性病实验室检测的技术标准和操作规程1

性病实验室检测的技术标准和操作规程[1]江干区人民医院性病实验室检测操作规程参照标准1、医疗机构性病门诊规范化管理资料汇编，2、试剂相关说明书2010.12.1目 录一、淋病检查的实验室技术 3(一)分泌物涂片检查 3（二）淋球菌的分离培养 6（三）淋球菌的保存 9（四）氧化酶试验 9二、支原体的检测 10三、衣原体检查 13四、梅毒的实验室检测 17(一)直接镜检 17（二）非特异性梅毒螺旋体试验 18五、TPHA梅毒螺旋体血凝试验 21一、淋病检查的实验室技术(一)分泌物涂片检查些脓细胞内可见革兰氏染色呈阴性的双球菌，椭圆或球形，常成双排列。因形态特殊，可取患者尿道分泌物制成涂片后染色，检查有无典型细胞内革兰阴性双球菌，可作为初步诊断的依据。标本采集涂片镜检油镜观察。结果在急性患者的尿道脓性分泌物革兰染色涂片中，常可见到大量红色多形核白细胞，有些细胞中吞噬有淋球菌。多数多形核白细胞中并不含淋菌，但不少细胞120~30于细胞浆内。比较少，有时呈单个、四联和八叠状，且常位于细胞外。注意事项2~3不推荐用涂片检查来诊断淋菌的直肠和咽部的方法评价感性和特异性。但其特异性随取材部位的不同而有所不同。男性尿道取材特异性较高，而从女性子宫颈取材特异性较低。因此，世界卫生组织不推荐用涂片法来诊断女性患者。革兰氏染色（一）操作步骤细菌涂片须经火焰固定。3-5秒，用自来水从玻片的一端冲去染液，甩干。3-5冲洗，甩干。在标本上，不出现蓝色或淡紫色为宜。5.用碱性复红复染，覆盖标本，3-5秒后，自来水冲洗，待其自然干燥或用吸水纸吸干，油镜观察。（二）淋球菌的分离培养如果标本中有淋球菌，则在合适的培养基上经培养后可长成菌落。各种细菌在培养基上生长的菌落形态色素和边缘的情况等，作为细菌鉴定的标准。方法（1）取材2.5cm以上，如果棉拭碰到粪便，应换一个棉拭重取。检查淋菌性咽炎时，应从扁桃体及扁桃体窝取材。为了提高阳性率，可同时取二份标本进行培养。培养基有动物蛋白及细菌和生长所需的多种因子。目前国内常用的是血液琼脂或巧克力琼脂。为抑制杂菌，在培养基中可加入少量抗菌素和淋球菌增菌剂，使大多数杂菌被抑制而淋球菌菌落长得较大，在平皿中几乎呈纯培养，从而提高分离的阳性率。培养条件力很弱。因此，取材后应立即接种。接种的平皿应先37℃温箱中预温。38.530℃便生长不良。最初从人体分离时，需用5%二氧化碳环境，为保持一定的湿度，可在培养缸中放些湿棉球。结果24~48形、凸起、浸润、光滑、半透明或灰白色菌落。边缘呈花瓣状，用接种环触之有粘性。如继续培养，菌落面积增大，表面变得粗糙，边缘出现皱缩。从菌落上四联形或八叠形。注意事项10~30少量粘膜，阳性率才高。（2）对症状不典型的男性患者，最好是在晨起排2~3取材。对女性淋病的检查主张用淋球菌培养。3624小时，菌落小，难以辨认其特征。超过36小时，菌落方法评价组织推荐筛查淋病患者的唯一方法，也是诊断淋病的金标准。（三）淋球菌的保存液琼脂上的培养物洗于无菌的脱脂牛奶中，存放于-252个月，于-701存于液氮中，可无限期保存。（70ml，12115分钟）0.5ml中，低温36℃培养过夜后37℃保存。使用时只需从斜面上刮下少许淋球菌进行传代培养，不必将石蜡倒376个月以上。（四）氧化酶试验色反应。1（盐酸二甲基对苯二胺或盐酸四甲基对苯二胺10ml小瓶，冰箱保存备用。2淋球菌特征的菌落，可在其上滴加氧化酶试剂一滴，10~15秒钟内出现红色并保30（最后变成黑色3察有无红色出现。菌落显红色为阳性。4菌氧化酶试验阳性，但氧化酶阳性的不全是淋球菌。为了保证有良好的反应，不要使用过分陈旧的氧化酶试剂，正常的氧化酶试剂应为粉红色，如试剂已成灰黑色，说明已失效而不应再使用。试剂配好后应避光保存并尽快用完，因此，每次不要多配。氧化酶试刘遇铁也会出现红色而造成假阳性，因此，操作用的接种环最好用铂丝做成，在用其它材料时应检查未挑菌落的接种环在接触沾有试剂的滤纸时是否有红色出现。二、支原体的检测支原体是介于病毒和细菌之间的一类无细胞壁,能用非活体细胞进行培养的最小微生物。人类支原体14感染的肺炎支原体，常引起泌尿生殖道感染的解脲支原体(UU)和人型支原体(Mh)。[实验室检查]一、标本采集燥很敏感，故宜及早接种。二、分离培养及鉴定解脲支原体含有脲酶，以尿素为能量来源，分解尿NH4+酸释放氨，在含有酚红指示剂的液体培养基中使培养基颜色由黄变红。三、设备及材料1、液体培养基内含牛心浸液，小牛血清，新鲜酵母浸膏，0.05%尿素，0.002%酚红和抗生素2、普通恒温培养箱四、操作50ulEPS观察结果。五、结果判断阳性：透明玫瑰红（或稍有混浊）也多为阴性。六、方法学比较支原体直接镜检的意义不大，其形态难与组织细胞或渗出液中的其它颗粒相区别，故不利于临床诊断。用特异性抗体鉴定支原体及血清学分型的方法有生长抑制试验、补体结合试验、荧光免疫反应，但是目前还没有理想的诊断支原体感染的血清学方法，确证必UUDienes染色后用光学显微镜观察才能看清楚。三、衣原体检查衣原体：是介于细菌与病毒之间的，专性真核细胞内寄生的原核细胞型微生物。其主要特征是具有独特的发育周期，在宿主细胞内能形成光学显微镜可见的15D~K型。实验室检查标本采集：标本选送的正确与否，直接影响到阳性分离率。因衣原体感染女性子宫颈柱状上皮细胞和男性尿道上皮细胞，为确保采集到足够的标本量，应将棉拭沿表面10-30本采集之前一小时内不应小便。采集时必须从上皮部位用力拭刮，脓性分泌物不适用于衣原体检查，应先清除后再采样。抗原检测：斑点免疫层析法原理：标本窗的吸收垫含有免疫金复合物（衣原体属特异性脂多糖表位和乳胶标记的单克隆抗体-IgG），测试区包被有特异的抗衣原体抗体，提取液使标本窗的免疫金复合物复溶，若待测物含有衣原体抗原则与之结合，并向膜条渗移，在测试区被固相抗体所获，显出反应线，过剩的复合物继续前行，IgG阴性标本，仅显示质控线。试剂准备6。A温放置，在处理过程中不断旋转并在管壁挤压拭2分钟。然后加入6滴溶液然后按感染物品的处理方法将拭子丢弃。60盒的检测结果。B等。操作程序请在操作前仔细阅读检测试剂盒说明书。2－3试剂盒的加样孔中。10线显示的时间根据拭子所采集衣原体含量的不同60为了确保阴性结果，请勿在15分钟后判读结果。结果：无红线出现。区（T）。属正常现象。临床意义：原体感染，但需结合临床症状全面考虑。注意事项：87%98.8%有一定量的抗原，提取的抗原量低于试验敏感性时可出现假阴性。故试验结果阴性时，不能完全排除有沙眼衣原体的感染，这与标体采集的数量不足有关。技术水平要求高。易把某些发光颗粒（白细胞、上皮细胞、色素颗粒）误认为沙眼衣原体。四、梅毒的实验室检测(Treponemapalidum)感染引.6-20um,宽0.09-0.18um前的实验室诊断主要有：皮肤黏膜损伤时用显微镜暗视野镜检，非梅毒螺旋体血清试验和特异性梅毒螺旋体试验。结合临床可对梅毒作出肯定、推断和提示三种判定。临床怀疑为梅毒的病人，一般先进行梅毒常规筛选实验。(一)直接镜检1、标本采取刺物或活检组织。三期梅毒取活检组织做检察。在硬下疳皮肤粘膜取材，需先用浸或生理盐水的棉花球轻轻檫去覆盖的枷皮，然后用玻片沾取渗出液。在淋巴再吸取少量淋巴液。取材后应立即送检。2、器材暗视野显微镜3、操作小而纤细，呈紧密规则的螺旋及特征性的螺旋状运动即可确诊。（二）非特异性梅毒螺旋体试验非特异性梅毒螺旋体试验包括性病研究实验室试验（venerealdiseaseresearchlaboratory不加热血清反应素试验（unheated serum reagintest,USR）和快速血浆反应素环状卡片试验（rapidplasmareagintest,RPR）。其原理是梅毒螺旋体可使被破坏的组织细胞释放类脂样物质，螺旋体自身释放亦产生类脂及脂蛋白。这些物质刺激机体产生抗体（IgGIgM）。这些抗体可与从牛心中提出的心磷RPR试验原理：种碳粒抗原与患者血清混合在一起后，可以与血清中抗心磷脂抗体起反应在白色纸卡上形成肉眼可见的黑色凝集颗粒。试剂：RPR试剂盒（试剂公司提供）方法：将待检血清及试剂用前放室温平衡50.2ml生理盐水溶解。吸取待检血清

在卡片圈内，并将血清用牙签或吸液嘴扩展到整个圆圈。RPR针头吸取抗原于每个血清圈内垂直加一滴。85）如有需要，阳性标本可做1:2 1:4 1:8 1:161:32结果判定：阳性反应：中等或大块黑色凝集块。弱阳性反应：散在的小黑色凝集块。阴性反应：黑色均匀分散无凝集块。必要时应再做TPHA试验确证。注意事项：1、本试剂应保存于2-8℃，效期一年。2比稀释，然后按上述方法进行试验，以呈现出明显凝集反应的最高稀释度作为该血清的凝集效价。3TPHA二期梅毒时，如出现弱反应和可疑反应，应将血清稀释，以排除“前带现象”。五、TPHA梅毒螺旋体血凝试验试验原理：化的鸡红细胞，对照血球为没有用上述抗原包被的经过醛化和鞣化的鸡红细胞，如果是阳性标本，当和致敏的鸡红细胞混合后，抗体和抗原的结合会引起致敏血球的凝集，在血凝板底部形成凝集块，如为阴性标操作方法：25ul（1滴）稀释液滴）稀释液滴稀释液。25ul，加在第一排的孔中。25ul移液器将加样后的第一排孔中的液体混匀后取出25ul加入第二排25ul25ul25ul25ul丢弃。25ul（1滴）75ul（1滴）45~60结果判断：者为阴性反应。光滑的纽扣状；±/可凝：细胞沉积在板孔