三七总皂甙对低氧高二氧化碳性肺血管收缩的影响 4600字

三七总皂甙对低氧高二氧化碳性肺血管收缩的影响4600字【摘要】目的:探讨三七总皂甙(PNS)对肺动脉平滑肌的舒张作用及其与肺动脉内皮细胞的关系。

办法:采用大鼠离体肺主动脉环灌流模型。分别在常氧及低氧高二氧化碳条件下，察看PNS对氯化钾(KCl)及去甲肾上腺素(NE)预收缩内皮完整血管和去内皮血管的舒张作用。

结果:①在常氧及低氧高二氧化碳条件下，累积浓度的PNS对60mmol/LKCl及10-5mol/LNE预收缩的血管环均产生剂量依赖性舒张作用(P0.05);但低氧高二氧化碳条件下，去内皮组的PNS血管舒张效应远大于内皮完整组(P结论:PNS可减轻低氧高二氧化碳性肺血管收缩，且清除肺动脉内皮后这种作用更加明显，其机制可能与内皮介导作用的缺失有关。

【关键词】三七总皂甙/低氧/高碳酸血/内皮细胞

肺循环低氧状态(常同时伴有二氧化碳潴留)能诱发肺血管收缩、肺血管阻力增加，以维持通气-血流的适当比例，这种由于低氧、高二氧化碳引起的机体爱护机制称为低氧高二氧化碳性肺动脉收缩(hypoxiahypercapnia-inducedpulmonaryvasoconstriction，HHPV)。三七总皂甙(Panaxnotoginoside，PNS)为五加科草本植物三七根茎的主要活性成分，近年研究发现PNS具有扩张血管、降低血压、抗实验性心律失常、反抗钙离子、去甲肾上腺素诱发的离体血管条收缩作用[1];也有研究说明，PNS有抑制慢性缺氧性肺动脉高压的作用[2]。然而，PNS是否影响HHPV，目前尚未见报道。本实验在大鼠离体肺主动脉环灌流模型根底上，通过察看常氧和低氧高二氧化碳条件下PNS对肺动脉环的张力影响，探讨其对血管平滑肌的作用及可能的机制。

1材料和办法

1.1仪器设备

离体血管环灌流装置、Powerlab四道生理记录仪(澳大利亚Adinstruments公司生产);张力换能器(西班牙Panlab公司生产);血气分析仪(购自日本希森美康医用电子上海有限公司;AVLCOMPACT3型);PXS-270型离子活度计(上海雷磁仪器厂生产)。

1.2药品和试剂

血塞通注射液(主要成分为PNS，由昆明兴中制药厂生产，批号：000508)。重酒石酸去甲肾上腺素(norepinephrine，NE)为上海禾丰制药有限公司产品。乙酰胆碱(acetycholine，Ach，美国Sigma公司生产)。Krebs溶液(mmol/L)：NaCl115.0，KCl4.7，CaCl22.5，MgSO41.16，NaHCO321.9，NaH2PO41.18，glucose11.0，EDTA-Na20.026，pH7.4。Krebs液中诸试剂均为市售分析纯。

1.3血管环的制备

Sprague-Dawley(SD)大鼠64只，雄性，体重(380±20)g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。实验时用5%水合氯醛(0.07ml/kg)腹腔注射麻醉后开胸取出心肺,置于4℃Krebs液中迅速剪开右心室，剪除左右肺叶并洗净残血。然后快速、轻柔别离肺主动脉(mainpulmonaryartery)，制成3mm长的动脉环。局部血管环用棉签磨擦内外表清除内皮细胞，以制备去内皮肺动脉环。动脉环穿过两个直径0.2mm的三角形不锈钢小钩后,置于盛有10mlKrebs液的恒温(37℃)离体血管灌注浴槽内，持续充以95%O2+5%CO2的混合气体。调节张力微调器使最适前负荷(1.2g)在60min内加至血管并维持平衡60min，期间每15min换液1次。血管环稳定后，用10-5mol/LNE收缩血管环达峰值，再参加10-5mol/LAch检验血管内皮完整性。内皮清除组Ach的舒张反馈在10%下列，内皮(endothelium，E)完整组Ach的舒张反馈在95%以上，否那么弃用。实验采用Powerlab生物信号采集系统记录血管环张力变化，分别以KC1(60mmol/L)、NE(10-5mol/L)刺激引起的最大收缩幅度为规范，所得数据用百分比比值表示。

1.4实验程序

1.4.1PNS对KCl预收缩肺动脉环的作用:SD大鼠随机分为4组，每组8只,取肺动脉环。①常氧内皮完整组(KCl+NO+E组)：实验时浴槽内持续充以95%O2+5%CO2的混合气体，用60mmol/L的KCl预收缩血管环达峰值后，按累积加药法，每5min加PNS1次，使灌流液中PNS终浓度分别达0.1g/L、0.2g/L、0.4g/L、0.8g/L、1.6g/L，察看常氧条件下PNS对KCl预收缩的内皮完整血管环的舒张作用。②低氧高二氧化碳(hypoxiahypercapnia，HH)内皮完整组(KCl+HH+E组)：实验前用92%N2+8%CO2的混合气体充灌pH=7.35的K-H液(37℃)约40min，将溶液瓶密闭，用血气分析仪监测PO2、PCO2，使其分别稳定在30mmHg和60mmHg。实验时将液体灌流入组织浴槽中形成急性低氧高二氧化碳模型，并继续向浴槽内通以上无氧气体。其余步骤同KCl+NO+E组。③常氧去内皮组(KCl+NO-E组)：实验前用棉签磨擦内外表清除内皮细胞并检测去内皮程度，余操作同KCl+NO+E组。④低氧高二氧化碳去内皮组(KCl+HH-E组)：实验前清除血管内皮细胞并检测去内皮程度,余办法同KCl+HH+E组。

1.4.2PNS对NE预收缩的肺动脉环的作用:将别离好的血管环按照随机原那么分配到下列4组中，每组8只:①常氧内皮完整组(NE+NO+E组)。②低氧高二氧化碳内皮完整组(NE+HH+E组)。③常氧去内皮组(NE+NO-E组)。④低氧高二氧化碳去内皮组(NE+HH-E组)。实验时用10-5mol/LNE预收缩肺动脉环，各组处理办法同1.4.1。

1.5统计学处理办法实验所得数据均采用SPSS13.0软件进行处理。多组间比拟采用方差分析，组间两两比拟采用LSD法。

2结果

2.1累积浓度PNS对KC1预收缩血管环的作用

在常氧或低氧高二氧化碳条件下，PNS均能使KC1预收缩的内皮完整及去内皮肺动脉环呈剂量依赖性舒张，各组均随PNS浓度增大而舒张程度增大，差别均有显著性(均PO.05);即KCl+NO-E组与KCl+NO+E组在同PNS浓度点比拟差别无统计学意义。低氧高二氧化碳条件下，累积浓度PNS对去内皮肺动脉环的舒张作用比内皮完整肺动脉环明显增强(P2.2累积浓度PNS对NE预收缩的血管环的作用

在常氧或低氧高二氧化碳条件下，PNS均能使NE预收缩的内皮完整及去内皮肺动脉环呈剂量依赖性舒张，各组均随PNS浓度增大而致舒张程度增大，差别均有显著性(均PO.05)，即NE+NO-E组与NE+NO+E组比拟差别无统计学意义。低氧高二氧化碳条件下，累积浓度PNS对去内皮肺动脉环的舒张作用比内皮完整肺动脉环明显增强(P3讨论

三七总皂甙是中药三七的主要成分,具有扩张血管、降低心肌耗氧量、减轻心肌炎心肌损伤[3]、抑制血小板凝集、延长凝血时间、降血脂、去除自由基、抗炎、抗氧化等药理作用[4]，主要用于心脑血管系统疾病和中枢神经系统疾病的治疗。近年来随着研究的不断深入,PNS在肺动脉高压、肺心病中的作用越来越受到重视。

目前普遍认为，PNS是一种钙通道阻滞剂，具有阻断去甲肾上腺素所致的Ca2+内流的作用[5，6]。本实验察看到，PNS对NE、KC1刺激肺动脉环引起的收缩有明显的抑制作用，并呈现量效关系，表明PNS同样具有阻断高钾所致的Ca2+内流的作用。NE是选择性的受体冲动药，属受体耦联的钙通道激活剂;KC1可引起血管平滑肌细胞除极，激活电压依赖性的钙通道，二者均通过细胞质钙浓度的增加而产生血管收缩[7]，因此PNS对血管平滑肌细胞膜的受体依赖性钙通道和电压依赖性钙通道均有明显的抑制作用。

本实验还显示，无论NE还是KC1预收缩的血管环，低氧高二氧化碳均明显增强了PNS的血管舒张效应，且在去内皮肺动脉环中，这一作用更为明显。本室以往研究说明，低氧高二氧化碳可直接引起肺主动脉环发生早期短暂收缩反馈(后期收缩反馈不明显)，这一反馈的发生可能与肺动脉平滑肌细胞(PASMC)上的延迟整流性钾通道(KDR)和L型电压依赖性Ca2+通道(L-VDC)有关[8]。本研究中加用PNS后，肺动脉没有出现收缩反馈，反而呈现剂量依赖性舒张状态，表明PNS能够解除低氧高二氧化碳对KDR通道的抑制，维持PASMC膜复极化状态，减少细胞外Ca2+内流，引起肺动脉舒张。同时，PNS也可能抑制了钙激活性氯通道(ClCa)[9]，使Cl-外流减少，进一步引起肺动脉舒张。低氧高二氧化碳后期(肺动脉环置于低氧高二氧化碳浴液中5min后)PNS能进一步引起肺动脉舒张，除与PNS的钙阻滞作用有关外，低氧高二氧化碳直接抑制钙敏感钾通道(KCa)引起肺动脉扩张也是一个重要因素[10]。

本实验发现，常氧时，PNS的舒张作用与内皮存在与否无关;而低