(11.2.4)-粪便标本细菌学检验

微生物检验粪便标本的微生物学检验粪便的细菌培养正常人的肠道中栖居的微生物种类和数量繁多，组成了对人类健康极为重要的体内微生态环境——微生态菌膜屏障因此粪便标本的检验必须在混有大量正常肠道菌中选出病原菌，作为检验的最低要求，必须检验志贺菌和沙门菌。流行季节应增加霍乱弧菌的检查。弯曲菌近年来已引起人们的重视，特别是婴幼儿中的检出率很高。病原性大肠埃希菌也是婴幼儿腹泻的重要致病菌，已逐渐列为常规检验。

送检指征当腹泻患者出现以下任何一种情况时建议采集粪便标本，进行细菌培养重症腹泻体温大于38.5血便便中有脓液未经抗菌药物治疗的持续性腹泻患者来自疫区的患者。标本的采集与运送自然排便法：挑取脓血、黏液的粪便2-3g于无菌的纸盒中，或放置于增菌液中送检直肠肛拭子法：直接送检或放入运送培养基中送检疑似痢疾患者：应在发病初期，用药前采集标本疑似伤寒患者：应在发病2-3周内采集粪便标本若疑为霍乱患者：标本应置碱性蛋白胨水中若疑为耶尔森菌或弯曲菌等：标本应置卡-布运送培养基送检标本的保存不能及时培养的标本通常4℃,-6℃保存培养艰难梭菌的标本应保存在-20℃以下用缓冲盐甘油溶液保存培养沙门氏菌和志贺氏菌的标本保存培养弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2(100mg/l)标本直接镜检1．不染色湿片观察取绿豆大小的粪便标本加入生理盐水制成匀浆，用接种环取一环涂片，观察有无脓细胞，真菌孢子及菌丝等，可选择合适的培养基2．革兰氏染色将上述涂片采用革兰氏染色方法染色后镜检。镜下观察是否有大量白细胞，胞内是否吞噬细菌（提示感染性腹泻）；在脓球包裹物中是否有成堆的革兰氏阳性球菌或酵母菌，有无菌丝，记录下来（提示真菌性肠炎）；对于无脓细胞，或者细胞很少但非细胞性炎症渗出物量多的标本注意镜下各种形态染色特性的细菌的比例并记录下来，如见到大量革兰阳性梭状杆菌、无荚膜、大多形成卵圆形芽孢位于菌体一端，提示艰难梭菌性肠炎（伪膜性肠炎）。标本直接镜检3.对于米泔样水样粪便的标本，采用悬滴法暗视野(或相差显微镜)镜检，如发现细菌呈穿梭状极活泼的运动，则考虑为弧菌感染。加入O1群霍乱弧菌诊断多价血清或O139血清，显微镜下观察若运动停止则为制动试验阳性，应立即与当地卫生防疫部门联系，并做好患者消毒隔离工作。

标本直接镜检4.采用悬滴法镜检发现投镖式或螺旋式运动的细菌，革兰阴性弧形、S形或螺旋形的小杆菌，提示弯曲杆菌感染。粪便标本中有各种正常菌群，形态上区分困难，一般不推荐做直接涂片检查。

标本直接镜检培养基的种类强选择性培养基：SS中等选择性培养基：XLD弱选择性培养基：EMB（伊红美蓝琼脂培养基）、MAC（麦康凯）等分离培养-沙门菌及志贺菌：增菌培养或直接接种于SS和MAC

-霍乱弧菌：碱性蛋白胨水37℃增菌6h，挑取菌膜接种TCBS平板

-大肠杆菌培养：挑取脓血、黏液的粪便接种于MAC或EMB培养基

-金黄色葡萄球菌培养：接种于高盐甘露醇琼脂平板

-副溶血弧菌培养：增菌后接种与弧菌选择性培养基与SS培养基。分离培养-小肠耶尔森培养：接种NYE、MAC及SS，分别置22-25℃及37℃培养

-空肠弯曲杆菌：接种弯曲菌培养基，43℃微需氧培养24-72h-艰难梭菌培养：取黄色伪膜状粪便，接种于CCFA平板，37℃厌氧培养48h

分离培养结果报告阳性：报告细菌种名和药敏结果。阴性：(1)常规细菌培养阴性应报告“未检出沙门氏菌、志贺氏菌”或报告“酵母菌过度生长。”(2)特殊细菌培养