《DNA重组技术的基本工具》试题库2

《DNA重组技术的基本工具》试题库题组11.限制酶切割DNA时()。A.专一识别特定的核苷酸序列B.切断的是碱基对之间的氢键C.任意切割,没有特定的核苷酸序列D.识别多种核苷酸序列,但切口只有一个解析:限制酶发挥作用时的特点是具有专一性,一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列。答案:A2.属于“分子缝合针”的是()。①E·coliDNA连接酶②T4DNA连接酶③DNA聚合酶④解旋酶⑤RNA聚合酶A.①②③ B.①②C.①②⑤ D.②④答案:B3.能催化磷酸二酯键形成的酶有()。①E·coliDNA连接酶②T4DNA连接酶③DNA聚合酶④解旋酶⑤RNA聚合酶A.①②③ B.①②③④C.①②③⑤ D.①②③④⑤解析:DNA连接酶和DNA聚合酶都能催化形成磷酸二酯键,不同之处是DNA连接酶连接的是DNA片段,而DNA聚合酶连接的是单个脱氧核苷酸;RNA聚合酶也可催化磷酸二酯键的形成,在转录过程中可将单个核糖核苷酸连接形成mRNA。解旋酶的作用是将DNA两条双链的氢键解开。答案:C4.下图为DNA分子的某一片段,其中①②③分别表示某种酶的作用部位,则相应的酶依次是()。连接酶、限制酶、解旋酶B.限制酶、解旋酶、DNA连接酶C.解旋酶、限制酶、DNA连接酶D.限制酶、DNA连接酶、解旋酶解析:使碱基对内氢键断裂的是解旋酶;限制酶能将特定部位的相邻两脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键断开;连接DNA片段间磷酸二酯键的是DNA连接酶。答案:C5.下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述,错误的是()。①一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列②限制性核酸内切酶的活性受温度影响③限制性核酸内切酶能识别和切割RNA④限制性核酸内切酶可从原核生物中提取⑤限制性核酸内切酶的操作对象是原核细胞A.②③ B.③④C.③⑤ D.①⑤答案:C6.质粒是基因工程常用的载体,它的特点是()。①能自主复制②不能复制③结构简单④单链DNA⑤环状DNA⑥含有标记基因A.①③⑤⑥ B.③④⑤⑥C.①③④⑤ D.②③④⑤解析:在基因工程中,通常用质粒作为载体。质粒是裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外,并能自主复制的双链环状DNA分子。在质粒上有一个至多个限制酶切割位点,供外源DNA片段插入其中,另外质粒上还有标记基因,如四环素抗性基因等。答案:A7.下列关于限制酶的说法,错误的是()。A.限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的B.不同的限制酶识别不同的核苷酸序列C.限制酶能识别特定的核苷酸序列,体现了酶的专一性D.限制酶的作用只是用来提取目的基因解析:限制酶的作用是在基因工程中提取目的基因和切割载体。答案:D8.水母发光蛋白由236个氨基酸构成,其中Asp、Gly和Ser构成发光环,现将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记。在转基因技术中,这种蛋白质的作用是()。A.促使目的基因导入宿主细胞中B.促使目的基因在宿主细胞中复制C.使含目的基因的受体细胞容易被检测出来D.使目的基因容易成功表达答案:C线性DNA分子的酶切示意图9.已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点,如图中箭头所指。如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断,则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子,若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断,则从理论上讲,经该酶酶切后该DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段是()。种 种种 种解析:若3个酶切位点上都被该酶切断,则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段;若在1个或2个酶切位点上被该酶切断,则会产生ab、abc、bc、bcd、cd五种不同长度的DNA片段。答案:C10.下图为DNA分子的切割和连接过程。DNA分子的切割和连接(1)EcoRⅠ是一种酶,其识别序列是,切割位点是与之间的键。切割结果产生的DNA片段末端形式为。(2)不同来源的DNA片段结合,在这里需要的酶应是,此酶的作用是在与之间形成键而起“缝合”作用的。其中能连接平末端的连接酶是。解析:EcoRⅠ是一种限制酶,从图中可以看出其识别序列是GAATTC,切割位点是鸟嘌呤脱氧核苷酸和腺嘌呤脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。切割后产生的DNA末端形式为黏性末端。要将不同来源的DNA片段连接起来,需要DNA连接酶,其作用是形成磷酸二酯键而将两DNA片段“缝合”起来。T4DNA连接酶既可以“缝合”黏性末端,也可以“缝合”平末端。答案:(1)限制性核酸内切(限制)GAATTC鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸磷酸二酯黏性末端(2)E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸磷酸二酯T4DNA连接酶11.根据基因工程的有关知识,回答下列问题。(1)限制酶切割DNA分子后产生的片段,其末端类型有和。(2)质粒载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下:AATTC……GG……CTTAA为使载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制酶切割,该酶必须具有的特点是

。(3)按其来源不同,基因工程中所使用的DNA连接酶有两类,即DNA连接酶和DNA连接酶。(4)基因工程中除质粒外,和也可作为载体。解析:(1)限制酶切割DNA分子后,露出的末端类型为黏性末端和平末端两种。(2)要想使另一种限制酶切割并与之相连接,则需要的限制酶切割后的末端与EcoRⅠ切割后的末端一致。(3)基因工程中使用的DNA连接酶有两种类型即T4DNA连接酶、E·coliDNA连接酶。(4)基因工程中常用载体有质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒。答案:(1)黏性末端平末端(2)切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同(3)E·coliT4(4)λ噬菌体的衍生物动植物病毒题组21．下列有关基因工程诞生的说法，不正确的是()A．基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科的基础上发展起来的B．工具酶和载体的发现使基因工程的实施成为可能C．遗传密码的破译为基因的分离和合成提供了理论依据D．基因工程必须在同物种间进行解析：选D。基因工程可在不同物种间进行，它可打破生殖隔离的界限，定向改造生物遗传性状。2．(2014·浙江杭州高二检测)下列有关基因工程和限制性核酸内切酶的描述，错误的是()A．一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列B．限制性核酸内切酶的活性受温度的影响C．限制性核酸内切酶能识别和切割RNAD．限制性核酸内切酶可从原核生物中提取解析：选C。大部分酶是蛋白质，少数酶是RNA。酶的活性受到温度和pH的影响；限制性核酸内切酶的特点是一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的位点切割DNA分子。限制性核酸内切酶主要是从原核生物体内分离出来的。3.结合图，判断下列有关基因工程的工具酶功能的叙述中不正确的是()A．切断a处的酶为限制性核酸内切酶B．连接a处的酶为DNA连接酶C．切断b处的酶为解旋酶D．切断b处的酶为限制性核酸内切酶解析：选D。切断a处磷酸二酯键的酶是限制性核酸内切酶，连接a处磷酸二酯键的酶为DNA连接酶；切断b处氢键的酶为解旋酶，b处氢键的形成不需要酶。4．(2014·山东济南高二质检)已知某种限制酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指。如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是()A．3 B．4C．9 D．12解析：选C。每一种限制酶切割DNA后会留下特征性的末端，同时一次切割后，会把DNA分割成两个片段，且不同的限制酶切割后的片段不一样。如果将题图中的三个切割位点自左至右依次标为甲、乙、丙，在甲处切，可产生两个片段，即a和右边的b＋c＋d段；如果只在乙处切，就有a＋b和c＋d段；如果只在丙处切，就有a＋b＋c和d段；在甲、乙两处同时切，就有a、b和c＋d段；在乙、丙两处同时切，就有a＋b和c、d段；在甲、丙两处同时切，就有a、b＋c、d段三种片段；在甲、乙、丙三处同时切，就有a、b、c、d四种片段。5．T4DNA连接酶的功能是()A．只能连接黏性末端B．只能连接平末端C．能够连接DNA双链的氢键D．既可以连接黏性末端，又能连接平末端解析：选D。T4DNA连接酶可以连接黏性末端和平末端，只是连接黏性末端的效率高，连接平末端的效率比较低。6．(2014·山东东营高二月考)下列有关DNA连接酶的叙述正确的是()①催化具有相同的黏性末端的DNA片段之间连接②催化具有不同的黏性末端的DNA片段之间连接③催化两个黏性末端互补碱基间氢键的形成④催化脱氧核糖与磷酸之间的磷酸二酯键的形成A．①② B．③④C．①④ D．②③解析：选C。DNA连接酶催化互补的黏性末端进行连接，而不是不同的黏性末端的任意连接。DNA连接酶作用的部位是磷酸二酯键，而不是氢键。7．下列关于几种酶作用的叙述，不正确的是()A．DNA连接酶能使不同脱氧核苷酸的磷酸与脱氧核糖连接B．RNA聚合酶能与基因的特定位点结合，催化遗传信息的转录C．一种限制酶能识别多种核苷酸序列，切割出多种目的基因D．DNA聚合酶能把单个脱氧核苷酸分子连接成一条DNA单链解析：选C。限制酶具有专一性，一种限制酶只能识别一种核苷酸序列，并在特定位点切割DNA分子，故选项C叙述错误。DNA连接酶无识别的特异性，能使不同脱氧核苷酸的磷酸与脱氧核糖连接，DNA连接酶对于黏性末端或平末端都能催化其“缝合”，重新形成DNA分子；RNA聚合酶能与基因的特定位点结合，催化遗传信息的转录；DNA聚合酶能以DNA的一条链为模板，把单个脱氧核苷酸分子连接成一条DNA单链，复制形成新的DNA分子。8．基因工程是在分子水平上进行的操作，该过程中科学家所用的“手术刀”、“缝合针”和常采用的“运输车”分别是()A．限制酶、DNA连接酶、质粒B．限制酶、DNA聚合酶、噬菌体C．DNA连接酶、限制酶、动植物病毒D．DNA连接酶、限制酶、质粒解析：选A。基因工程中，“手术刀”是限制酶，“缝合针”是DNA连接酶，常用的“运输车”是质粒。9．(2014·广西桂林高二检测)下列有关质粒的叙述，正确的是()A．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器B．质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状DNA分子C．质粒只有在侵入宿主细胞后在宿主细胞内复制D．细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行解析：选B。质粒不属于细胞器，为环状DNA，在宿主细胞内外均可复制。10．(2012·高考四川卷改编)将大肠杆菌的质粒连接上人生长激素的基因后，重新置入大肠杆菌的细胞内，通过发酵就能大量生产人生长激素。下列叙述正确的是()A．发酵产生的生长激素是大肠杆菌生命活动所必需的B．大肠杆菌获得的能产生人生长激素的变异可以遗传C．大肠杆菌质粒标记基因中腺嘌呤与尿嘧啶含量相等D．生长激素基因在转录时需要DNA连接酶解析：选B。利用基因工程生产人生长激素是将大肠杆菌的质粒连接上人生长激素的基因，导入大肠杆菌细胞内，生产人生长激素。生长激素不是大肠杆菌生命活动所必需的，所以A项错；大肠杆菌获得的能产生人生长激素的变异是由遗传物质改变引起的，属于可遗传的变异，所以B项正确；质粒是环状的DNA分子，不含有尿嘧啶，所以C项错；基因转录需要RNA聚合酶，转录产物为信使RNA，所以D项错。11．下面几种是限制性核酸内切酶切割DNA分子后形成的部分片段。请回答下列问题：①eq\a\vs4\al(…CTGCA,…G)②eq\a\vs4\al(…G,…CTTAA)③eq\a\vs4\al(…TG,…AC)④eq\a\vs4\al(…G,…CTGCA)⑤eq\a\vs4\al(…GC,…CG)(1)以上DNA片段是由________种限制性核酸内切酶切割后产生的。(2)若要把相应片段连接起来，应选用________(填“DNA聚合酶”或“DNA连接酶”)。(3)找出能连接的对应片段并写出连接后形成的DNA分子：________________。解析：一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定位点进行切割。题中①④的黏性末端相同，是由同一种限制酶切割形成的，其他三种片段的末端都不相同，所以这些片段是4种限制性核酸内切酶切割后产生的。DNA连接酶与DNA聚合酶作用不同，DNA连接酶是在两个DNA片段间形成磷酸二酯键，将两条链上的两个缺口同时连接起来。答案：(1)4(2)DNA连接酶(3)eq\b\lc\\rc\(\a\vs4\al\co1(…CTGCAG…,…GACGTC…))12．胰岛素是治疗糖尿病的重要药物，如图是基因工程技术生产胰岛素的操作过程示意图，请据图回答：(1)完成过程②③必需的酶分别是________、________。(2)在利用A、B获得C的过程中，通常用________________切割A和B，使它们产生相同的______________，再加入________________，才可形成C。(3)取自大肠杆菌的物质B，在基因工程中起________作用，必须具备的条件是________________________________________________________________________________________________________________________________________________(至少2个)。解析：(1)过程②为由单链RNA到双链DNA的过程，为反转录，需要反转录酶的催化。过程③是DNA由双链解旋变成单链，这个过程需要解旋酶。(2)A为目的基因，B为载体，只有用同一种限制酶切出相同的黏性末端，然后在DNA连接酶的作用下才能相互结合。(3)从大肠杆菌中提取的B为质粒，在基因工程中可以起到载体的作用，必须具备的条件是具有标记基因和一至多个限制酶切割位点，能够在宿主细胞中复制并稳定保存。答案：(1)反转录酶解旋酶(2)同一种限制酶黏性末端DNA连接酶(3)载体具有标记基因和一至多个限制酶切割位点；能够在宿主细胞中复制并稳定保存13．如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题。(1)a代表的物质和质粒的化学本质相同，都是______，二者还具有其他共同点，如①____________________，②________________________(写出两条即可)。(2)若质粒DNA分子的切割末端为eq\b\lc\\rc\(\a\vs4\al\co1(—A,—TGCGC))，则与之连接的目的基因切割末端应为________________；可使用________________把质粒和目的基因连接在一起。(3)氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上称为________，其作用是________________________________________________________________________。(4)下列常在基因工程中用作载体的是()A．苏云金芽孢杆菌抗虫基因B．土壤农杆菌环状RNA分子C．大肠杆菌的质粒D．动物细胞的染色体解析：质粒是基因工程中最常用的载体，是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子，具有一至多个限制酶切割位点，进入受体细胞后能自主复制，具有标记基因便于重组DNA的鉴定与选择。答案：(1)DNA①能够自我复制②具有遗传效应(2)eq\b\lc\\rc\(\a\vs4\al\co1(CGCGT—,A—))DNA连接酶(3)标记基因供重组DNA的鉴定和选择(4)C14．通过DNA重组技术使原有基因得以改造的动物称为转基因动物。运用这一技术使羊奶中含有人体蛋白质，如图表示了这一技术的基本过程，在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是—G↓GATCC—，请回答下列问题：(1)从羊染色体中“剪下”羊蛋白质基因的酶是______。人体蛋白质基因“插入”后连接在羊体细胞染色体中时需要的酶是____________________。(2)请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图。—G↓GATCC——CCTAG↑G—(3)人体蛋白质基因之所以能“插入”到羊的染色体内，原因是____________________，“插入”时用的工具是________________，其种类有_________________________。答案：(1)限制性核酸内切酶DNA连接酶(2)eq\b\lc\\rc\(\a\vs4\al\co1(—G↓GATCC—,—CCTAG↑G—))→eq\b\lc\\rc\(\a\vs4\al\co1(—G,—CCTAG))eq\b\lc\\rc\(\a\vs4\al\co1(GATCC—,G—))(3)基因的结构是相同的载体质粒、动植物病毒、λ噬菌体的衍生物题组3一、基因工程的概念1．手段：通过体外________和________等技术，赋予生物以新的________。2．目的：按照人们的愿望进行严格的设计，创造出更符合人们需要的新的________和________。3．设计和施工水平：________水平，因此，基因工程又叫做DNA重组技术。1．DNA重组转基因遗传特性2．生物类型生物产品3．DNA分子二、DNA重组技术的基本工具1．限制性核酸内切酶——“分子手术刀”(又称限制酶)。(1)来源：主要是从________中分离纯化出来的。(2)功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的____________断开，因此具有________性。经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：________和________。前者是限制酶在它识别序列的____________将DNA的两条链切开产生的，后者是限制酶在它识别序列的__________切开产生的。2．DNA连接酶——“分子缝合针”。(1)作用：将____________“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的____________，形成重组DNA分子。(2)种类。①E·coliDNA连接酶：只能缝合DNA片段的________。②T4DNA连接酶：既可缝合DNA片段的黏性末端，又可缝合DNA片段的________，但连接后者的效率________。3．载体——“分子运输车”。(1)作用：携带________进入受体细胞。(2)种类：质粒、________的衍生物、动植物病毒等。(3)特点。①能够在受体细胞中进行________，或整合到________上，随染色体DNA进行同步复制。②有一个至多个________切割位点，供外源基因插入。③具有特殊的______________，供重组DNA的鉴定和选择。,1．(1)原核生物(2)磷酸二酯键专一黏性末端平末端中心轴线两侧中心轴线处2．(1)双链DNA片段磷酸二酯键(2)①黏性末端②平末端低3．(1)外源基因(2)λ噬菌体(3)①自我复制染色体DNA②限制酶③标记基因1．能有效地打破物种的界限，定向地改造生物的遗传性状，培育新的农作物优良品种的生物技术是()A．基因工程技术B．诱变育种技术C．杂交育种技术D．组织培养技术解析：诱变育种是在一定的条件下，对某一品种进行诱变而产生的突变性状；杂交育种必须在同种生物之间进行；组织培养技术是无性生殖，难以产生新品种；而基因工程可以打破物种的界限，在不同种生物之间进行基因重组，从而定向改造生物的遗传性状。答案：A2．下述有关基因工程相关知识的叙述正确的是()A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和载体B．一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列C．目的基因是指重组DNA分子D．只要检测出受体细胞中含有目的基因，那么，目的基因一定能成功地进行表达解析：载体不是工具酶；重组DNA分子是目的基因和载体重组后形成的；目的基因转录是否成功仅仅在受体细胞中检测出目的基因是不够的，最重要的是受体生物或细胞表现出我们所需要的性状。答案：B3．科学家选用的细菌质粒往往带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因的主要作用是()答案：BA．提高受体细胞在自然环境中的耐热性B．有利于检测目的基因否导入受体细胞C．增加质粒分子的相对分子质量D．便于与外源基因连接4．下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述，错误的是()A．一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列B．限制性核酸内切酶的活性受温度的影响C．限制性核酸内切酶能识别和切割RNAD．限制性核酸内切酶可从原核生物中提取解析：酶的活性受到温度和pH的影响；限制性核酸内切酶的特点是一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列，并在特定的位点切割DNA分子，而不是RNA分子。限制性核酸内切酶主要是从原核生物体内分离出来的。答案：C5．不属于质粒被选为基因载体的理由是()A．能复制B．有多个限制酶切点C．具有标记基因D．它是环状DNA答案：D6．据下图所示，有关工具酶功能的叙述错误的是()A．限制酶可以切断a处B．DNA聚合酶可以连接a处C．解旋酶可以使b处解开D．DNA连接酶可以连接c处解析：限制酶切割DNA分子时破坏的是DNA链中的磷酸二酯键，如图a处。DNA聚合酶是将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键，因此DNA聚合酶可以连接a处。解旋酶解开两个碱基对之间的氢键，即b处解开，DNA连接酶连接的是两个相邻的脱氧核苷酸的磷酸和脱氧核糖，形成磷酸二酯键，如a处。而图示的c处连接的是同一个脱氧核苷酸内的磷酸和脱氧核糖。答案：D7．下表关于基因工程中有关基因操作的名词及对应的内容，正确的组合是()供体剪刀针线载体受体A质粒限制酶DNA连接酶提供目的基因的生物大肠杆菌等B提供目的基因的生物DNA连接酶限制酶质粒大肠杆菌等C提供目的基因的生物限制酶DNA连接酶质粒大肠杆菌等D大肠杆菌等DNA连接酶限制酶提供目的基因的生物质粒解析：基因工程中的剪刀是限制酶，针线是DNA连接酶，载体最常用的是质粒，受体多用原核生物，如大肠杆菌等。答案：C8.在基因工程中用来修饰、改造生物基因的工具是()A．限制酶和DNA水解酶B．限制酶和DNA连接酶C．限制酶和载体D．DNA连接酶和载体解析：DNA水解酶不是基因工程的工具，A错误；载体的作用是将目的基因导入受体细胞，而不是修饰改造基因，C、D错误。答案：B9．下图为DNA分子的切割和连接过程。(1)EcoRI是一种________________酶，其识别序列是__________，切割位点是________________与________________之间的__________键。切割结果产生的DNA片段末端形式为__________。(2)不同来源的DNA片段结合，在这里需要的酶应是______________________________，此酶的作用是在________________与________________之间形成__________键而起“缝合”作用的，其中能连接平末端的连接酶是__________。解析：EcoRI是一种限制酶，从图中可以看出其识别序列是GAATTC，切割位点是鸟嘌呤脱氧核苷酸和腺嘌呤脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。切割后产生的DNA末端形式为黏性末端。要将不同来源的DNA片段连接起来，需要DNA连接酶，其作用是形成磷酸二酯键而将两DNA片段“缝合”起来。T4DNA连接酶既可以“缝合”黏性末端，也可以“缝合”平末端。答案：（1）限制性核酸内切(限制)GAATTC鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸磷酸二酯黏性末端(2)E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸磷酸二酯T4DNA连接酶10．通过DNA重组技术使原有基因得以改造的动物称为转基因动物。运用这一技术使羊奶中含有人体蛋白质，如图表示这一技术的基本过程，在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是—G↓GATCC—，请回答：(1)从羊染色体中“剪下”羊蛋白质基因的酶是________。人体蛋白质基因“插入”后连接在羊体细胞染色体中时需要的酶是____________。(2)请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图。eq\x(\a\al(—G↓GATCC—,,,,))(3)人体蛋白质基因之所以能“插入”到羊的染色体内，原因是______________________，“插入”时用的工具是________，其种类有________________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：限制酶的作用是切取目的基因，DNA连接酶起“缝合”作用，载体能把目的基因导入受体细胞。(1)“剪刀”为限制酶，剪下羊蛋白质基因，使用DNA连接酶将其与载体结合。(2)由图示可知限制酶识别的序列为—GGATCC—，并且在G与G之间切开，形成的黏性末端为反向重复的，所以两个末端分别为eq\a\vs4\al(—G,—CCTAG)与eq\a\vs4\al(—GATCC,G—)。(3)插入时目的基因与原有基因结合，都为反向平行的双螺旋结构，插入时需要载体。答案：(1)限制酶DNA连接酶(2)—G↓GATCC——GGATCC—→—CCTAG↑G——CCTAGG—(3)基因的结构是相同的载体质粒、动植物病毒及λ噬菌体的衍生物11．如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题。(1)a代表的物质和质粒的化学本质都是______________，二者还具有其他共同点。如①______________________，②______________________(写出两条即可)。(2)若质粒DNA分子的切割末端为eq\a\vs4\al(—A,—TGCGC)，则与之连接的目的基因切割末端应为____________；可使用____________把质粒和目的基因连接在一起。(3)氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上称为____________，其作用是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)下列常在基因工程中用作载体的是()A．苏云金芽孢杆菌抗虫基因B．土壤农杆菌中的RNA分子C．大肠杆菌的质粒D．动物细胞的染色体答案：(1)DNA能够自我复制具有遗传效应(2)eq\a\vs4\al(CGCGT—,A—)DNA连接酶(3)标记基因供重组DNA的鉴定和选择(4)C题组41.有关DNA重组技术中的工具——“分子缝合针”“分子手术刀”“分子运输车”的组合正确的是()①DNA连接酶②DNA聚合酶③限制酶④RNA聚合酶⑤载体A.②③⑤B.①③④C.①③⑤ D.④③⑤答案:C2.下列有关基因工程中限制酶的描述,错误的是()①一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列②限制酶的活性受温度影响③限制酶能识别和切割RNA④限制酶可从原核生物中提取⑤限制酶的操作对象是原核细胞A.②③ B.③④C.③⑤ D.①⑤解析:限制酶的作用是在基因工程中提取目的基因和切割载体,是作用于DNA分子,而非原核细胞,也不能识别和切割RNA分子。答案:C3.下列黏性末端属于同一限制酶切割而成的是()A.①② B.①③C.①④ D.②③解析:将①②③④黏性末端分别进行比较,只有①③相同,因此①③属于同一种限制酶切割形成的末端。答案:B4.下面是质粒的结构示意图,其中ori为复制必需的序列,amp为氨苄青霉素抗性基因,tet为四环素抗性基因,箭头分别表示四种限制性核酸内切酶的不同酶切位点。若要得到一个能在四环素培养基上生长而不能在氨苄青霉素培养基上生长的含重组DNA的细胞,应选用的限制酶酶切位点与哪一选项相符?()解析:要得到能在四环素培养基上生长而不能在氨苄青霉素培养基上生长的含重组DNA的细胞,选用的质粒应为ori正常、amp被破坏、tet正常。答案:A5.现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子,用限制性核酸内切酶EcoRⅠ酶单独酶切后得到的DNA分子仍是1000bp,用KpnⅠ单独酶切得到400bp和600bp两种长度的DNA片段,用EcoRⅠ、KpnⅠ同时酶切后得到200bp和600bp两种长度的DNA片段。该DNA分子的酶切图谱正确的是()解析:从图谱中可发现有链状DNA、环状DNA,用EcoRⅠ酶切割后DNA的长度不变,此DNA应该为环状。用KpnⅠ酶单独酶切后得到400bp和600bp两种长度的DNA,因此DNA上应该存在两个KpnⅠ酶的切割位点。答案:D6.基因工程中,需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒,便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—,限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。根据图判断下列操作正确的是()A.目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割B.目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割C.质粒用限制酶Ⅱ切割,目的基因用限制酶Ⅰ切割D.质粒用限制酶Ⅰ切割,目的基因用限制酶Ⅱ切割解析:因为目的基因要切下,质粒只要切开,酶Ⅱ识别序列和切点是—↓GATC—,单独使用时可以把目的基因和质粒都切断,而且会把两个标记基因都切开,限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—,只能把它们切开,单独使用时不能切下,所以切目的基因用限制酶Ⅱ切割,质粒用限制酶Ⅰ切割。答案:D7.下列关于E·coliDNA连接酶的叙述,正确的是()①催化相同黏性末端的DNA片段之间的连接②催化不同黏性末端的DNA片段之间的连接③催化两个黏性末端互补碱基间氢键的形成④催化两个核苷酸之间的磷酸二酯键的形成A.①③ B.②④C.②③ D.①④解析:在DNA重组技术中,两个DNA片段间必须有相同黏性末端才能互补配对,进行结合;具有相同黏性末端的DNA分子连接时,E·coliDNA连接酶的作用是催化两个核苷酸之间的磷酸二酯键的形成,即把“梯子”的“扶手”缝合起来。答案:D8.下列T4DNA片段能够用DNA连接酶连接起来的是()…GC…CG①G…TGCAC…②GT…CA…③…CTGCA…G④GC…CG…⑤…G…CTTAA⑥A.①和⑤ B.②和④C.①和③ D.④和⑥解析:T4DNA连接酶既能连接平末端,也能连接黏性末端,图②④⑥的黏性末端不互补,不能连接起来,图①③⑤中只有①⑤是相同的平末端。答案:A9.能催化磷酸二酯键形成的酶有()①E·coliDNA连接酶②T4DNA连接酶③DNA聚合酶④解旋酶⑤RNA聚合酶⑥DNA酶⑦限制酶A.①②③⑥ B.①②③④⑦C.①②③⑤ D.①②③④⑤解析:DNA连接酶和DNA聚合酶都能催化形成磷酸二酯键,不同之处是DNA连接酶连接的是DNA片段,而DNA聚合酶连接的是单个脱氧核苷酸,将单个脱氧核苷酸连接形成与模板链互补的单链;RNA聚合酶也可催化磷酸二酯键的形成,在转录过程中可将游离核糖核苷酸连接形成RNA。解旋酶的作用是将DNA两条链的氢键解开。DNA酶和限制酶都是催化磷酸二酯键的断裂。答案:C10.某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶(Amy)基因a,通过基因工程的方法,将基因a与载体结合后导入马铃薯植株中,经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在。下列有关这一过程的叙述,不正确的是()A.获取基因a的限制酶的作用部位是上图中的①B.连接基因a与载体的DNA连接酶的作用部位是图中的②C.基因a可在马铃薯细胞中稳定存在并表达D.基因a进入马铃薯细胞后,可随马铃薯DNA分子的复制而复制,传给子代细胞解析:②为氢键,①为磷酸二酯键,DNA连接酶和限制酶都是作用于磷酸二酯键,不能作用于氢键。答案:B11.质粒是基因工程常用的载体,它的特点是()①能自主复制②不能复制③结构简单④常有一个至多个限制酶切割位点,可供外源DNA插入其中⑤双链环状DNA⑥常含有标记基因⑦基本组成单位是核糖核苷酸A.①③④⑤⑥ B.③④⑤⑥⑦C.①③④⑤ D.②③④⑤⑦解析:在基因工程中,通常用质粒作为载体。质粒是裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外,并能自主复制的双链环状DNA分子,其基本组成单位是脱氧核苷酸。在质粒上有一个至多个限制酶切割位点,供外源DNA片段插入其中,另外质粒上还有标记基因,如四环素抗性基因等。答案:A12.以动植物病毒作为目的基因的载体进行转基因操作,有关说法错误的是()A.作为基因工程载体的动植物病毒一定为DNA病毒B.操作过程需要限制酶和DNA连接酶C.目的基因和病毒DNA被拼接成重组DNAD.进入受体细胞的是含蛋白质外壳的动植物病毒,而不是裸露的重组DNA解析:病毒感染宿主细胞时,进入宿主细胞的是病毒的核酸,蛋白质外壳留在外面不起作用。答案:D13.下图为DNA分子的切割和连接过程。DNA分子的切割和连接(1)EcoRⅠ是一种酶,其识别序列是,切割位点是与之间的键。切割结果产生的DNA片段末端形式为。(2)不同来源的DNA片段结合,在这里需要的酶应是,此酶的作用是在与之间形成键,而起“缝合”作用的。其中能连接平末端的连接酶是。解析:EcoRⅠ是一种限制酶,从图中可以看出其识别序列是GAATTC,切割位点是鸟嘌呤脱氧核苷酸和腺嘌呤脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。切割后产生的DNA末端形式为黏性末端。要将不同来源的DNA片段连接起来,需要DNA连接酶,其作用是形成磷酸二酯键而将两DNA片段“缝合”起来。T4DNA连接酶既可以“缝合”黏性末端,也可以“缝合”平末端。答案:(1)限制性核酸内切(限制)GAATTC鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸磷酸二酯黏性末端(2)E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸磷酸二酯T4DNA连接酶14.根据基因工程的有关知识,回答下列问题。(1)限制酶切割DNA分子后产生的片段,其末端类型有和。(2)质粒用EcoRⅠ切割后产生的片段如下:AATTC……GG……CTTAA为使载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性内切酶切割,该酶必须具有的特点是。(3)实际操作中,往往用EcoRⅠ和另一种限制性内切酶同时分别切割质粒和外源DNA分子,其优点在于可防止。(4)按其来源不同,基因工程中所使用的DNA连接酶有两类,即DNA连接酶和DNA连接酶。(5)基因工程中除质粒外,和也可作为载体。解析:(1)DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式,即黏性末端和平末端。(2)若用不同的酶切割目的基因,形成的末端一定要与EcoRⅠ切割载体产生的末端相同,这样才能互补连接。(4)根据酶的来源,可将DNA连接酶分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶两类。(5)基因工程中常用的载体有质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等。答案:(1)黏性末端平末端(2)切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同(3)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化(4)E·coliT4(5)动植物病毒λ噬菌体的衍生物题组51．实施基因工程的最终目的是()A．提取生物体的DNA分子B．对DNA分子进行人工剪切C．在生物体外对DNA分子进行改造D．创造符合人们需要的新的生物类型和生物产品2．有关DNA重组技术中的工具——“分子缝合针”“分子手术刀”“分子运输车”的组合正确的是()①DNA连接酶②DNA聚合酶③限制酶④RNA聚合酶⑤运载体A．②③⑤B．①③④C．①③⑤D．④③⑤3．下图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次是()A．DNA连接酶、限制酶、解旋酶B.限制酶、解旋酶、DNA连接酶C．解旋酶、限制酶、DNA连接酶D．限制酶、DNA连接酶、解旋酶4．下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述，错误的是()①一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列②限制性核酸内切酶的活性受温度影响③限制性核酸内切酶能识别和切割RNA④限制性核酸内切酶可从原核生物中提取⑤限制性核酸内切酶的操作对象是原核细胞A．②③B．③④C．③⑤ D．①⑤5．下列关于DNA连接酶作用的叙述，正确的是()A．将单个核苷酸加到某DNA片段末端，形成磷酸二酯键B．将断开的两个DNA片段的骨架连接起来，重新形成磷酸二酯键C．连接两条DNA链上碱基之间的氢键D．只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，而不能将双链DNA片段平末端之间进行连接6．下列四条DNA片段，可能是由同一种限制酶切割而成的是()A．①②B．②③C．③④ D．②④7．据图判断，有关工具酶功能的叙述错误的是()A．限制性核酸内切酶可以切断a处B．DNA聚合酶可以连接a处C．解旋酶可以使b处解开D．DNA连接酶可以连接c处8．下面是四种不同质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因，箭头表示一种限制性核酸内切酶的酶切位点。若要得到一个能在四环素培养基上生长而不能在氨苄青霉素培养基上生长的含重组DNA的细胞，应选用的质粒是()9．(全国卷改编)根据基因工程的有关知识，回答下列问题：(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：AATTC……GG……CTTAA为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是___________________________________。(3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶。(4)基因工程中除质粒外，________和________也可作为运载体。(5)请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图。eq\x(—G↓GATCC—)10．下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：限制酶BamHⅠHindⅢEcoRⅠSmaⅠ识别序列及切割位点eq\o(GG,\s\up6(↓))ATCCCCTAeq\o(GG,\s\up6(,))eq\o(AA,\s\up6(↓))GCTTTTCGeq\o(AA,\s\up100(,))eq\o(GA,\s\up6(↓))ATTCCTTAeq\o(AG,\s\up20(,))CCeq\o(CG,\s\up6(↓))GGGGeq\o(GC,\s\up6(,))CC(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是____________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止________________。(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。(6)现使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA，并经拼接获得的重组质粒进行再次酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1、2中标示的酶切位点及表所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。①采用BamHⅠ和HindⅢ酶切，得到________种DNA片段。②采用EcoRⅠ和HindⅢ酶切，得到________种DNA片段。答案1．选DA、B、C三项均为基因工程操作的具体内容，但不是基因工程的目的。实施基因工程的最终目的是通过基因操作定向改造生物的遗传物质，创造符合人们需要的新的生物类型和生物产品。2．选C基因工程中，“手术刀”是限制酶，“缝合针”是DNA连接酶，“运输车”是指将目的基因导入受体细胞的运载体，常用的“运输车”是质粒。3．选C解旋酶可催化碱基之间氢键(①)的断裂，限制酶可使两个核苷酸之间的磷酸二酯键(②)断开，而DNA连接酶则催化磷酸二酯键(③)的形成。4．选C限制性核酸内切酶主要存在于微生物中，酶的活性受温度的影响，限制性核酸内切酶识别和切割的是DNA分子，而不是原核细胞。5．选BDNA连接酶和DNA聚合酶都是催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键。DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，将两个DNA片段连接成重组DNA分子。DNA聚合酶是将单个核苷酸加到已存在的核酸片段上形成磷酸二酯键，合成新的DNA分子。6．选D只有②和④的黏性末端的碱基都是互补的，它们可能是由同一种限制酶切割而成的。7．选Da处指的是两个相邻脱氧核苷酸之间的脱氧核糖与磷酸之间的磷酸二酯键，而c处指的是同一个脱氧核苷酸内的脱氧核糖和磷酸之间的化学键，DNA连接酶不能连接此化学键。8．选CA项破坏了复制必需的序列。B项氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因都完好，在四环素培养基上和氨苄青霉素培养基上都能生长。C项氨苄青霉素抗性基因被破坏，四环素抗性基因完好，能在四环素培养基上生长而不能在氨苄青霉素培养基上生长。D项氨苄青霉素抗基因完好，四环素抗性基因被破坏。9．解析：当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是黏性末端，而当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生的则是平末端。为使运载体与目的基因相连，用另一种限制酶切割后形成的黏性末端必须与EcoRⅠ切割形成的黏性末端相同。根据酶的来源不同，可以将DNA连接酶分为两类：一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为大肠杆菌DNA连接酶；另一类是从T4噬菌体中分离出来的，称为T4DNA连接酶。基因工程中除质粒外，还有噬菌体、动植物病毒等也可作为运载体。答案(1)黏性末端平末端(2)切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同(3)大肠杆菌T4(4)噬菌体动植物病毒(5)eq\o(\s\up7(—\o(GG,\s\up6(↓))ATCC—),\s\do5(—CCTA\o(GG,\s\up6(,↑))—))→eq\o(\s\up7(—G),\s\do5(—CCTAG))＋eq\o(\s\up7(GATCC—),\s\do5(G—))10．解析：(1)该质粒为环状DNA，经SmaⅠ切割前，不含有游离的磷酸基团，经SmaⅠ切割后形成平末端，含有2个游离的磷酸基团。(2)SmaⅠ识别的是CCCGGG序列，在C与G之间切割，SmaⅠ酶切位点越多，也就是C—G碱基对越多，由于C与G之间的氢键(3个)比A与T之间的氢键(2个)数量多，故其含量越多，质粒的热稳定性越高。(3)据图1可知，SmaⅠ切割位点在抗生素抗性基因(标记基因)中，据图2可知，SmaⅠ切割位点在目的基因中，因此使用SmaⅠ切割会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因。(4)用同一种限制酶处理质粒和外源DNA，再用DNA连接酶连接时，往往会有三种连接形式：目的基因—质粒、目的基因—目的基因(环化)、质粒—质粒(环化)，后两种是我们不需要的，因而要进行筛选。用两种限制酶处理质粒和外源DNA，因形成的末端不同可避免上述情况的发生。(5)连接质粒与目的基因的工具酶是DNA连接酶。(6)由BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA，并经拼接获得的重组质粒，这两种酶的识别序列仍然完整存在，如再用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶进行酶切时，可再度被切开，形成2种DNA片段；而EcoRⅠ的识别序列在原质粒中存在并没有破坏，同时切下的目的基因中还存在1个EcoRⅠ的识别序列，因此在重组质粒中存在2个EcoRⅠ的识别序列，如用EcoRⅠ和HindⅢ酶切，可得到3种DNA片段。答案：(1)0、2(2)高(3)SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因(4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化(5)DNA连接(6)①2②3题组61．下列对基因工程的理解，正确的是()①它是一种按照人们的意愿，定向改造生物遗传特性的工程②对基因进行人为删减或增添某些碱基③是体外进行的人为的基因重组④在实验室内，利用相关的酶和原料合成DNA⑤主要技术为体外DNA重组技术和转基因技术⑥在DNA分子水平上进行操作⑦一旦成功，便可遗传A．①②③④⑤⑥ B．①③④⑤⑥⑦C．①③⑤⑥⑦ D．①②③⑤⑥⑦[答案]C[解析]基因工程是对现有基因的剪切和重组，并没有对基因进行改造，也不是要合成新的DNA。2．下图表示限制酶切割某DNA的过程，从图中可知，该限制酶能识别的碱基序列及切点是()A．CTTAAG，切点在C和T之间B．CTTAAG，切点在G和A之间C．GAATTC，切点在G和A之间D．CTTAAC，切点在C和T之间[答案]C3．下列关于DNA连接酶的叙述，正确的是()①可催化互补黏性末端的DNA片段之间的连接②都能催化平末端的DNA片段之间的连接③催化两个黏性末端互补碱基间氢键的形成④催化DNA分子两条链的脱氧核糖和磷酸间磷酸二酯键的形成A．①③ B．②④C．②③ D．①④[答案]D[解析]E·coliDNA连接酶只能连接双链DNA片段互补的黏性末端，而不能催化DNA片段平末端的连接。DNA连接酶的作用是催化两个脱氧核苷酸之间磷酸二酯键的形成，即把“梯子”的“扶手”缝合起来。4．基因工程操作离不开三种工具，下列有关说法不正确的是()A．常用相同的限制性核酸内切酶处理目的基因和质粒，从而获得互补的黏性末端B．在三种工具中最常用载体——质粒的基本单位是脱氧核糖核苷酸，两种酶的基本单位是氨基酸C．DNA聚合酶能够催化形成磷酸二酯键，是基因工程中的“分子缝合针”D．限制性核酸内切酶主要从原核生物中分离获得，具有识别特定核苷酸序列的能力[答案]C[解析]DNA聚合酶用于DNA的复制，DNA连接酶才是基因工程中的“分子缝合针”。质粒是细胞质中小型环状DNA分子，基本组成单位是脱氧核糖核苷酸；限制性核酸内切酶和DNA连接酶的本质都是蛋白质，基本组成单位是氨基酸。5．(2015·郑州检测)质粒是基因工程中最常用的载体，它存在于许多细菌体内，质粒上有标记基因如图所示，通过标记基因可以推知外源基因(目的基因)是否转入成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同，下表是外源基因插入位置(插入点有a、b、c)，请根据表中提供的细菌生长情况，推测①②③三种重组后细菌的外源基因插入点，正确的一组是()细菌在含氨苄青霉素的培养基上的生长情况细菌在含四环素的培养基上的生长情况①能生长能生长②能生长不能生长③不能生长能生长A.①是C；②是b；③是aB．①是a和b；②是a；③是bC．①是a和b；②是b；③是aD．①是c；②是a；③是b[答案]A[解析]对①细菌来说，能在含氨苄青霉素的培养基上生长，也能在含四环素的培养基上生长，说明抗氨苄青霉素基因和抗四环素基因都没有被破坏，插入点是c；对②细菌来说，能在含氨苄青霉素的培养基上生长，说明其抗氨苄青霉素基因正常，不能在含四环素的培养基上生长，说明其抗四环素基因被破坏，插入点为b；对③细菌来说，不能在含氨苄青霉素的培养基上生长，说明其抗氨苄青霉基因被插入而破坏，故插入点为a6．作为基因的运输工具——质粒，必须具备的条件之一及理由是()A．能够在受体细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因B．具有多个限制酶切割位点，以便于目的基因的表达C．具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件D．能够在受体细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选[答案]A[解析]作为载体要携带目的基因进入受体细胞并使之表达，必须能够在受体细胞内稳定地保存并大量复制，以便通过复制提供大量目的基因。同时要具有某些标记基因，是为了通过标记基因是否表达来判断目的基因是否进入了受体细胞，从而进行筛选受体细胞。载体要具有多个限制酶切割位点，则是为了便于与外源基因连接。7．通过DNA重组技术使原有基因得以改造的动物称为转基因动物。运用这一技术使羊奶中含有人体蛋白质，下图表示了这一技术的基本过程，在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是—G↓GATCC—，请回答：(1)从羊染色体中“剪下”羊蛋白质基因的酶是________。人体蛋白质基因“插入”后连接在羊体细胞染色体中时需要的酶是________。(2)人体蛋白质基因之所以能“插入”到羊的染色体内，原因是__________________，“插入”时用的工具是________，其种类有________________________。(3)请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图。[答案](1)限制酶DNA连接酶(2)基因的结构是相同的载体质粒、动植物病毒、λ噬菌体的衍生物(3)[解析]本题主要考查各种工具在基因工程中的作用，首先明确限制酶为剪刀切割目的基因，DNA连接酶起缝合作用，载体会把目的基因导入受体细胞，然后结合问题组织答案。(1)剪刀为限制酶，剪下羊的蛋白质基因，使用DNA连接酶将其与载体结合。(2)插入时是基因与原有基因结合，都为反向平行的双螺旋结构，插入时需要载体。8．治疗糖尿病用的胰岛素，在过去主要是从动物(如猪、牛)体获得的。自20世纪70年代基因工程发展起来以后，人们开始采用高新技术生产胰岛素，其操作过程如图所示。(1)图中的质粒存在于细菌细胞中，从其分子结构看，可确定它是一种______________。(2)请根据碱基互补配对的原则判断，在连接酶的作用下，甲与乙能否拼接起来，并说明理由。________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)细菌丙进行分裂后，其中被拼接的质粒也由一个变成两个，两个变成四个……质粒这种增加方式在遗传学上称为______________。目的基因通过表达后，能使细菌产生胰岛素，这是因为基因具有控制______________合成的功能。[答案](1)DNA(2)能二者具有相同的黏性末端(3)DNA的复制(DNA的扩增)蛋白质1．基因工程技术也称为DNA重组技术，其实施必须具备的四个必要条件是()A．目的基因限制酶载体受体细胞B．重组DNARNA聚合酶限制酶连接酶C．工具酶目的基因载体受体细胞D．模板DNAmRNA质粒受体细胞[答案]C[解析]基因工程是把供体生物的基因(目的基因)导入受体(细胞)，并使其成功表达，以使受体获得新的遗传特性的过程。因此该过程需要有目的的基因、受体细胞及其工具(工具酶和载体)。2．限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸序列。下图为四种限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列是什么()A．BamHⅠ和EcoRⅠ；末端互补序列为—AATT—B．BamHⅠ和HindⅢ；末端互补序列为—GATC—C．EcoRⅠ和HindⅢ；末端互补序列为—AATT—D．BamHⅠ和BglⅡ；末端互补序列为—GATC—[答案]D[解析]BamHⅠ