猪血液样品采集技术

猪血液样品采集技术正大集团东北区动保中心2012年5月血液概念：血液简称血，人或高等动物体内循环系统中的液体组织，暗赤或鲜红色，有腥气，由血浆、血细胞和血小板构成，对维持生命起重要作用。血液的成分：血液由血浆和悬浮其中的血细胞组成。血浆内除含有大量水分以外,含血浆蛋白（白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原）、脂蛋白等各种营养成分以及无机盐、氧、激素、酶、抗体和细胞代谢产物等。血细胞有红血球、白血球和血小板。光镜下，根据白细胞胞质有无特殊颗粒，可将其分为有粒白细胞和无粒白细胞两类。有粒白细胞又根据颗粒的嗜色性，分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。无粒白细胞有单核细胞和淋巴细胞两种。血液采集的目的:抗体监测病原检测感染类型及程度分析

是通过免疫血清学的方法对免疫后机体抗体水平的测定，根据免疫监测的结果来检验免疫成效的一种技术方法。动

物

免

疫

抗

体

监测免疫抗体监测的意义：建立科学（以监测数据为依据）的免疫程序检查免疫效果评价疫苗质量重大疫病预警重大疫病防控成效评估抗体监测可揭示疫病的种类：一切病毒病一切细菌病支原体病说明：逃避免疫监视的疫病除外免疫监测现状1、畜禽散养比重大，监测量太大2、养殖人员意识薄弱，采血阻碍大3、专业技术人员缺乏，采血难度大4、硬件设备缺乏，样品保存难免疫监测对策1、开展宣传交流，促进养殖户的免疫监测意识；2、强化技术培训，建立高素质的监测队伍；3、加强设施建设，提高监测结果的质效；4、完善监测方法，制定合理的免疫程序。免疫抗体监测的现状及对策4、检测抗体检测试剂盒1、疫苗接种5、结果分析3、样本处理2、采血检测免疫抗体监测流程

在常规的免疫监测或重大疫病监测中，动物血清样本的采集、处理、运输及保存是否正确，事关检测结果的准确与否，因此，要求采样人员要熟练掌握采样工作程序和采样操作技术。目前，大多数猪场都是使用耳静脉抽血或前腔静脉抽血的方法采血。前腔静脉1.颈总动脉2.腋动脉3.臂头干4.肺干5.左心房6.肺静脉7.胸主动脉8.肺毛细血管9.后腔静脉10.腹腔动脉11.腹主动脉12.肠系膜前动脉13.肠系膜后动脉14.盆骨部和后肢的毛细血管15.门静脉16.肝毛细血管17.肝静脉18.左心室19.右心室20.右心房21前肢毛细血管22.头颈部毛细血管猪的前腔静脉，越往头部越浅，但也越细；越靠胸部越粗，但越深。所以，采血应选择适当的部位。

成年家畜血液循环模式图套准抚缓

用消毒好的猪用套索，牢牢套住猪上腭。同时，最好让猪退至墙角。这样猪会有一种安全感，放松较快。

套住猪后，把猪从头到尾轻抚几遍，吆喝声要轻柔，直到猪安静下来为止，约需1-3分钟。

耳静脉等部位消毒后，看准后穿刺，最好一次找准。多次穿刺，猪由于疼痛会骚动不安，尖叫紧张。

找准血管后，不要急于马上强力抽取。猪只在安静轻松时，血液才会流得顺畅，采集血液才会较多，采血过程，才会顺利安全。采血给猪采血四字经

采血前准备工作采血前的准备工作1、注射器、注射针头2、75%的酒精棉球3、猪保定器或保定绳4、记号笔、登记表5、乳胶手套、防护服、防护帽、一次性鞋套等6、采样箱、冰袋（冰冻矿泉水）猪体重注射器针头型号30kg以上的中大猪12#Î38mm10-30kg小猪9#Î25mm10kg以下乳猪9#Î20mm针筒一般为5ml或10ml规格的一次性针筒。针筒和注射器的选择

耳缘静脉采血1、适用范围：适用于40Kg以上的中大猪或种猪。

2、保定方法：采用站立保定，由1名助手用猪保定器套住猪的上颌骨、收紧，用力向前方牵引。3、采血方法：在猪耳根处用力压住耳静脉近心端，采血员左手拉伸猪耳，右手用酒精棉球反复涂擦耳静脉使血管怒张后，右手持连接9号针头的注射器，沿血管走向刺入，针头与猪耳水平面呈10～15度角进针，回血后，缓慢抽取所需血液量后，用干棉球或棉签按压止血。猪耳缘静脉采血方法猪小的情况下，很多兽医人员都是用针头刺穿耳静脉后，直接用西林瓶在耳沿接血，这样接到的血样，不符合卫生要求。

由于猪的耳静脉小(特别是小猪)，采血过程中猪只又经常晃动，使本来已经插准的针头，经常抽不出血来。

从耳静脉抽血，每采一头猪需要5分钟以上，一个大型的猪场，如果送检40头猪血，采血起码要4个小时。

耳缘静脉采血缺点费时易失败

血样不卫生

猪耳缘静脉采血缺点

前腔静脉采血前腔静脉采血

前腔静脉采血，是一些熟练的兽医常用的采血方法。应用前腔静脉采血方法，可比耳静脉抽血节约一半以上的时间，而且采出的血样卫生干净。1、保定方法：20kg以下的小猪，可由1-2个饲养员抓起，倒立，后背紧靠在栏架上。2、进针部位：小猪的采血部位应稍靠后，采两前肢与气管交汇处。3、下针和采血：对准以上描述的部位，用针垂直刺入。拉紧针筒活塞，若针头扎中前腔静脉，可见到血液自血管源源流出，抽取所需的血量即可。如果抽不到血液，说明针头没有扎中，可上下移动针头，直到针筒中见到血液流出为止。

仔猪采血方法公母猪的保定用保定绳固定，要求尽可能吊得高一点，使猪的头颈与水平面呈30度以上角度。公母猪保定方法中大猪的保定20kg以上的中大猪，由1-2个饲养员用捉猪器(或保定绳)拉住，头昂起，偏向右侧。中大猪保定方法公母猪及中大猪采血方法1、进针部位：公母猪和20kg以上中大猪的血管比较大，往后太深，针头够不到血管，所以，应略靠前可选颈部最低凹处。2、下针和采血：对准下针部位，使针头偏向气管约15度方向下针，拉紧针筒活塞，若扎中，可见血液流出。公母猪及中大猪采血方法如果见不至血液流出，说明没有扎中，有可能是前腔静脉较深，可用手顶紧针筒，使针头扎深一点。若仍采不到血，可以把针头往后稍退，或左右摇摆针头，直到有血液流出为止。实际上，操作熟练后，针头有没有扎中，凭手是可以感觉得到的，当针头扎破静脉壁时，可以感觉得到轻微的”卜”的一声。前腔静脉采血技术要点针头选择根据猪的大小选用不同型号的针头。根据猪体大小，采用不同保定方式。猪保定后应相对稳定，不能骚动、后缩及左右摇摆。选择准确的进针部位，由于左侧靠近膈神经，故多在右侧进行采血。做好保定进针部位

血液样品的处理、保存及运输

一、血浆的制备

在采血器内加入适量的抗凝剂，采血后，反复颠倒采血器，使抗凝剂与血液充分混匀，静置或经过离心使血细胞下沉后，上清液即为血浆。血液样品的处理

二、血清的制备

首先将采集的血液样品置室温半小时，待血液凝固后2000-3000转/分离心5-10分钟，上清夜即为血清；如离心后有轻微的溶血，用牙签将血凝块挑出，将混有红细胞碎片的血清再次离心，用干净吸管收集血清于干燥的指型管中，贴上标签备用。如血清溶血严重，应剔出样品。血液样品的处理血液样品的保存与运输胶带固定旋紧针帽标记耳号将该猪耳号用标签纸/胶布标注于相应的采血管上，吸入部分空气，旋紧顶端针帽，底端活塞处用医用胶布将两端固定，约呈45度斜放至墙根处静置，使血清析出。血清血液样品的处理将采取的血液样品室温倾斜放置半个小时候，血清析出。检验样品信息登记表采样人员要按照《动物检验样品信息登记表》的要求，对送检血清样品进行详实、全面的信息填写！①④②③血液样品的保存与运输将装有血清样品的注射器装入原包装袋中将注射器和送检样品信息表一同装入密封袋将血清样品倾斜放入带有冰袋的样品箱中用胶带密封样品箱，准备送检血液样品的保存与运输1、采集的血液样品如不能及时进行检验，必须做适当的处理，防止其成分发生大的变化。2、通常分离到的血清与血浆样品保存于密闭试管中，存放于4℃冰箱内或冷冻。3、全血样品应保存于4℃冰箱内，检验时，样品必须达到室温，达到室温之后颠倒数次，使血液充分混匀后，方可检验。4、如果样品能在24小时内送往实验室，可保存于4℃环境的保温箱内，如果24小时内不能抵达或有些样品送往外地实验室时，样品必须冷冻处理后，并在低温下运送。运送途中防止样品泄漏，密闭封装并加冰袋运送。同时要填写详细的样品记录。血液样品的保存与运输1、采健康的猪,不采病猪,同时也要保证是随机采样,保证各个胎次都比较均衡。2、采血时候尽量避免污染,采血部位用酒精棉擦拭消毒,采血量至少2毫升,才能保证析出来足够量的血清用于检测。

3、采集的样品标记要清楚,编号要有规律,样品的排列要有顺序,便于检测,统计结果。采集样品装放有冰袋的保温盒及时送到实验室,在运送途中尽量避免摇晃,以免溶血。4、采集的样品要有详细的说明,包括:日龄,胎龄,猪群种类,健康状况,最后免疫时间和疫苗的来源等数据。血液样品采集、保存与运输的注意事项免疫抗体监测的采样原则“母猪好好一窝，公猪好好一坡”

公猪和后备母猪的抗体水平基本上反映出一个猪场的抗体水平。同时采样怀孕猪、哺乳猪、断奶母猪和小猪，以达到对生长流程的各个阶段进行监控。（一）、抗体水平抽查项目

内容检测次数每年检测4次检测时间分别在3月、6月、9月、12月的1~5日检测项目常规检测猪瘟、蓝耳、伪狂犬和口蹄疫的抗体项目内容基础群600头猪场抽检0~5胎次母猪各10头，公猪全部抽检(其中哺乳母猪、怀孕35~84天母猪以及怀孕85天以后母猪各20头)抽样率10%保育肥猪4周龄、8周龄、14周龄、20周龄各10头基础群1000头的猪场抽检0~5胎次母猪各10头，公猪全部抽检(其中哺乳母猪、怀孕35~84天母猪以及怀孕85天以后母猪各20头）抽样率5%保育肥猪4周龄、8周龄、14周龄、20周龄各15头每个猪场根据自己实际情况确定常规检测项目。（二）、种猪场普查(猪瘟净化)猪瘟净化

每年3月份1次，种猪场所有母猪进行猪瘟抗