免疫学检验知识点

1.免疫学(Immunology)是争论免疫系统的构造与功能，并通过对其在免疫应答过程中所产门现代医学学科。免疫学技术对推动免疫学的进展及根底与临床免疫学的结合起了重要作用学与免疫技术的重要保障。第一节免疫学简介1.免疫〔immunity〕是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能。免疫系统与机体的其他系统相互协作，相互制约，共同维持机体在生命过程中的生理平衡。一、免疫学概念与免疫应答宿主体内的免疫系统能识别并去除从外环境中侵入的病原生物及其产生的毒素、内环境中因基因突变产生的肿瘤细胞、自身年轻残损的组织细胞或自身变性抗原，实现免疫防范、免疫自稳、免疫监视。免疫防范——指机体排斥外源性异物的力量。定。免疫监视——指机体杀伤和去除特别突变细胞的力量，以监视和抑制恶性肿瘤在体内生长。免疫应答反响immunerespons：并以排出或分解该抗原为目的的反响过程。免疫应答的过程主要分为：识别阶段〔recognitionphase〕——抗原识别处理传递信息活化阶段〔activationphase〕——免疫细胞活化增殖产生效应细胞、分子效应阶段〔responsephase〕——执行效应功能免疫应答效应大多为生理性，是机体对外来抗原或自身变性抗原的去除效应。免疫应答反响过强时，可致机体组织或器官发生病理损伤，消灭临床疾病。二、免疫组织与器官免疫系统(immunesystem)由免疫器官、免疫细胞和免疫分子构成。淋巴组织及免疫细胞官按功能不同，分为中枢免疫器官和外周免疫器官。中枢免疫器官是免疫细胞产生、分化和成熟的场所。外周免疫器官是免疫应答的场所。单核细胞和淋巴细胞经血液循环及淋巴循环，进出于外周淋巴组织及淋巴器官，形成机体免疫系统的免疫网络。通过免疫网络，免疫细胞能准时到达机体各脏器及皮肤粘膜的病原微生物入侵部位，又能将机体各部位的抗原成分经抗原递呈细胞携带至相应淋巴组织及淋巴器官T淋巴细B〔一〕中枢淋巴器官：骨髓:是造血干细胞生成、分化发育的场所；是功能性B细胞分化成熟的唯一场所；供给各种免疫细胞的前体细胞；T胸腺:T〔二〕外周淋巴器官：淋巴结、脾脏、粘膜相关淋巴组织〔扁桃体、阑尾等〕〔三〕淋巴细胞再循环与归巢被抗原激活的淋巴细胞引流入局部淋巴组织及器官，在T细胞、B细胞、抗原递呈细胞(antigenpresentingcells,APC)间发挥协同的免疫应答，产生的效应淋巴细胞定向地迁移于病原异物部位，发挥免疫效应功能。外周免疫器官及外周淋巴组织既是淋巴细胞再循环的起点和中途站，也是淋巴细胞归巢节。三、免疫细胞免疫细胞：凡参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞统称为免疫细胞，按免疫细胞在体内的作用不同分为三大类。淋巴细胞——TBNK〔能增殖分化并产生免疫效应〕免疫关心细胞——吞噬细胞、树突状细胞〔DC〕〔参与关心淋巴细胞的活化〕〔参与免疫应答的某一环节〕四、免疫分子免疫分子是由一些免疫活性细胞或相关细胞分泌的蛋白质及小分子多肽物质组成参与机体的免疫反响或免疫调整。Ig〔CA、白细胞分化抗原〔CD〕其次节临床免疫学1.临床免疫学(clinicalimmunology支学科的总称。第三节临床免疫学与免疫检验1.免疫学检验〔laboratoryimmunology〕是争论免疫学技术及其在医学检验领域的重要学科。2.抗原抗体反响:指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反响。物质根底:①抗原表位与抗体高变区间的互补结合②抗原表位与抗体高变区的沟槽分子外表的结合③抗原抗抗原抗体结合力：静电引力、范德华引力:作用最小、氢键:最具特异性、疏水作用力:亲和力(affinity)：抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原打算簇之间相适应而存在着的引力，是抗原抗体间固有的结合力。亲合力(avidity)：抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度。亲水胶体转化为疏水胶体：抗原抗体反响的特点：⑴特异性：抗原与抗体结合反响的专一性，分子根底——抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性⑵可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在肯定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性，影响因素：①抗体对相应抗原的亲合力－亲合力越高，结合越结实，越不易解离；②环境因素对复合物的影响－pH、离子强度。⑶比例性：抗原与抗体发生可见反响需遵循肯定的量比关系，前带(prezone)：抗体过量后带(postzone)：抗原过量等价带(equivalencezone)：抗原抗体比例适宜反响慢，消灭凝集、沉淀和细胞溶解等现象。穿插反响crossreaction位，可与彼此相应的抗血清发生反响。影响抗原抗体反响的因素：⑴抗原、抗体反响物的自身因素：①抗原:理化性状、表位种类和数目②抗体:来源、特异性、亲和性、效价⑵环境因素：①电解质:生理盐水或缓冲液②酸碱度:pH6～pH9③温度:15℃～40℃，37℃最适标记免疫技术：用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物质等标记抗原或抗体，进展抗原抗体反响后，通过检测标记物对抗原或抗体进展定性、定位或定量分析⑴按实际用途分为:①免疫组织化学技术(immunohistochemistrytechnique,IHCT)②免疫测定(immunoassay)⑵按测定反响体系的物理状态分为:①均相免疫测定(homogenousimmunoassay〕②非均相免疫测定(heterogenousimmunoassay)⑶按检测现象分为:①放射免疫技术 ②荧光免疫技术③酶免疫技术 ④化学发光免疫技术⑤金免疫技术9.第一节免疫原的制备免疫原(immunogen)是能诱导机体产生抗体并能与抗体发生反响的物质。类型：①颗粒性抗原－细胞、细菌、寄生虫②可溶性抗原－蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、核酸颗粒性抗原的制备细胞抗原：绵羊红细胞细菌抗原：菌体抗原、鞭毛抗原寄生虫体抗原：虫卵可溶性抗原的制备和纯化⑴可溶性抗原的制备①组织细胞抗原的制备：高速捣碎法－组织捣碎机捣碎研磨法－用玻璃匀浆器或乳钵研磨②组织细胞或培育细胞可溶性抗原的制备：反复冻融法－-20℃冻结，然后室温溶化超声裂开法－超声波〔1～20kHz〕自溶法－自身酶系酶处理法－溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶外表活性剂处理法－SDS、去氧胆酸钠、二乙基十六烷基溴⑵免疫球蛋白片段的制备：非共价键解离法－转变pH、利用强变性剂共价键解离法－氧化法和复原法溴化氰裂解法酶解法－木瓜酶、胃蛋白酶可溶性抗原的纯化⑴超速离心法：差速离心法－低速和高速离心交替进展密度梯度离心法－区带离心法⑵选择性沉淀法：核酸去除法－氯化锰、硫酸鱼精蛋、链霉素盐析法－硫酸铵、硫酸钠有机溶剂沉淀法－乙醇、丙酮聚合物沉淀法－聚乙二醇⑶凝胶过滤法：利用凝胶的分子筛作用，对分子量不同的蛋白质进展分别⑷离子交换层析法：利用蛋白质带电荷不同进展分别⑸离子交换剂：离子交换纤维素、离子交换凝胶、离子交换树脂亲和层析法：利用生物大分子之间具有的专一性亲和力(1)亲和层析支持物的选择：①非特异性吸附低；②液体流速快；③在各种pH④有适宜丰富的化学基团，与蛋白质或其它化合物结合；⑤有丰富的微孔，以增加结合容量。最常用的支持物是Separose4B(2)配体的选择条件：①抗原或抗体必需单一特异性；②抗原与抗体必需具有较高的亲和力；③配体必需有一个适当的化学基团。(3)抗原或抗体与支持物的结合：①活化：溴化氰；物琼脂糖、疏基琼脂糖。(4)亲和层析条件的选择：①封闭活性基团：用无关蛋白质或三乙醇胺过柱；②除去未结合和结合不牢的蛋白：先用NaHCO3洗脱，再用解脱剂处理；解脱剂：3mol/L硫氰酸钾〔或钠、0.1mol/LpH2.4电泳法：利用分子量和电荷量不同进展分别〔二〕纯化抗原的鉴定蛋白含量测定：紫外吸取法、双缩脲法、酚试剂法分子量测定：SDS-、凝胶过滤纯度鉴定：醋酸纤维膜电泳、SDS-、毛细管电泳、等电聚焦、高效液相层析免疫活性鉴定：双向免疫集中、免疫电泳、ELISA三、半抗原性免疫原的制备半抗原(hapten载体(carrier)：赐予半抗原以免疫原性的物质〔一〕载体①蛋白质：牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白牛甲状腺球蛋白血蓝蛋白②多肽聚合物：多聚赖氨酸〔polylysine〕③大分子聚合物：羧甲基纤维素(carboxymethylcellulose,CMC)聚乙烯吡咯烷酮〔polyvinylpyrrolidone,PVP〕〔二〕半抗原与载体的连接方法①物理方法：利用通过电荷和微孔吸附半抗原吸附的载体有CMC、PVP、硫酸葡聚糖等②化学方法：利用某些功能基团将半抗原连接到载体上带有游离氨基或羧基以及两种基团都有的半抗原：碳二亚胺法戊二醛法混和酸酐法过碘酸氧化法不带氨基和羧基的半抗原：用化学方法使其转变为带有游离氨基或游离羧基的衍生物，再与载体连接〔三〕半抗原性免疫原的鉴定20半抗原与载体的比例测定：吸取光谱分析法 放射性核素标记半抗原渗入法其次节免疫佐剂免疫佐剂immunoadjuvanadjuvan。一、佐剂的种类-80、弗氏不完全佐剂以及人工合成的多聚肌苷酸∶胞苷酸(polyI∶C)、脂质体生物制剂:处理改造的细菌及代谢产物，如卡介苗、短小棒状杆菌、百日咳杆菌及CTB、LPSA、胞壁酰二肽等；细胞因子及热休克蛋白用于人体的佐剂：氢氧化铝、明矾、polyI∶C、胞壁酰二肽、细胞因子、热休克蛋白常用于动物试验的佐剂：弗氏佐剂(Freund’sadjuvant)弗氏佐剂(Freund,sadjuvant)：弗氏完全佐剂－羊毛脂与液体石蜡的混合物弗氏不完全佐剂－弗氏完全佐剂加卡介苗乳化方法：研磨法和搅拌混合法二、佐剂的作用机制转变抗原物理性状，延缓其降解和排解，更有效刺激免疫系统。刺激单核-吞噬细胞系统，增加其处理和提呈抗原的力量。刺激淋巴细胞增殖和分化。第三节抗血清的制备抗血清的制备是将制备好的免疫原依据肯定的免疫程序接种给所选择的动物B细胞克隆被激活并产生针对某一抗原多种不同表位多克隆抗体(polyclonalantibody,pcAbB体的混合物一、免疫动物的选择抗原来源与动物种属的关系种属差异越远，免疫原性越强动物个体的选择适龄、安康、体重符合要求抗原的性质二、免疫程序免疫原的剂量中间剂量范围内，免疫原剂量增加可获得高效价抗体免疫间隔时间10～207～10免疫途径皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结三、动物采血法颈动脉采血法：家兔、绵羊、山羊心脏采血法：家兔、豚鼠、大鼠、鸡静脉采血法：家兔、山羊、绵羊一、抗血清的鉴定抗体特异性的鉴定：双向免疫集中法抗体效价的鉴定：凝集试验、双向免疫集中试验、ELISA抗体纯度的鉴定：SDS-、双向免疫集中试验、免疫电泳抗体亲合力的鉴定：平衡透析法、