基因工程的操作程序（第3课时）【高效课堂+备课精研】 高二生物 课件（人教版2019选择必修3）

基因工程的基本操作程序（第三课时）——基因工程的核心1.目的（1）使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代（2）使目的基因能够表达和发挥作用阅读P80第二段内容，思考基因表达载体由哪些部分组成？试结合P72图3—4质粒的结构画出基因表达载体模式图，标注各组成部分的名称。第二步：基因表达载体的构建2.基因表达载体组成及其功能注意：目的基因必须插入到________与________之间。终止子RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。DNA复制的起始位点便于重组DNA分子的筛选控制特定性状或表达特定产物终止目的基因的转录启动子3.基因表达载体构建的流程①用一定的限制酶切割载体，使其出现一个切口，露出黏性末端。②用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段。③利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处，形成重组DNA分子目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程

转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。不同生物的导入方法各不同转化的实质是将目的基因整合到受体细胞基因组中第三步：将目的基因导入受体细胞1.花粉管通道法①用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中；②在植物授粉后一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴在花柱切面，使目的基因通过花粉管通道进入胚囊。农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。Ti质粒上的T-DNA可以转移到被侵染的受体细胞，并将其整合到该细胞染色体的DNA上。2.农杆菌转化法

原理：结合视频资料，对照P81图解思考农杆菌转化过程步骤，可分哪几个阶段？农杆菌转化过程：

________插入Ti质粒的_______中形成含目的基因的重组Ti质粒将含目的基因的重组Ti质粒导入_________农杆菌目的基因T-DNA①构建表达载体②转入农杆菌目的基因插入植物细胞中的__________上染色体DNA

③导入植物细胞

④表现出新性状的植株愈伤组织幼苗新性状植株含目的基因的植物细胞脱分化再分化移栽

目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上；被插入目的基因的T-DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上。将含目的基因的重组Ti质粒导入农杆菌含目的基因的T-DNA导入受体细胞

注意过程中的“两拼接”“两导入”的指代两次拼接两次导入3.将目的基因导入动物细胞——显微注射法

受精卵构建基因表达载体早期胚胎培养获得具新性状的转基因动物显微注射胚胎移植4.将目的基因导入微生物细胞一般先用Ca2+处理大肠杆菌,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,后再将重组的基因表达载体导入其中检测转基因生物染色体DNA上是否插入目的基因检测目的的基因是否转录出了mRNA检测目的基因是否翻译成蛋白质分子检测抗虫鉴定抗病鉴定活性鉴定个体生物学水平的鉴定DNA分子水平RNA分子水平蛋白质分子水平PCR核酸杂交检测抗虫接种实验抗原-抗体杂交第四步：目的基因的检测与鉴定核酸杂交检测法原理：碱基互补配对原则过程：③使探针和转基因生物的DNA（或mRNA）杂交,若显示出杂交带,表明目的基因已插入染色体DNA中（或目的基因转录出了mRNA）①提取转基因生物的DNA②制作基因探针：用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记。抗原-抗体杂交从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原-抗体杂交，若有杂交带出现，表明目的基因已形成蛋白质产品。抗虫、抗病或活性鉴定通过抗虫或抗病的接种实验。有的基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较。获取质粒噬菌体等载体筛选和获取目的基因用限制酶切割载体和含有目的基因的DNA片段，然后用DNA连接酶连接，构建基因表达载体将含有目的基因的表达载体导入受体细胞检测和鉴定目的基因是否稳定维持和表达其遗传特性

基因工程的基本操作程序1.下列关于基因的叙述中正确的是A.基因在DNA双链上成对存在

B.基因中含有遗传密码C.基因位于DNA分子上D.基因由四个脱氧核糖核苷酸分子组成C2.有关基因工程的叙述正确的是A.限制酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成在细胞内完成C.质粒都可作为运载体

D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料D3、以下说法正确的是A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D、基因控制的性状都能在后代表现出来4、不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNACD3.下列关于基因表达载体的叙述不正确的是A.启动子是与RNA聚合酶识别和结合的部位，是起始密码B.启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对mRNA的转录起调控作用C.标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选D.基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别A4、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是A、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达C5．在受体细胞中能检测出目的基因是因为A.目的基因上有标记

B.重组质粒能够复制

C.质粒具有某些标记基因D.以上都不正确C6.下列有关体内DNA复制与PCR技术比较的叙述，错误的是(

)A.二者子链的延伸方向相同，均为5′端→3′端B.二者均需要解旋酶破坏氢键来实现解旋C.体内DNA复制需要能量，PCR反应也需要能量D.二者遵循的碱基互补配对原则相同B(1)获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的__处，DNA连接酶作用于__处。（2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和_______________法。（3）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的___