临床参考资料生化常用的色原及检测波长

PAGEPAGE6临床生化常用的色原及检测波长Toos545nm苯酚（对氯苯酚）505nmNAD（P）H340nm，项目：ALT、AST、GLUCCK、UREA、LDH等。苯衍生物类，波长400-410nm，如ALP、GGT、CHE等。过氧化物酶指示系统，项目：TG、TCH、HDL-C、LDL-C、UA等。（630～m、橙色0m、黄色0m、绿色0m、蓝色5m、紫色0m。★540nm：双缩脲测蛋白：所有蛋白质分子都含有肽键。在碱性溶液中，肽键与铜离子540nm计算蛋白质含量。Y燃料离解成阴离子型，染料的黄色消退，使试剂空白吸光度降低；另外，蛋白质多肽链中的精氨酸、组氨酸、赖氨酸和色氨酸残基，离解生成带－NH3+540nm处吸光度大小与蛋白质浓度呈比例。★628nm：1.PH4.2的缓冲液中，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚绿（BCG）628nm复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比。★603nm：1.溴甲酚紫法（BCP）测血清白蛋白：BCP溶于PH5.2的醋酸缓冲液中，呈黄色。当它与白蛋白结合后转变为绿色的符合物，在波长603出有最大吸收峰。★650nm：0.6mol/L米吐尔直接显色法测血清无机磷：利用无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷钼酸铵复合物，用还原剂对甲氨基酚硫酸盐（米吐尔）剂中加入吐温－80以抑制蛋白质的干扰。★604nm：1.邻苯三酚红钼络合显色法测脑脊液总蛋白：邻苯三酚红与钼酸络合形成红色复合物（m604nm。用比色法求蛋白质含量。★530nm：1.比浊法测脑脊液蛋白：脑脊液中蛋白质与磺基水杨酸－硫酸钠试剂作用产生530nm得蛋白含量。★415nm：1.HbA1cHb的亲和层析凝胶柱，是交联Hb分子上葡萄糖的顺位二醇基反应，形成可逆的五环化合物，致使样品中的糖化HbHb则被洗脱。然后用ftHb415nm分Hb的百分率。★550nm：1.N末端的氨1－脱氧－1550nm处进行比色。★340nm：PAPAPA340nmPAPA含量。尿微量白蛋白测定：尿液中的白蛋白与抗人白蛋白特异性抗体在缓冲液中反340nm中的白蛋白浓度。己糖激酶法测血清葡萄糖：在己糖激酶（HK）催化下，GluATP发生磷酸化反应，生成葡萄糖－6－磷酸（G-6-P）ADPG－6－D6（6－GNADPH。反应式如下：葡萄糖+ATP—HK—>G6P+ADPG6P+NADP—G6PD—>6PG+NADPH+H+NADPHNADPH340nm有吸收峰，检测吸光度升高速率，计算血清葡萄糖浓度。葡萄糖脱氢酶法测血清葡萄糖：葡萄糖脱氢酶（GDH）化生成葡萄糖酸（D－葡萄糖酸－&－内酯。B－D－葡萄糖+NAD+—GDH—>D－葡萄糖酸内酯+NADHNADH萄糖浓度成正比关系。NADNADH：L－乳酸NAD+—LDH—>丙酮酸NADHH+PH9.8340nm，监测吸光度的升高速率，计算乳酸含量。NAD+存在下，LDHNADH340nmNADH的生成量，计算乳酸的含量。NADHH+—LDHL－乳酸NAD+NADH本法适用于各种任选式自动分析仪。PH7.5条件下利于上述反应（成乳酸方向）血清测定：在有NADB脱氢酶（B－HBDH）催化下，生成乙酰乙酸（AcAc）NADH340nmB－羟丁酸的浓度。B－HB+NAD—B-HBDH—>AcAc+NADH+H+钾的酶法测定：磷酸烯醇丙酮酸（PEP）与二磷酸腺苷（ADP）在钾依赖性丙酮酸激酶（K）催化下，生成丙酮酸和三磷酸腺苷（。再在乳酸脱氢酶NADHNADNADH的消340nm以计算钾离子含量。反应式如下：PEP+ADP—K+,PK—>丙酮酸+ATP丙酮酸+NADH+H+—LDH—>乳酸+NAD+酶法测定血浆（血清）碳酸氢根及总二氧化碳：血浆（清）磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶催化下和磷酸烯醇式丙酮酸反应，生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸在苹果酸脱氢酶（MDH）催化下，生成苹果酸，NADHNAD+340nm处，吸光度下降速率与样品HCO3-含量成正比。反应式如下。磷酸烯醇式丙酮酸+HCO3-—PEPC—>草酰乙酸+磷酸草酰乙酸+NADH+H+—MDH—>苹果酸+NAD+340nm325nm波长处测定吸光度。ALT速率法测定中，酶偶联反应式为：丙氨酸+a-酮戊二酸—>丙酮酸谷氨酸丙酮酸+NADH+H+—LDH—>L-乳酸+NAD+上述偶联反应中，NADH340nm波长处检测吸光度下降速率（△nT的活力单位。★600nm：SephadexG-50凝胶过滤，除BPB经与同样显色的白蛋白标准液比较，可求得尿中白蛋白含量。甲基麝香草酚兰比色法测血清镁：血清中镁、钙离子在碱性溶液中能与甲基麝香草酚兰染料结合，生成蓝紫色的复合物，加入乙二醇双-N,N,N,N-可掩盖钙离子的干扰。★505nm：1.葡萄糖氧化酶法测血清葡萄糖：葡萄糖氧化酶（GOD）萄糖酸D－葡萄糖酸内酯，并产生过氧化氢：Glu2H2OO2—GOD—>2H2O2在色原性氧受体（如联大茴香胺、4－氨基安替比林偶氮酚）的存在下，过氧化505nm的葡萄糖浓度。★405nm：1.钠的酶法测定：邻硝基酚-B-D-半乳糖苷（ONPG）B-半乳糖苷酶405nm度，计算钠的浓度。★460nm：1.硫氰酸汞比色法测血清氯化物：标本中的氯离子与硫氰酸汞反应，生成极难色泽很深的橙红色硫氰酸铁，吸收峰在460nm，色泽强度与氯化物的含量成正比。Hg（SCN）22Cl-——>HgCl2+2SCN-3CNFe3Fe（SCN）3（橙红色）★610nm兰结合，声称蓝色的络合物。加入适量的8-羟基喹啉，可消除镁离子对测定的干扰，与同样处理的钙标准液进行比较，以求得血清总钙的含量。★575nm8-羟基喹啉以消除标本中镁离子的干扰。★640nm（钼蓝进行比色测定。★510nmCalmagite染料比色法测定血清镁：血清中镁在碱性条件下与Calmagite染料生成紫红色络合物，颜色的深浅与镁的浓度成正比。溶液中的EGTA可消除钙的干扰，使用表面活性剂可使蛋白胶体稳定，不必去除血清中蛋白质而直接测定镁。★562nm解离出来，再被还原剂还原成二价铁，后者与亚铁嗪生成紫红色化合物，在562nm处有吸收峰，可作比色测定。直接测定法应纠正血清本身的色度，故应设血清空白。总铁结合力（TIBC）是指血清中转铁蛋白能与铁结