实验四血球凝集和交叉配血实验

实验四

血球凝集反应和交叉配血实验

指导老师：程燕实验目的1、掌握凝集反应和交叉配血实验的原理2、掌握玻片凝集试验的操作方法，了解其特点和用途3、学习玻片凝集试验结果的观察方法实验原理凝集反应：颗粒性抗原(细菌、细胞等)与其特异性抗体[直接凝集]或是可溶性抗原(亦可用抗体)吸附于与免疫无关的载体形成致敏颗粒(免疫微球)与相应的抗体(或抗原)[间接凝集]在有适量电解质存在下，形成肉眼可见的凝集小块。注：颗粒性抗原称为凝集原，特异性抗体称为凝集素凝集反应的特点颗粒性抗原致敏颗粒（可溶性抗原或抗体与载体颗粒结合）电解质的存在肉眼可见的凝集现象凝集反应的类型直接凝集试验玻片凝集试验：ABO血型试管凝集试验：外斐试验，肥达试验间接凝集试验正向间接凝集试验反向间接凝集试验间接凝集抑制试验协同凝集试验间接血凝试验胶乳凝集试验明胶凝集试验实验原理直接凝集反应：是颗粒性抗原又称凝集原与相应抗体直接结合所呈现的凝集现象，如红细胞和细菌凝集试验。主要有玻片法、试管法。玻片法为定性试验，方法简便快速，常用已知抗体检测未知抗原，应用于菌种鉴定，分型及人红细胞ABO血型测定等；试管法通常为半定量试验，常用已知抗原检测待检血清中有无相应抗体及其相对含量，以帮助临床诊断和分析病情。常有肥达试验，外-斐试验，交叉配血试验等8血型抗原KDCCKBAD存在于红细胞表面化学结构：

蛋白质蛋白质上的糖类抗原糖蛋白或脂类（糖脂）9ABO血型RBC上的抗原血清中的抗体基因型OHAnti-A,BO/OAAAnti-BA/AorA/OBBAnti-AB/BorB/OABA&BNoneA/BABO血型系统10ABO以外

重要的血型系统及其抗体2005年，29个红细胞血型系统274个抗原11除ABO外与输血有关的最重要的血型系统之一最重要的五种抗原C、c、D、E、e根据D抗原是否存在，一般将Rh系统定义为Rh阳性：D抗原阳性Rh阴性：D抗原阴性（熊猫血型：AB型、Rh阴性）Rh血型系统ABO血型的鉴定方法。

原理将标准抗A和抗B血型抗体分别与待测红细胞混合。如果抗原与抗体相对应，则引起红细胞凝集，反之则不凝集，据其凝集现象可判断血型。结果判读：

1、如混合液由均匀红色混浊状逐渐变为透明，并出现大小不等的红色凝集块者，即为红细胞凝集；

2、如混合液仍呈均匀混浊状，则为不凝集。注：肉眼观察难于判定是否凝集，可在显微镜下用低倍镜观察予以确认。

交叉配血试验1.交叉配血实验在输血过程中，要先分别将供血者的RBC与受血者的血清及供血者的血清与受血者的RBC进行的配合试验，以免发生溶血。2.交叉配血实验的意义（1）检验血型鉴定是否有误。（2）检验血清中是否有不规则抗体。3.交叉配血的方法供血者的红细胞受血者血清受血者的红细胞供血者血清（主侧）（次侧）均不凝集：配血相合主侧凝集：绝对不可以有凝集或溶血现象主侧不凝，次侧凝集：供血者血清加受血者红细胞在允许范围内，可以有凝集现象，但不可以有溶血。只在应激情况下少量缓慢，或使用洗涤RBC。实验器材实验动物：豚鼠、兔实验试剂：血液抗凝剂（1:500u肝素钠注射液）实验器材：注射器、一次性离心管普通吸管、尖吸管、1ml刻度吸管血球凝集板实验步骤1、分别制备兔血清、兔红细胞、豚鼠血清、豚鼠红细胞2、分别制备5％兔红细胞悬液、5％豚鼠红细胞悬液3、交叉配血与玻片凝集观察取血清0.1ml放于玻片上，取5％红细胞生理盐水悬液0.1ml，加于血清中混匀并涂成直径约1cm的圆形，立即记时3分钟。观察出现凝集的时间和凝集块的大小。4、加样方法兔1红细胞兔2红细胞豚鼠1红细胞豚鼠2红细胞兔1血清◆◆◆兔2血清◆◆◆豚鼠1血清◆◆◆豚鼠2血清◆◆◆实验作业1、什么叫直接凝集反应