农药残留检测技术(课件)讲解学习

农药残留(cánliú)快速测定技术江阴市农产品质量检测(jiǎncè)中心2013年5月第一页，共20页。

滥用(lànyòng)“神农丹”种姜第二页，共20页。2012年2011年2010年第三页，共20页。农残快速(kuàisù)测定方法及仪器介绍一、农药残留简述二、快速检测方法及相关仪器(yíqì)三、农残速测仪介绍第四页，共20页。一、农药(nóngyào)残留简述1、农药(nóngyào)残留相关名词农药(nóngyào)分类无机化合物（目前使用较多的品种(pǐnzhǒng)有硫悬浮剂、波尔多液等。）化学合成农药(nóngyào)生物源农药矿物源农药有机合成化合物动物源农药（如动物毒素、昆虫性引诱剂等）植物源农药（如植物内源激素、植物源昆虫激素等）微生物源农药（井冈霉素、白僵菌、苏云金杆菌等）有机氯类有机磷类拟除虫菊酯类氨基甲酸酯类杂环类化合物其它（苯氧羧酸类、脲类化合物）第五页，共20页。农药残留：农药使用后残存在生物体、农副产品和环境中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。以mg/kg、ug/kg、ng/kg表示。农药残留的危害：农药若大量残留在农副产品表面会引起人的神经传导阻碍、神经麻痹甚至引起死亡。最大残留限量：在农副产品中农药残留的法定最高允许浓度，又称最高残留限量，以每千克(qiānkè)农副产品中农药残留的毫克数（毫克/千克(qiānkè)）表示。我国违禁农药：666DDT、毒鼠强、甲胺磷、甲基对硫磷、对硫磷、久效磷、磷胺等高毒农药全面禁止使用第六页，共20页。2、国家(guójiā)农药残留速测检测标准NY/T448-2001蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测(jiǎncè)方法GB/T5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测(jiǎncè)第七页，共20页。二、快速检测方法及相关(xiāngguān)仪器1、速测卡法（纸片法）胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变(gǎibiàn)，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。第八页，共20页。2、酶抑制率法（分光(fēnɡuānɡ)光度法）在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间(shíjiān)的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。第九页，共20页。目前使用的快速(kuàisù)检测仪器仪器(yíqì)原理：酶抑制率法（分光光度法）使用此方法的仪器(yíqì)有：深圳安鑫宝WT系列农药残留速仪长春吉大·小天鹅GDYN-110SB农残速测仪上海博纳CL-BIII八通道残留农药测定仪等特点：精确度高、稳定性强易于操作第十页，共20页。三、农残速测仪介绍(jièshào)（一）原理农药对胆碱酯酶（检测试剂）的活性有抑制作用，这样就抑制了胆碱酯酶催化显色剂水解发生显色反应，通过对显色反应的测定(cèdìng)来实现农药残留量的测量。由此可判定果品蔬菜样品中的残留农药的含量。正常情况：底物+胆碱酯酶---水解→胆碱胆碱+显色剂→→→黄色溶液第十一页，共20页。（二）抑制率计算方法通过测定(cèdìng)果蔬中的残留农药使乙酰胆碱酯酶活性变化的程度来测定(cèdìng)样品果蔬中的此类残留农药毒性，仪器测定(cèdìng)的残留农药大小用“抑制率”来表示。抑制率是农药对酶抑制程度的显示指标，其计算方式为:

I=((A0-At)/A0)×100％I———抑制率A0———对照的吸光度值

At———样品溶液的吸光度值第十二页，共20页。（三）GB/T5009.199-2003方法(fāngfǎ)介绍1、配试剂缓冲液、酶试剂、显色剂、底物均按照仪器自带的使用说明书的要求配制而成（所用水为蒸馏水或纯净水(jìnɡshuǐ)）。除缓冲溶液可常温放置，其他试剂配置后必须0-4℃避光保存，使用前冷却至室温，保存期不宜过长，一般现配先用。第十三页，共20页。

2、实验(shíyàn)操作空白样操作步骤及要求(yāoqiú)：①取2.5ml缓冲溶液加入试管中（记录）。②分别加入0.1ml酶液（记录），0.1ml显色剂（记录）至试管中。③摇匀后于37℃放置15min（计时）。④加入0.1ml底物（记录）至试管中摇匀，此时检液起显色反应，应立即放入仪器比色池中检测。⑤注意比色皿光面毛面的放置方向。按对照检测键，3min后记录空白样的△AC值。第十四页，共20页。样品(yàngpǐn)样的操作步骤及要求：取样步骤及要求：①称取菜样1g〔要求一种菜样要从不同植株取样，从叶片部位取（果实蔬菜用刀顺皮削下），剪成1cm左右见方(jiànfāng)碎片，混匀后用镊子称取1g（记录），放入烧杯或提取瓶中（编号）〕。②取5ml缓冲溶液加入编好号的样品瓶中（记录）。③用手或借助仪器振荡1-2min（计时）。④振荡完成后静置3-5min（计时）。第十五页，共20页。⑤试管中加入2.5ml样品提取液。⑥再分别(fēnbié)加入0.1ml（100ul）酶液，0.1ml显色剂至各样品样的试管中。⑦摇匀后于37℃放置15min（计时）。⑧各样品样中加入0.1ml底物摇匀。⑨最后将每个试管中的样品液倒入比色皿中，迅速放入仪器中，按样品检测键，3min后记录实验结果。第十六页，共20页。3、结果(jiēguǒ)的判定结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。当蔬菜样品(yàngpǐn)提取液对酶的抑制率≥50%时，样品(yàngpǐn)为阳性结果农药残留超标。抑制率在50%左右为可疑样品(yàngpǐn)，超标样品(yàngpǐn)、可疑样品(yàngpǐn)需要重复检验2次以上。第十七页，共20页。4、注意事项1、仪器开机之后最好预热10分钟以上。开机、关机之间间隔1分钟以上。2、配试剂需按照说明进行操作。3、实验要求的蒸馏水可以用纯净水代替，但是不能用矿泉水，天然饮用水。4、酶液、显色剂与底物切忌长时间室温下放置，用后应立即放入冷藏室内（0-4℃）。5、提取液可以放置常温下保存。（从冰箱中拿出的酶液要等他恢复(huīfù)到室温才能使用，不然会导致酶的活性不够，酶的活性最适温度37摄氏度）。第十八页，共20页。5、韭菜、生姜、葱、蒜、辣椒等刺激性气味蔬菜中，含有对酶活性有影响的物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株蔬菜浸泡。6、避免交叉污染(wūrǎn)，每次取不同的样品，清洗采样器具。7、先做对照检测，再做样品检测。对照样品吸光度值△AC应该在如下区间：实验室温度在25°C以上