标本保存时间对HBV、HCV、HIV核酸检测的影响

标本保存时间对HBV、HCV、HIV核酸检测的影响摘要】目的：探讨标本保存时间对实时荧光PCR检测HBVDNA、HCVRNA、HIVRNA结果的影响。方法：将含高、中、低三种不同浓度HBVDNA、HCVRNA、HIVRNA的血浆标本，2-8℃保存0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d时间后采用实时PCR法，混检+HBVDNAHCVRNA、HIVRNA检测，对检测结Ct2-8℃1-7dHBVDNA、HIVRNA、HCVRNACt值差异无统计学意义(P>0.05)。结论:2-8℃条件下保存7天内HBV、HCV、HIV核酸检测结果不受影响。【关键词】保存时间、核酸检测、Ct值、影响EffectofpreservationtimeonnucleicaciddetectionofHBV,HCVandHIVCaiHuaying,LaiShipingZigongcentralbloodstationZigongcity643000[Abstract]Objective:TheeffectofpreservationtimeontheresultsofHBVDNA,HCVRNAandHIVRNAdetectedbyreal-timefluorescencePCRwasinvestigated.Methods:Theplasmasamplescontaininghigh,mediumandlowconcentrationsofHBVNA,HCVRNAandHIVRNAwerepreservedat2-8℃for0,1,2,3,4,5,6,and7days.TheresultsofHBVNA,HCVRNAandHIVRNAweredetectedbyreal-timefluorescencePCR,andtheCTvaluesoftheresultswerecomparedandanalyzed.Results:TheCvalueofHBVDNA,HIVRNAandHCVRNAinplasmasamplesstoredat2-8Cfor1-7dayshadnosignificantdifference(P>0.05).Conclusion:thedetectionresultsofHBV,HCVandHIVnucleicacidswerenotaffectedduring7daysofstorageat2~8℃.Keywords:preservationtime,nucleicaciddetection,Ctvalueandinfluence[中图分类号]R2 [文献标号]A [文章编号]2095-7165（2018）22-0015-022015PCR扩增检测技术,术能让酶免疫检测方式的窗口期有效缩短，有效检出各种因素引起的漏检，让输血感染病毒的概率降低[1]。虽然..核酸检测（NAT）技术灵敏度高、特异性强，具有缩短检测窗口期的能力，但受标本影响因素多，保存、处理不当，会造成病毒核酸的降解，有可能引起假阴性，从而影响检测结果的准确性。由于不同实验室检测系统和试剂，管理模式不同，用于核酸检测的标本的关键控制点不同，本2-8℃HBV、HCV、HIV核酸检测的影响进行分析，现报道如下：1、材料与方法标本的收集与处理201811日—531日本站献血者乙肝病毒（HBV）、丙肝病毒（HCV）、艾滋病毒（HIV）血清学和核酸检测均呈阴性的血浆。HBVDNA、HCVRNA、HIVRNA5mlEDTA-K2的惰性分离胶管内，立即离心分离血浆。检测样本的制备将阳性血浆用血清学和核酸检测均呈阴性的血浆稀释制成含高、中、低三种不同浓度HBVDNA、HCVRNA、HIVRNA标本。仪器和试剂仪器DA3000全自动核酸提取仪、AFD9600型核酸扩增仪、医用冷冻离心机、医用冷藏箱。试剂乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒人类免疫缺陷病毒（1型）核酸检测试剂盒（厂家：中ft大学达安基因股份有限公司，批号：2017003，效期：20181119），HBV/HCV/HIV核酸血清液体质控品（厂家：广州邦德益生物科技有限公司，批号：2017003，效期：20190407）。HBVDNA、HCVRNA、HIVRNA标本等8份放置于真空采血管中，2-8℃保存（15份）0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d7dPCR法在中ftDA3000核酸检测系统上进行检测，检测模式为混检+单检。混检模式为7份经血清学和核酸1份混合标本，在DA3000AFD9600型核酸扩增仪上进行混样、提取、扩增：混Ct值<40Ct值>40，需对该份标Ct值<40Ct值>40表示该份标本未检出。SSPSt检验，P<0.05认为差异有统计学意义。结果HBVDNA2-8℃71。12-8℃HBVDNACt值讨论般都存放在2-8℃冰箱内待检。但由于靶核酸（尤其是RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，[2],特别是弱阳性标本，靶核酸浓度降解到检测系统灵敏度以下，会检测不出，影响检测结果。所以在日常检测工作中，我们必须要考虑保存时间对核酸检测的影响，以免靶核酸在2-8℃2-8℃HBV、HCVHIVRNA核酸检测的影响。保存时间对于HCVRNA检测的影响，据报道[3]，在保存温度为4℃的条件下，保存72小时内，HCVRNACt值差异均无统计学意义，但在保存1-4Ct值明显[4]9HCVRNA4℃7d内，HCVRNA的含量没有出现显2d后标本的浓度开始下降。我们的结果显示7dHCVRNACt值差异不大，无统计学意义，但随着保存时间的延长，检测CtRNA2-8℃保存过程中，浓度可能在下降。DNA病毒科，主要的传播途径是血液传播，输入极少量有病毒的血液或血制品即可导致感染。用实时荧光PCRHBVDNA的众多影响因素中，样本储存[5]，样本的储存因素在实时荧光ＰＣＲ对乙肝ＤＮＡ检测38.1%的比例，因此样本储存条件直接影响到HBVDNA的稳定性。对于HBVDNA[6]4℃7天内，HBVDNA的稳定性不受时,[7]4℃25℃4h4周，HBVDNA检测循环阈值（Ct值）差异均无统计学意义。本研究显示，标本在2-8℃7dHBVDNA检测结果DNA2-8℃7d内检测结果不受影响。RNARNA测定，标本的保存方式对测定结果，可能有决定性影响[1]HIVRNA2-8℃7d[8],HIVRNA25℃4h4周，HIVRNA检测循环阈值值）差异[7]。本文只对纯化前标本的储存做了研究，结果显示标本在2-8℃保存7d内HIVRNA[9[10]]HIV-1比较稳定的结论一致。因此，HIVRNA2-8℃7d内，检测结果不受影响。4HCV、HIVRNA2-8℃保存过程中，不论浓度的从上面的结论可以看出，献血者血液筛查标本中HBV、HIVHCVRNA2-8℃保存7d内检测，其检测Ct值均无统计学意义。HCVRNACt值有逐渐增大的趋势，在考虑检测时限时应综合考虑三种病毒的稳定性,期的标本，其浓度很低，如果保存时间过久，核酸降解，有可能检测不出，从而导致含有病毒的血液进入临床，引起输血感染。4、参考文献：彭小华，李丽平，欧阳刚，等．核酸检测技术在血液筛查中的应用研究血杂志，2015，28(6):717-720PCR[M]..2015:65庄养林，熊丽红等，标本因素及保存条件对HCVRNA[J].实验与检验医学2017，35（2）：228-230[J].血杂志，2012，25（06）：530-533PCRDNA[J].7473-7473马岩，姚继莹，标本保存时间、温度对荧光定量HBVDNA[J].国际免疫学杂志，2016，39（2）：149-151庄养林等，溶血、脂肪血及保存条件对HBV、HIVRNA[J].天津医药，2017,45（10）：1025-1028HCVHIVRNA2-8℃[J].世界最新医学信息文摘，2017,89:261-262MeiniG，MaterazziA,Saladinial.StabilityofunfrozenwholebloodDNAforremotegenotypicanalysisofHIV-1coreceptortropism［J］.BMCInfectiousDiseases，2013，13（1）：508-512.Doi:10.1186/1471-2334-13-508.