第六章分子杂交技术_第1页
第六章分子杂交技术_第2页
第六章分子杂交技术_第3页
第六章分子杂交技术_第4页
第六章分子杂交技术_第5页
已阅读5页，还剩24页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

第六章分子杂交技术第一节探针的选择和标记第二节杂交和洗膜第三节检测与分析1、原理碱基互补配对探针（probe）

同特异性目标作用有效检测2、基本步骤探针的选择和标记转膜预杂交、杂交洗膜检测第一节探针的选择和标记1、克隆探针和合成的寡核苷酸探针特异性灵敏度杂交时间2、寡核苷酸探针的类型和应用特定序列的单一寡核苷酸探针较短而简并性较高的成套的寡核苷酸探针对少量高度纯化的蛋白质进行测序；按照遗传密码推导较长而简并性较低的寡核苷酸探针①只含有所有可能密码中的一部分②简并位点上带上一个“中性”碱基，如次黄苷酸例：根据氨基酸序列选择长17个核苷酸的寡核苷酸探针

数目2×2×2×4=323、寡核苷酸探针的选择原则长度18-50bpG、C碱基组成在40%-60%分子内不存在互补区避免在序列中连续出现一个碱基的多次重复4、探针的标记方法双链DNA探针的制备

切口平移；随机引物（光盘）

使用前变性；杂交过程中可能发生自退火单链DNA探针的制备

在单链模板上进行引物延伸反应；化学合成；PCR单链RNA探针的制备双链DNA的切口平移标记法DNA的随机引物标记法back酶切位点要选择在正好处于插入的目标DNA的下游使转录产物不含载体序列

利用体外转录体系产生单链RNA探针5、标记物的选择放射性同位素非放射性同位素地高辛（Digoxigenin）-11-dUTP的结构第二节杂交和洗膜1、杂交的速率与探针长度及复杂性示t1/2和杂交探针长度之间的关系2、杂交的最适条件杂交分子的稳定性温度杂交的严紧性

高温/低盐第三节检测与分析非放射性DNA标记和检测程序例：转基因植物的检测抗生素筛选、PCR、Southern、Northern、Western双酶切检测单酶切检测R0代转化子的Southern分析转化子R1后代的Southern分析如何判断插入拷贝数？①与含有不同拷贝数（1、5、10）的质粒杂交结果做对照②通过多个单酶切结果判断通过选择酶切位点和探针位置，可进行comprehensive杂交，以判断外源插入片段是否串联排列，以及排列方向原位杂交（insituhybridization，ISH）利用含有互补序列的DNA或RNA探针直接检测在染色体、细胞或组织内特定DNA或RNA序列的技术广泛应用于检测染色体的结构变异、外源染色体的渗入和转基因的分子细胞遗传学鉴定等荧光原位杂交（fluorescenceinsituhybridization，FISH）习题1

某人在做Southern杂交时，为节省时间，完成凝胶电泳后，未经NaOH溶液浸泡凝胶，就直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上，然后应用标记探针杂交，结果发现放射自显影后胶片上一片空白。请问应如何解释这一结果。习题22个正常个体生育一个患有唐氏综合症（21号染色体三体）

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 辅导培训

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论