化水水要要求求，，并并控控制制内内毒毒素素对除除菌菌、、灭灭菌菌或或去去内内毒毒素素步步骤骤需需评评估估对对产产品品理理化化性性能能的的影影响响3.2生生产产环环境境验验证证和和控控制制范围包含含所有工工艺步骤骤遵守相关关的GMP规范验证时考考察静态态和动态态时的环环境质量量生产时实实行动态态监测环境验证证的范围围空气净化化系统的的验证（（温湿度度，压差差，空气气流向，，风速，，高效过过滤器泄泄漏测试试）环境性能能测试（（静态＋＋动态））悬浮粒子子和恢复速率率测试微生物测测试：空空气浮游游菌，沉沉降菌，，表面微微生物日常监监控为什么么环境境监测测是必必不可可少的的？在无菌菌工艺艺中，，产品品、容容器和和密封封件分分别经经过灭灭菌后后再进进行灌灌封。。由于于产品品装入入最终终容器器后不不再作作进一一步灭灭菌处处理，，容器器在极极高洁洁净环环境下下进行行灌封封是至至关重重要的的。FDA《无菌生生产工工艺指指南》》第五五页制订环环境监监控方方案的的原则则明确监监控的的关键键控制制点给产品品构成成最大大风险险的位位置，，如产产品暴暴露位位置、、直接接接触触表面面人员科学建建立控控制标标准和和方案案标准应应满足足无菌菌生产产微生生物控控制要要求，，并结结合取取样点点位置置和生生产操操作的的相互互关系系建立警警戒和和纠偏偏标准准进行数数据分分析全面监监控、、动态态监控控定期的的环境境再验验证无菌灌灌装区区环境境监控控频率率洁净室测试项目监测频率无菌灌装间产品转移间灭菌釜卸载间更衣间空气悬浮粒子空气浮游菌表面微生物沉降菌操作人员每批一次或无生产时每周一次产品转移间清洁间物流缓冲间更衣间空气悬浮粒子空气浮游菌表面微生物每周一次物料准准备区区环境境监控控频率率洁净室测试项目监测频率配液间压盖间空气悬浮粒子*空气浮游菌表面微生物沉降菌每周一次（*每月一次）更衣间清洁/灭菌间空气悬浮粒子*空气浮游菌表面微生物每周一次（*每月一次）其他C级区房间空气悬浮粒子空气浮游菌表面微生物每月一次辅助区区环境境监测测频率率洁净室测试项目监测频率辅助区所有房间空气悬浮粒子空气浮游菌表面微生物每三个月一次微生物物检测测方法法的特特点空气浮浮游菌菌定量、、准确确、取取样量量大，，但易易干扰扰气流流沉降菌菌取样时时间长长，不不干扰扰气流流，但但非定定量、、检出出率低低接触碟碟光滑表表面，，方便便，但但需特特殊的的培养养碟棉签法法不规则则表面面，操操作稍稍复杂杂监测的的实施施在生产产过程程中，，无菌菌灌装装线上上沉降降碟的的放置置应在在所有有操作作开始始前完完成空气浮浮游菌菌的测测试应应根据据生产产情况况开空空气取取样仪仪灌装线线上的的表面面微生生物测测试应应在灌灌装结结束后后进行行监测人员根根据生产和和人员操作作的情况，，可随时要要求进行操操作人员手手套的微生生物测试，，操作人员员在测试前前不应喷洒洒无菌酒精精，在测试试后应更换换手套。对对于无菌服服的微生物物测试一般般在操作人人员退出B级区之前进进行。所有的样品品在测试后后都应装入入灭菌袋中中适当包裹裹，以避免免样品在转转移途中受受到污染。。人员控制无菌服、头套套、眼罩、人人员操作行为为无菌灌装人数数控制人员资格认定定体检，操作培培训，着装培培训，着装测测试着装测试方法法年度资格再确确认制度眼罩也为取样样点环境监测数据据的分析细菌鉴定确定污染源，，为制订整改改措施提供帮帮助提供放行/报报废依据用于培养基灌灌装用于消毒剂的的效率测试3.3过滤滤系统的验证证无菌过滤是截截留微生物具有一定的风风险制造过程中的的不均一性对过滤介质的的化学腐蚀机械缺陷过高的压力过滤器验证项项目生物性能微生物截留客户定制流速产量操作温度压力系统尺寸大小小物理性能完整性产品／水起泡泡点扩散流吸附化学性能兼容性析出物验证必须是以以产品为介质质，在最差的的条件下进行行过滤器的选择择工艺特性所要求的流量量所要求的压差差可使用的灭菌菌方法过滤介质的寿寿命过滤器结构筒式，平板式式过滤器的选择择化学相容性证明过滤介质质不会把外来来物质带进产产品证明无菌过滤滤介质不受产产品的影响，，削弱它的强强度和完整性性测试包括：可氧化物质溶剂系统中的的重量变动析出物分析，，吸附分析完整性试验流量变化外观物理变化化生物截留能力力过滤器的完整整性试验目的是确定过过滤系统不存存在使液体不不经过过滤介介质到达过滤滤器下游的通通道起泡点试验前向流试验（（扩散流）压力表压力表滤芯流量计无菌过滤器微微生物挑战试试验目的：证实过过滤器是有能能力截获微生生物，而且超超过了工艺物物流自身最大大的生物负荷荷模拟实实际工工艺的的压力力流量量等参参数菌种：：缺陷陷型假假单胞胞菌数量：：按过过滤器器面积积107个/cm2步骤确认过过滤器器的完完整性性用含一一定数数量细细菌的的培养养基过过滤滤过液液进行行培养养（取取样或或膜过过滤）），37度度14天过滤后后进行行完整整性测测试连续验验证3次，，都应应无菌菌生长长三个需需要特特别关关注的的关键键点起泡点点标准准的建建立与与截留留率的的相关关性过滤器器的微微生物物截留留验证证必须须在药药液中中进行行在实际际的生生产参参数下下进行行验证证，如如压力力最高高值过滤系系统验验证小小结过滤器器的选选择应应符合合工艺艺和产产品的的特性性过滤器器的验验证是是一个个技术术复杂杂的过过程国外一一般委委托过过滤器器生产产厂家家进行行选择择和验验证3.4培培养基基灌装装试验验采用正正常的的生产产工艺艺，用用培养养基代代替产产品进进行灌灌装，，以考考察生生产过过程、、设备备和包包装形形式、、人员员操作作等整整个体体系能能始终终如一一地生生产出出符合合要求求的无无菌产产品使用范范围初次验验证对象：：新的的无菌菌生产产工艺艺连续3次合合格的的无菌菌工艺艺模拟拟有足够够的时时间模模拟实实际生生产时时的操操作最差状状况模模拟年度再再验证证对象：：现行行工艺艺每年进进行两两次再再验证证有足够够的时时间模模拟实实际生生产时时的操操作最差状状况模模拟培养基基灌装装流程程确认设设施设设备和和各灭灭菌工工艺验验证的的完成成确认认培培养养基基灌灌装装的的范范围围制订订培培养养基基灌灌装装方方案案培养养基基选选择择灌装装数数量量和和灌灌装装总总时时间间各步步骤骤间间的的间间隔隔时时间间挑战战试试验验的的最最差差条条件件设设计计人员员环环境境监监测测计计划划培养养条条件件、、时时间间和和设设备备培养养基基灵灵敏敏度度试试验验总结结和和失失败败原原因因调调查查使用用范范围围计划划外外的的验验证证：：如工工艺艺重重大大改改变变，，设设施施设设备备改改造造等等偏差差原原因因：：无菌菌实实验验失失败败，，根根据据偏偏差差调调查查结结果果的的要要求求环境境监监测测结结果果明明显显反反常常，，根根据据偏偏差差调调查查结结果果的的要要求求某个个区区域域的的空空调调关关闭闭时时间间超超过过验验证证的的时时间间段段培养养基基灌灌装装试试验验应应考考虑虑的的因因素素培养养基基的的选选择择培养养基基促促生生长长能能力力灌装装数数量量环境境监监测测方方案案收集集和和培培养养最差差条条件件的的挑挑战战培养养基基的的选选择择适应应广广谱谱微微生生物物生生长长较好好的的澄澄明明度度，，较较小小的的粘粘度度可除除菌菌过过滤滤常用用培培养养基基：：3％％大大豆豆胰胰蛋蛋白白肉肉汤汤（（TSB））粉针针剂剂：：聚乙乙二二醇醇，，乳乳糖糖和和/或或肉肉汤汤粘稠稠的的乳乳膏膏剂剂：：混于于肉肉汤汤中中的的琼琼脂脂和和羧羧甲甲基基纤纤维维素素培养养基基促促生生长长能能力力灵敏敏度度试试验验取灌灌装装前前、、中中、、后后各各阶阶段段的的培培养养基基样样品品枯草草芽芽孢孢杆杆菌菌、、金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌、、白白色色念念珠珠球球菌菌、、绿绿脓脓杆杆菌菌、、黑黑曲曲霉霉菌菌、、环环境境菌菌每个个菌菌种种接接种种2支，，计计数数<100cfu/瓶20-25°°C/30-35°°C培养养5天天内内生生长长灌装装数数量量批次次量量足足够够大大灌装装量量一一般般5000~10000瓶瓶批量量小小的的(低低于于5000瓶瓶)以以全全批批数数量量灌灌装装环境境监监测测全面面、、全全过过程程检检测测对无无菌菌生生产产区区环环境境的的评评估估对人人员员资资格格的的确确认认(所所有有无无菌菌区区工工作作人人员员））环境境的的清清洁洁：：灌灌装装结结束束4小小时时内内收集集和和培培养养按灌灌装装的的先先后后顺顺序序轧轧盖盖翻转转接接触触所所有有表表面面培养养：：20-25度度7天天，，30-35度度7天天在中中间间转转换换温温度度和和培培养养结结束束时时100％％灯灯检检记录污染瓶数数记录丢弃的数数量和原因，，不得随意丢丢弃最差条件挑战战储存时间：灌装设备、灌灌装部件、储储罐、无菌物物料、药液在在实际灌装前前能够放置的的最长时间例1:用需需要再灭菌前前的灌装设备备、灌装部件件、储罐、无无菌物料参与与培养基灌装装例2:无菌过过滤后存放在在储罐内的培培养基到实际际生产时产品品的最大储存存时间后再灌灌装最差条件挑战战无菌灌装时间间在培养基灌装装中模拟用时时最长的瓶子子满批量生产产需要的时间间，其中包括括正常的干扰扰时间（换班班、设备维修修）灌装速度和瓶瓶子规格灌装速度和瓶瓶子规格的关关系最慢的速度，，最大的瓶子子规格最小的瓶子规规格，最快的的速度最差条件挑战战人员培养基灌装时时模拟无菌区区可能容纳最最多的人数无菌区工作人人员至少每年年参与一次培培养基灌装操作干扰正常的（灌装装线装配，称称量调节，加加胶塞，处理理倒瓶，取样样，环境监测测）非正常的（设设备故障，灌灌装线堵塞，，轨道调节，，拆卸/替换换破损的部件件）干扰的次数应应该不少于正正常生产时发发生的次数工艺气体使用氮气的，，因考虑其不不利于微生物物生长，以压压缩空气代替替培养基灌装失失败后的调查查不管批次量有有多大,只要要培养基灌装装中存在污染染就意味着无无菌保证有问问题设计合理、操操作适当的无无菌灌装污染染水平应为零零灌装瓶数结果判断<5000如有1瓶污染，调查并再验证5000~10000如有1瓶污染，调查并重复培养基灌装如有2瓶污染，调查并考虑再验证>10000如有1瓶污染，进行调查如有2瓶污染，调查并考虑再验证培养基灌装失失败后的调查查环境和人员监监测数据灭菌记录和设设备校验记录录灌装区域清洁洁消毒记录人员培训记录录高效过滤器完完整性测试记记录压差记录溶液除菌过滤滤器完整性测测试记录污染菌来源丢弃的培养基基灌装瓶灌装时的干扰扰活动其他偏差和干干扰活动3.5容器器密封性验证证目的：保证灭灭菌过程后和和产品有效期期内密封系统统的完整性密闭系统：安安瓿或容器/胶塞系统方法：物理方法：染染料检漏法，，盐水渗入法法，高压电极极检测机微生物检测法法：气溶胶法将灌装培养基基的压盖容器器放置在充满满微生物的气气溶胶腔室内内，保持一定定温度、压力力、湿度和时时间微生物浸泡法法将灌装培养养基的压盖盖容器倒置置在一定浓浓度的特定定微生物的的溶液内，，保持一段段时间微生物浸泡泡法操作步步骤菌液待确认密封口支架培养基容器选择试验菌菌种（大肠肠埃希氏菌菌、铜绿假假单胞菌、、粘质沙雷雷氏菌）制备菌悬液液一接种环置置10mlTSB中30-35度培养养16-18小时，，再置于1000mlTSB中培养22-24小小时，浓度度不小于106/ml准备灌装有有培养基的的西林瓶（（按正常程程序轧铝盖盖）试验：将铝盖去除除倒置于菌悬悬液中4小小时取出后消毒毒外表面培养7天，，每天观察察生长情况况培养基的阳阳性试验3.6粉粉针剂、冻冻干粉针、、小容量注注射剂工艺艺验证的异异同粉针剂冻干粉针小容量注射剂相同点遵循一般验证程序-设计，安装，运行，性能，产品基本范围相同：布局设计，建筑材质，环境级别，HEPA，工艺用水，纯蒸汽，清洗灭菌去热原设备及程序，气体系统，人员，包装，无菌工艺，产品工艺不同点无菌粉末的处理，分装机，培养基灌装程序冻干机，无菌过滤器洗烘灌封机，不一定是最终灭菌产品四、无菌工工艺的再验验证法规性和定定期性的再再验证计量器具（（每年一次次）培养基灌装装（每年两两次）高效效过过滤滤器器泄泄漏漏试试验验（（每每年年两两次次））关键键灭灭菌菌设设备备及及灭灭菌菌程程序序（（灭灭菌菌釜釜，，热热隧隧道道，，冻冻干干机机，，储储液液罐罐））（（每每年年一一次次））人员员（（每每年年一一次次））变更更引引起起的的再再验验证证变更更应应评评估估对对产产品品质质量量可可能能的的影影响响原料料，，包包材材工艺艺参参数数或或路路线线设备备改改变变或或重重大大维维修修处方方改改变变，，批批量量改改变变偏差差、、质质量量事事故故等等不同同品品种种共共线线生生产产的的验验证证要要求求评估估不不同同品品种种共共线线生生产产的的风风险险，，制制定定控控制制措措施施核心心是是防防止止交交叉叉污污染染制订订有有效效的的清清洁洁规规程程拆卸卸、、清清洗洗、、干干燥燥、、储储存存、、装装配配清洁洁剂剂的的选选择择清洁验证确定残留物限限度标准（化化学/微生物物）确定取样点和和检验方法日常监控和再再验证五、总结深刻理解工艺艺和产品特性性掌握验证基本本原理并科学学加以应用无菌工艺验证证包括工艺无无菌性验证和和产品验证9、静夜四无无邻，荒居居旧业贫。。。12月-2212月-22Thursday,December29,202210、雨中黄黄叶树，，灯下白白头人。。。14:05:2114:05:2114:0512/29/20222:05:21PM11、以以我我独独沈沈久久，，愧愧君君相相见见频频。。。。12月-2214:05:2114:05Dec-2229-Dec-2212、故人江海海别，几度度隔山川。。。14:05:2114:05:2114:05Thursday,December29,202213、乍乍见见翻翻疑疑梦梦，，相相悲悲各各问问年年。。。。12月月-2212月月-2214:05:2114:05:21December29,202214、他乡乡生白白发，，旧国国见青青山。。。29十十二二月20222:05:21下下午14:05:2112月月-2215、比不不了得得就不不比，，得不不到的的就不不要。。。。十二月月222:05下下午午12月月-2214:05December29,202216、行行动动出出成成果果，，工工作作出出财财富富。。。。2022/12/2914:05:2114:05:2129December202217、做前，能能够环视四四周；做时时，你只能能或者最好好沿着以脚脚为起点的的射线向前前。。2:05:21下下午2:05下下午14:05:2112月-229、没有失败，，只有暂时停停止成功！。。12月-2212月-22Thursday,December29,202210、很多多事情情努力力了未未必有有结果果，但但是不不努力力却什什么改改变也也没有有。。。14:05:2114:05:2114:0512/29/20222:05:21PM11、成功就是是日复一日日那一点点点小小努力力的积累。。。12月-2214:05:2114:05Dec-2229-Dec-2212、世间成事，，不求其绝对对圆满，留一一份不足，可可得无限完美美。。14:05:2114:05:2114:05Thursday,December29,202213、不知知香积积寺，，数里里入云云峰。。。12月