现代仪器分析-课件9-高效液相色谱法

9.1

9.5

2013-06- 94高效液相色谱方法各按分离机制，可将HPLC分为liquid-solidadsorptionliquid-liquidpartitionion-pairion-exchangeionstericexclusionaffinity应用：粒度：5~10μm2013-06- 9-5-色谱柱：Nucleosil300-5Macherey-Nagel)；柱温：25℃检测器：DAD；检测波长：475流速：1mL/2013-06- 正相色谱（normalphase乙醇、四氢呋喃、氯仿（调节α）；反相色谱（reversedphase反相四溶剂系统：水（调节k）； 待测物极性2013-06-

9化学键合固定相：将各种不同功能分子通过化学反应键合 最常用的是ODS（OctaDecyltrichloroSilane）柱或C18柱 硅氧碳键型：≡Si—O—

硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si—硅碳键型：≡Si—硅氮键型：≡Si— 十八烷基氯硅

ODS（C18）键合 ；5-苯甲酸甲酯；6-甲 2013-06- 极性固定聚乙二醇、氨基、基键合相对非极性流动正已烷、环已极性调节乙醇、四氢呋喃、三分离中等极性和极性异构酚类、胺类、羰基类组分流出顺极性小先流非极性固定C18（ODS）、极性流动水或缓冲极性调节甲醇、乙腈、四氢呋分离非极性和极性较同系占整个HPLC应用的80%左组分流出顺极性大先流CL心磷脂；PECL心磷脂；PE脑磷脂；PI磷脂酰肌醇；PSPC卵磷脂；SM鞘磷脂；LPC色谱柱：ZorbaxRx-SIL（250mm×4.6mm,5μm）固定相 流动相：甲醇-甲基叔丁基柱温30℃流速 紫外检测波长容量因子k容量因子k随KXY和[Y-]色谱仪：Agilent1100液相，PickeringPCX5200柱后衍生系统 资生堂CapcellPakMG-C18柱（150mm×4.6mm,5μm）流动相流速 进样量：20μL时间0时间0流动相流动相离子对试剂：辛烷磺酸衍生剂：邻苯 荧光检测器条件：激发波长λEX=330nm，发射波长λEM=465nm；衍生剂流速柱温：40℃；衍生反应池温2013-06- 标准谱图（标准谱图（5.0组胺组胺精胺酪胺腓精胺Agmatine；内标1,6-尸胺Cadaverine；亚精胺Spermidine 腐胺Putrescine2013-06- 鱿牡对有 阳离子交阴离子

:R-SO-HMRSO-MH :R-NROHXRNRXOH [XR]s[Y K[

[X

[X

EX[YKEX愈大，表示溶质离子X KEX愈大，表示溶质离子X对阳离子，滞留顺序为：Fe3Ba2Pb2>Sr2>Ca2Ni2+>Cd2+>Cu2+>Co2+>Zn2+>Mg2+>UO22+>Tl+>>Cs+>Rb+>K+>NH4+>Na+>H+>HSO4->NO3->CrO42->Br->SCN->Cl->HCOO->CH3COO->OH->F-2013-06- 离类简树脂基官能阳离强阳离子交换磺化聚苯乙-弱阳离子交换羧酸聚，丙烯酸-阴离强阴离子交换季铵聚苯乙-弱阴离子交换聚胺聚苯乙烯或酚-表面多孔型(包括薄膜型）离子交换树脂；2013-06- 微微微 惰性惰性 表面多孔2013-06- 色谱柱：SpherisorbSAX(2504.6mm5μm)流动相：0~1.5MNaCl梯度洗脱，流速1ml/min半(流动相：0~2.5MNaCl梯度洗脱，流速

O

O

O

3O3O

O

O

3O3OO

3O3+O

O

O

3O3O

O

O

C

C33

O

3OH3

OHOSO

3OH3自由基降 肉参硫酸软骨素的机洗脱后的组分缺乏灵敏、快速的 R+—OH+HCl（流动相）——R+—Cl-+H2OR+—OHMCl（待测物）——R+—Cl-M+OH-2013-06- DIONEX-3HPO4色谱泵 2013-06-

分 23HPO4Mg2+例，IC色谱仪：DIONEXICS-色谱柱：IonPacAG11)+淋洗液：0~4min4~15min,30-15.01~30mmol

单磷酸

焦磷酸

三聚磷酸a未加b10minc30mind270mineKVeVOS

CSMVe—溶质洗脱体积，Vo—凝胶颗粒间体积，Vs—孔穴中溶剂体积类类材型特流动软性凝胶葡萄糖凝溶胀,小分子分水聚苯乙Bio-head-半刚性凝胶聚苯乙溶胀较流速较聚乙酸刚性凝玻璃珠CPG-10刚性大、高流速分和多孔硅和 等2013-06- 可对相对分子质量在100~8×105范围内的化合物按质量不能分离大小相似、相对分子质量差别小于10%的分子海地 白乳 蝶 色谱柱：TSK-gelG4000PWxl流动相：0.2mol/LNaCl保留，无此作用的则被洗出；随后，改变流动相pH或组。。2013-06-胞嘧啶核苷酸动相：NaCl+Na3PO4(pH6.5)程序升温：8℃至44水中 中溶解2013-06-

各种HPLC方法的应用范围及对溶于水溶于水——排阻色谱，水为流动相对分子质 不溶于水——排阻色谱，非水流动同系物——分配色样相对分子质异构体——吸附色分子大