微生物的培养幻灯片

微生物的培养幻灯片第一页，共三十页，2022年，8月28日细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图）2.细菌的繁殖3.细菌的菌落⑴.定义：单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。⑵.特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。⑶.功能：每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。第二页，共三十页，2022年，8月28日几种菌落及其形态第三页，共三十页，2022年，8月28日几种菌落及其形态第四页，共三十页，2022年，8月28日二、培养基培养基（培养液）是按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供微生物生长繁殖使用的营养基质。1.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方(参考教材附录内容)2.培养基的种类和用途3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。第五页，共三十页，2022年，8月28日划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分天然培养基合成培养基用途鉴别培养基一、培养基的种类、用途不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产观察微生物的运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基第六页，共三十页，2022年，8月28日分离导入了目的基因的受体细胞几种选择培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的无氮培养基分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基back第七页，共三十页，2022年，8月28日血清中含有：①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）②多种金属离子；③激素；④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。⑤各种生长因子⑥转移蛋白⑦不明成分人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。第八页，共三十页，2022年，8月28日微生物需要的五大类营养要素物质是：㈡.微生物需要的营养物质及功能1.碳源2.氮源3.生长因子4.无机盐5.水：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。①无机碳源：CO2；NaHCO3等②有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等①构成细胞物质和一些代谢产物②异养微生物的能源⑴.概念⑵.来源：⑶.作用：1.微生物的碳源第九页，共三十页，2022年，8月28日①无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物。2.微生物的氮源⑴.概念：⑵.来源：⑶.作用：3.生长因子⑶.常见的生长因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。第十页，共三十页，2022年，8月28日㈢.培养基（三）培养基配置原则1）目的要明确2)营养要协调3）PH要适宜第十一页，共三十页，2022年，8月28日㈣.无菌技术(注意)1.无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。⑴消毒定义：利用温和的化学或物理方法，杀死部分微生物的过程。2.消毒与灭菌的概念及两者的区别⑵灭菌的定义：以强烈的化学试剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。第十二页，共三十页，2022年，8月28日①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。④紫外线消毒：紫外照射30min，房间、仪器设备 （喷洒石碳酸和煤酚皂）⑴.消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法第十三页，共三十页，2022年，8月28日①灼烧灭菌②干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。③高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.⑵.灭菌的方法：第十四页，共三十页，2022年，8月28日消毒方法：（1）日常生活经常用到的是

消毒法；100℃煮沸5-6min（2）对一些不耐高温的液体，则使用

消毒法70-75℃下煮30min或80℃下煮15min（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒

等溶液以增强消毒效果，然后使用

进行物理消毒。（4）实验操作者的双手使用

进行消毒；（5）饮水水源用

进行消毒。第十五页，共三十页，2022年，8月28日消毒方法：（1）日常生活经常用到的是

煮沸消毒法；100℃煮沸5-6min（2）对一些不耐高温的液体，则使用

巴氏

消毒法70-75℃下煮30min或80℃下煮15min（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用

紫外线进行物理消毒。（4）实验操作者的双手使用75%酒精进行消毒；（5）饮水水源用氯气进行消毒。第十六页，共三十页，2022年，8月28日灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口等使用

灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用

灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；（3）培养基、无菌水等使用

灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。第十七页，共三十页，2022年，8月28日灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口等使用

灼烧

灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；（3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽

灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。第十八页，共三十页，2022年，8月28日第十九页，共三十页，2022年，8月28日第二十页，共三十页，2022年，8月28日二.实验操作(以培养大肠杆菌为例)㈠.制备牛肉膏蛋白胨培养基1.计算2.称量3.溶化4.灭菌:

将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。5.倒平板:

待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。第二十一页，共三十页，2022年，8月28日倒平板操作第二十二页，共三十页，2022年，8月28日㈡.纯化大肠杆菌平板划线法和稀释涂布平板法。微生物的接种的常用接种方法有：1.平板划线的操作方法平板划线的操作第二十三页，共三十页，2022年，8月28日第二十四页，共三十页，2022年，8月28日一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。第二十五页，共三十页，2022年，8月28日第二十六页，共三十页，2022年，8月2