广西平果、大化两县壮族儿童原发性肾病综合征相关基因表达谱的绘制

国家自然科学基金申请书PAGE7 第2页版本1.014.348 您现在不能检查保护文档或打印文档，请根据以下三个步骤操作：1)如果您是Word2000或以上版本用户，请把Word宏的安全性设为:"中"方法:Word菜单->工具->宏->安全性->安全级,设置为"中"(如果您是Word97用户，继续执行以下步骤)2)关闭本文档，重新打开本文档3)点击"启用宏"按钮，即可开始填写本文档或打印了您现在不能检查保护文档或打印文档，请根据以下三个步骤操作：1)如果您是Word2000或以上版本用户，请把Word宏的安全性设为:"中"方法:Word菜单->工具->宏->安全性->安全级,设置为"中"(如果您是Word97用户，继续执行以下步骤)2)关闭本文档，重新打开本文档3)点击"启用宏"按钮，即可开始填写本文档或打印了C030306受理部门：收件日期：受理编号：国家自然科学基金申请书国家自然科学基金申请书资助类别：面上项目亚类说明：地区科学基金项目附注说明：项目名称：广西平果、大化两县壮族儿童原发性肾病综合征相关基因表达谱的绘制国家自然科学基金委员会

报告正文（一）立项依据与研究内容（4000-8000字）：1.

项目的立项依据（研究意义、国内外研究现状及分析，附主要参考文献目录。）原发性肾病综合征（PrimaryNephroticSyndrome,PNS）是一组以大量蛋白尿、低蛋白血症、高脂血症及不同程度的水肿为特征的临床症候群，是小儿最常见的泌尿系统疾病之一，国外有资料报告，16岁以下人口中每年有2-7/10万新病例发生，1968年Sohlesinger自美国报告16岁以下人口中PNS年发生率为2/10万，累积结果为每10万小儿中有15.7例或相当于每6000小儿中有1名患者，我国尚缺乏类似报告[1]。PNS的病因和发病机制尚不清楚，使其治疗缺乏特异性和明确的方向。近年来，随着人类基因组计划的进行，人们越来越多地认识到PNS的发生发展及治疗反应和预后与遗传背景相关，PNS的发生涉及一个以上的基因以及基因与环境因素的相互作用[2，3]，肾脏致病基因的研究已成为当今的热点[4]，筛选PNS的发生发展中起关键作用的基因，并给予特异性干预，对于治疗PNS具有重要意义。肾脏在不同的生理条件下都有多个基因表达，这些基因作为一个统一的整体进行调节，各基因在细胞分化、个体发育过程中保持高度时间、空间、表达量的协调性，并可能按照一定的时间顺序组成基因表达通路或基因调节网络，在这条通路或网络上可能有一条或数条起关键作用的基因，利用基因芯片高通量、平行分析的优点可以帮助我们绘制肾脏相关基因作用通路或网图，并可进一步分析病理条件下此通路或网图的变化及其中几个起关键作用的异常基因，而其他基因的异常表达是继发于关键基因的异常表达，这有助于从基因水平揭示疾病的发生本质。在PNS研究较多的是人类的白细胞抗原（HLA）基因，由于不同人种间HLA抗原分布有差异，有些抗原具有人种特异性，因此与PNS有关的HLA基因在不同人种检出情况不同。利用PCR和特异性的寡核苷酸方法研究表明，上海地区小儿激素敏感型PNS与HLA-DRB1※07明显相关，而HLA-DRB1※09与该病的频复发相关，日本小儿激素敏感型PNS与HLA-DQB1※0302明显相关，而OQA1※0103等位基因频率明显下降[5]，埃及小儿激素敏感型PNS与HLA-DQB1※0601和DRB1※01明显相关[6]，法国和德国则与HLA-DQA1※0201和DQB1※0201明显相关，而DQA1※0102和DQB1※0602等位基因频率明显下降，而且频复发患儿与之相关性较非频复发、无复发患儿更明显[7]。提示不同地区PNS儿童对激素效应存在基因表达的差异。血管紧张素转换酶（ACE）在肾脏疾病的发生发展中占有重要地位。血管紧张素Ⅱ被认为是肾内的生长激素，它参与调节肾小球内血液动力学的变化，同时还可引起肾小球系膜细胞的增生和细胞外基质的增多，这些均是导致肾小球硬化的关键因素。血管紧张素Ⅱ主要是由血管紧张素Ⅰ在ACE作用下生成。ACE在血中水平较为稳定，甚至认为与环境、代谢、激素水平及年龄无关，但却存在个体间差异，体内50%的ACE水平变化取决于ACE基因插入（I）/缺失（D）多态性的调控，ACE基因位于17q23，由26个外显子和25个内含子组成，ACE基因依据第16号内含子内-287碱基对的缺失或插入而在人群中表现为DD型、DI型和Ⅱ型的遗传多态性。DD型者血循环ACE水平最高，血管紧张素Ⅱ生成最多，DI型次之，而Ⅱ型者水平最低。Lee等[8]对PNS不同病理类型患者ACE基因I/D多态性的研究表明，微小病变组各基因型分布与正常对照组无明显差异，而局灶性节段性肾小球硬化组DD型频率显著高于微小病变组和正常对照组，而Ⅱ型频率显著降低，并且在局灶性节段性肾小球硬化组中，DD型与DI型和Ⅱ型相比，起病年龄小，对糖皮质激素疗效差，慢性肾功能不全发生率高。血小板活化因子（PAF）由炎症细胞、内皮细胞和肾小球系膜细胞产生，具有广泛的生物学活性，是引起肾损害的一个重要炎症介质。PAF通过对白细胞及补体的激活、刺激肾小球系膜细胞产生前列腺素和氧自由基等参与肾损伤、并通过增加血管通透性而引起蛋白尿。PAF分解酶基因位于第6号染色体短臂，其依据第9号外显子的点突变（G994T）而在人群中表现为GG型、GT型和TT型的遗传多态性。其中GG型者血中PAF分解酶浓度最高，GT型者较GG型者下降50%，而TT型者PAF分解酶浓度几乎为零，对激素敏感型PNS患者的研究发现[8]，虽然PAF分解酶的基因多态性与激素敏感型PNS的易感性无明显关联，但GT型者临床上第一年复发次数明显高于GG型，因此认为进行PAF分解酶基因多态性检测可预测激素敏感型PNS患者的复发情况。以上的研究提示，在人群中PNS某类基因多态性与其易感性、疾病的进展、病理类型、治疗反应等有关，不同基因突变在不同种族或民族及地域之间差异性在PNS的发生发展中起重要作用。我们的前期工作以PNS患儿的PBMC为研究对象，利用基因芯片技术对10例汉族PNS患儿进行基因的筛选，共发现418条差异表达基因与PNS发病有关，这些基因涉及到免疫、物质代谢、细胞信号传递、周期调节、增殖、凋亡、细胞骨架和运动、DNA合成、修复、转录等多方面，认为PNS的发生发展是具有不同功能的多个基因相互作用的结果[3]。迄今不同民族PNS的基因筛选国内外未见有资料报道，这些基因在不同民族PNS的发生发展中起何作用亦未明了，有进一步深入研究的必要。广西是全国唯一的壮族人群聚居地，是国家西部大开发的省区，全区人口为4751.2万，壮族为1508.8万，近年来我们对广西平果、大化两县儿童PNS的研究统计资料表明，两县儿童PNS的发生率高，平果县年发生率为28/10万，其中壮族儿童年发生率为27/10万，汉族年发生率为1/10万；大化县年发生率为23/10万，壮族年发生率为23/10万，汉族年发生率为0，可见壮族儿童PNS发生率明显高于汉族儿童。两者发病率的差异是否预示某种或某类基因差异导致壮族儿童PNS的发病率显著增高，目前尚无研究报道。综上所述，PNS的发生、发展，转归及对激素效应存在民族与地区差异，而基因的突变、缺失、多态性及表达的差异则是导致此现象发生的根源。为此，本课题在我们前期研究的基础上，利用我区丰富的少数民族儿童PNS资源的优势，对广西平果、大化两县壮族儿童PNS患儿，运用基因芯片技术，进行PBMC和肾组织的基因筛选，并与正常壮、汉儿童比较，探讨壮、汉两民族PNS患儿基因表达谱的差异，为进一步探索壮族儿童PNS的高发的原因、发病机制以及在PNS的发生发展中起关键作用的基因，为建立肾脏相关基因表达数据库和绘制肾脏相关基因作用通路或网图进一步寻找各种病理条件下的基因标志，从而为开发诊断基因芯片提供资料，下一步将研究其生活习俗、环境与PNS的关系，为从根本上治疗PNS、保护儿童健康、提高人口素质具有重大意义，将产生广泛的社会效益和经济效益。参考文献1、杨霖文.肾病综合征临床诊治及研究中的几点思考.中华儿科杂志，2000，38（5）：280-281.2、王海燕，张宏.遗传性肾小球疾病的分子遗传学研究进展及我们面临的机遇和挑战——欣闻人类基因组计划完成后的思考.中华肾脏病杂志，2003，19（5）：271-273.3、易著文，马祖祥，吴小川，等.原发性肾病综合征相关基因的筛选.中华儿科杂志，2002，40（12）：724-727.4、张建江，易著文.试论小儿肾脏病研究的发展方向.医学与哲学，2002，23（11）：48-50.5、AbeKK,MichinagaI,HiratsukaT,etal.AssociationofDQB1※0302alloantigensinJapanesePediatricPatientswithSteroid-sensitiveNephroticSyndrome.Nephron,1995,70(1):28-34.6、BakrAM,El-ChenawyF.HAL-DQB1andDQB1allelesinEygptianChildrenwithSteroidsensitiveNephroticSyndrome.PediatrNephrol,1998,12(3):234-237.7、HaeffnerA,AbbalM,MytilineosJ,etal.OligotypingforHLA-DQBinidiopathicNephroticSyndrome.PediatrNephrol,1997,11(3):291-295.8、LeeDy,KimW,KangSK,etal.Angiotensin-convertingenzymegenepolymorphisminpatientswithminimal-changenephriticsyndromeandfocalsegmentalglomerulosclerosis.Nephron.1997,77(4):471-473.9、XuH,IijimaK,TanakaSSR,etal.Platelet-activatingfactoracetylhydrolasegenemutationinJapanesenephroticsyndrome.KidneyInt,1998,54(6):1867-1871.2、项目的研究内容、研究目标,以及拟解决的关键问题：⑴研究内容：①比较壮族PNS患儿与汉族PNS及正常壮、汉族儿童外周血单个核细胞（PBMC）及肾组织的基因表达谱变化，筛选PNS相关基因；②比较壮、汉两组民族PNS的相关基因与其病理类型、治疗反应的关系。⑵研究目标①阐明壮族PNS患儿发病的相关基因及其在PNS发生发展中的作用；②揭示壮、汉两民族PNS患儿基因表达谱的差异，绘制广西平果、大化两县壮族儿童原发性肾病综合征相关基因的表达谱。⑶拟解决的关键问题壮族PNS患儿致病相关基因在壮族儿童PNS发生发展中的作用及与其病理类型、治疗反应的关系。3、拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析⑴研究方法：①祖辈三代以上均为壮族的初治PNS患儿15例；②祖辈三代以上均为壮族的健康儿童15例；③祖辈三代以上均为汉族的初治PNS患儿15例；④祖辈三代以上均为汉族的健康儿童15例；⑤PNS患儿均在采取PBMC后行肾穿活检病理检查（包括电镜），明确病理类型，并作相关基因检测；⑥无肾脏疾病史的肾脏意外伤患者肾组织基因检测（壮、汉族各15例）；⑦观察PNS相关基因与病理类型的关系；⑧标准肾上腺皮质激素治疗反应与相关基因的关系。⑵技术路线具体技术路线见下图：平果、大化两县 湖南地区 壮族儿童 汉族儿童 正常儿童 PNS儿童外周血及意外伤患者肾组织静脉血 肾活检病理改变 mRNA 比较病理改变、疗效与基因表达谱改变的关系 基因芯片RT-PCR 验证基因芯片的可靠性 ⑶实验方案：①PBMC的分离：采用Ficoll-Hypaque淋巴细胞分离液密度梯度离心法，分别分离壮、汉两民族PNS患儿和壮、汉两民族正常儿童的PBMC，并分别将分离出的PBMC和肾活检组织立即置液氮中贮存备用；②总RNA抽提及鉴定：采用Trizol一步法抽提PBMC和肾组织中的总RNA，抽提的总RNA用分光光度法检测其量和纯度；③cDNA探针标记按基因芯片说明书进行。分别取100μg壮族和汉族PNS患儿及正常壮族和汉族儿童总RNA，以Cy3-dCTP标记正常对照组（壮、汉）PBMC和肾活检组织的mRNA，Cy5-dCTP标记壮、汉族PNS患者PBMC和肾活检组织的mRNA，分别得到Cy3-cDNA和Cy5-dDNA探针。④预杂交、杂交及洗涤,按照基因芯片杂交试剂盒说明书进行,先将经95℃变性的表达谱芯片和预杂交液混合，在42℃下预杂交5-6h，以封闭一些非特异性信号，降低它们的干扰，再将上述用Cy3和Cy5标记的cDNA探针经95℃变性后，加到已预杂交的芯片上，在42℃下杂交16-18h，然后按顺序用2×SSC+0.2%SDS、0.1%×SSC+0.2%SDS、0.1%×SSC洗涤10分钟，室温晾干。用Axon公司的GenePixPiX4000B扫描仪扫描芯片、观察扫描结果。用Axon公司的GenePixPro3.0软件分析Cy3、Cy5荧光信号强度，计算Cy5/Cy3值，阳性结果判断：Cy5/Cy3≥3为该基因在PNS患者PBMC中表示增强，Cy5/Cy3≤0.3为该基因在PNS患者PBMC中表达减弱。⑷可行性分析①课题负责人及课题组多年从事儿童肾脏疾病的研究，有良好的科研素质和理论基础；②广西为全国唯一的壮族人群聚居地，平果、大化两县壮族儿童PNS发病率高（平果县壮族儿童年发生率为27/10万，大化县为23/10万），我院所在地百色市的两所附属医院均为三级甲等医院，每年收治来自平果、大化两县的壮族儿童PNS有较多的病例数，并常年开展肾穿活检术；③合作单位中南大学湘雅二医院多年开展肾脏的分子生物学的研究、熟练掌握了实验技术方法，所需仪器设备均已具备。④指导者中南大学湘雅二医院儿科易著文教授，为博士生导师，湖南省“十五”重点学科儿科学学科带头人，湖南省小儿肾脏病临床中心主任、中华医学会儿科学会常务委员、儿肾学组副组长、国际小儿肾脏病学会会员、《中华儿科杂志》、《国外医学儿科学分册》、《中国实用儿科杂志》、《临床儿科杂志》、《小儿急救医学》、《中国医师杂志》、《医学临床研究》、《循证医学》等杂志常务编委，《中国当代儿科杂志》副主编，主持过多项有关肾脏疾病国家自然科学基金、卫生部科研基金、湖南省自然科学基金课题、近五年发表相关科研论文近60余篇，出版专著10部，获省级以上成果奖6项，具有丰富的临床、教学、科研经验。本课题已取得易教授同意作为课题指导，以保证课题顺利开展和完成。（附件1易教授指导同意书）。4、本项目的特色与创新之处①首次运用基因芯片技术对壮族PNS患儿进行相关基因的筛选，并与汉族对比，探索不同民族PNS的相关基因表达；②首次探讨壮族儿童PNS的相关基因在PNS的发生发展及与病理类型、治疗反应的关系。③为建立广西壮族儿童肾脏相关基因表达数据库和绘制肾脏相关基因作用通路或网图进一步寻找各种病理条件下的基因标志，从而为开发诊断芯片提供资料。5、年度研究计划及预期研究结果⑴年度研究计划2005年1月～2005年12月完成所有病例及对照组的标本收集2006年1月～2006年12月完成所有的基因检测2007年1月～2007年10月完成相关基因与治疗反应的观察2007年10月～2007年12月完成结题报告⑵预期研究成果①筛选出壮族儿童PNS发病的相关基因；②阐明壮族儿童PNS的相关基因在PNS的发生、发展、病理类型、治疗反应的关系；③为广西壮族儿童PNS的基因诊断和治疗提供线索。以上研究成果以论文形式在学术刊物公开发表。（二）研究基础与工作条件1、工作基础①本项目组主要成员多年从事小儿肾脏疾病的研究，已熟练掌握了小儿肾脏疾病从基础到临床的研究方法，依靠分子生物学技术对肾脏疾病的研究积累了丰富的工作经验，共发表相关论文50多篇，内容包括PNS的临床治疗、发病机制的分子生物学研究、激素和脂质以及骨代谢的紊乱，以及PNS导致的其他器官的损害等多方面内容。②课题负责人长期从事肾脏病的研究，近年来主持的广西卫生厅课题“免疫抑制因子对肾小球疾病影响的研究”、广西科技厅自然科学基金课题“IL-1及IL-1Ra拮抗剂与肾小球疾病的研究”、“IL-1Ra治疗肾小球疾病的安全性的研究”，初步观察到IL-1是局部和全身炎症反应中起核心作用的细胞因子，体现在诱导肾小球系膜细胞增殖和基质的增生，是肾小球硬化的基础，应用IL-1Ra通过特异性的与IL-1受体结合从而阻断IL-1的生物活性，取得良好效果。③前期研究情况：我们已对平果、大化两县壮族儿童PNS的年发病率进行系统调查研究，发现平果、大化两县壮族儿童PNS的年发病率分别为27/10万和23/10万，汉族儿童分别为1/10万和0，对汉族儿童PNS相关基因的基因芯片检测在中南大学湘雅二医院完成。2、工作条件我院中心实验室、临床检验中心和中南大学湘雅二医院已经具备本课题研究所需的主要仪器设备条件：细胞培养室及细胞培养所需设备、透射电镜、扫描电镜、荧光显微镜、电泳设备和生化分析仪等。3、申请人简历刘运广，儿科学教授，硕士学位，担任《中华新医学》杂志、《中华中西医结合杂志》、《右江民族医学院学报》、《右江医学》等杂志常务编委，百色市儿科专科学会主任委员。主要学历：1979年10月～1984年7月右江民族医学院临床医学系本科毕业1992年8月～1995年8月广西医科大学儿科学硕士毕业研究工作简历：1986年～1990年参加卫生部课题“百色地区少年儿童异常血红蛋白病的研究”（该项目获卫生部科技成果二等奖）1989年参加广西教育厅课题“DNA体外扩增技术在遗传病产前基因诊断的应用”1985年～1988年参加中科院课题“百色地区少年儿童遗传病普查研究”1990年～1991年参加卫生厅课题“广西百色地区新生儿丙酮酸激酶缺陷的研究”1991年参加本院课题“PNS血清及骨髓微量元素的研究”1993年～1995年参加广西教育厅课题“中草药免疫糖浆对机体免疫机能影响的研究”1999年主持广西卫生厅课题“免疫抑制细胞因子对肾小球疾病影响的研究”2001年主持广西科技厅自然科学基金课题“IL-1及IL-1Ra拮抗剂与肾小球疾病的研究”2002年主持广西科技厅自然科学基金课题“IL-1Ra拮抗剂治疗肾小球疾病安全性的研究”近期发表或待发表的相关论文：1、刘运广，等.儿童难治性肾病综合征的治疗进展，实用医学杂志，1995，11（7）：481～483.2、刘运广，等.免疫抑制细胞因子与肾小球疾病的研究进展，实用儿科临床杂志，1999，14（5）：294～295.3、刘运广，等.小儿急性肾小球肾炎血尿内皮素测定的临床意义，中国当代儿科杂志，2002，4（3）：231～232.4、刘运广，等.肾病综合征患儿甲状腺功能的研究，右江医学，2004，32（1）：6-7.5、刘运广，等.甘露醇诱发急性肾功能衰竭25例临床分析，中国实用儿科杂志，2001，16（2）：94.6、刘运广，等.甘露醇诱发急性肾功能衰竭，实用儿科临床杂志，2001，16（1）：46-47.7、刘运广，等.蛋白激酶C在肾脏疾病中的作用研究近况，中华新医学杂志，2002，3（4）：339-340.在本项目中承担的任务：提出课题、决定研究方案，设计课题技术路线，拟定实验方法，撰写研究论文。组织协调科研过程中的公共关系，保证课题顺利进行。黄瑞雅，教授主要学历：1973年9月～1977年1月广西医学院医疗系毕业1996年12月～1997年12月美国德克萨斯州医疗中心进修学习2002年11月～2002年12月美国肯塔基州莫海德大学短期培训主持的课题：广西卫生厅课题：①原发性癫痫大发作脑电图检测最佳时机及相关因素研究；②桂西地区10万壮族农村人群癫痫流行病学调查。发表相关论文：1、黄瑞雅，等.儿童癫痫及抗癫痫治疗对血脂水平影响的研究，临床神经病学杂志，1996，9（5）：268-269.2、黄瑞雅，等.中枢神经系统感染患者血浆与脑脊液中内皮素变化的研究，临床神经病学杂志，1998，11（5）：275-277.3、黄瑞雅，主编.《新编临床实习医师手册》，中国科学技术出版社出版，1999年.在本项目中承担的任务：参与课题设计和实验方案的制定及实验测试。张建江，儿科学主治医师，博士生主要学历：1990.9～1995.7新乡医学院儿科系1995.8～2001.8新乡医学院第一附属医院儿科医师、主治医师2001.9～中南大学湘雅二医院儿科硕士生、博士生发表相关论文：1、张建江，易著文.试论小儿肾脏病研究的发展方向.医学与哲学，2002，23（11）：48-50.2、张建江，易著文.肥大细胞与肾脏纤维化的关系.国外医学儿科学分册，2003，30（4）：186-188.在本课题中承担的任务：收集标本与实验测试，撰写研究论文。林娜，主治医师，硕士主要学历：1988年7月～1993年7月右江民族医学院临床医学系毕业1997年8月～2000年8月广西医科大学儿科学硕士毕业发表相关论文：1、林娜，等.应用空气压缩泵联合吸入喘乐宁与爱喘乐溶液治疗小儿哮喘急性发作的效果观察，右江民族医学院学报，2000，22（5）：763.2、林娜，等.桂西地区哮喘儿童皮肤点刺试验和血清总IgE水平的研究，右江民族医学院学报，2002，24（2）：262-263.3、林娜，等.甲基强的松龙治疗婴幼儿哮喘急性重度发作的疗效观察，广西医学，2002，24（11）：1874-1875.4、林娜，等.新生儿缺氧缺血性脑病血浆胆红素水平的研究，右江民族医学院学报，2002，24（5）：728.5、林娜，等.小儿哮喘与呼吸道感染关系的研究近况，国外医学儿科学分册，2003，30（1）：46-48.6、林娜，等.口服低剂量氨茶碱联合吸入糖皮质激素治疗小儿哮喘的研究，广西医科大学学报，2003，20（3）：393-394.7、林娜，等.急性感染患儿危重病例评分与血小板数关系的探讨，右江民族医学院学报，2003，25（3）：364-366.8、林娜，等.小儿肺炎并SIRS时C-RP和血糖及血气变化的研究，右江民族医学院学报，2002，25（1）：18-20.9、林娜，等.中枢神经系统感染患儿血清与CSF液中IL-6、TNF、ET-1变化的研究，广西医学，2003，25（7）：1110-111210、林娜，等.小儿支气管哮喘与呼吸道感染关系的研究进展，国外医学儿科学分册，2003，30（1）：46-48.在本课题中承担的任务：采集标本耿文茂,儿科医师,硕士研究生1996.7—2001.7湖南医科大学本科学习2001.7今中南大学湘雅二医院儿科硕士学习近期发表论文1、耿文茂,易著文pax2在肾小管上皮细胞转分化中的作用.待发表在本课题中承担的任务：收集标本和实验测试指导者：易著文，教授，博士生导师。主要学历：1964年9月～1969年7月湖南医学院临床医学系毕业1978年9月～1981年7月湖南医学院儿科学硕士研究生毕业1994年8月～1995年9月美国弗吉尼亚州立大学儿童医学中心研修小儿肾脏病发表相关论文：1、易著文，马祖祥，吴小川，等.原发性肾病综合征相关基因的筛选，中华儿科杂志，2002，40（12）：1.2、向伟，易著文，曹艳，等.难治性肾病综合征患儿载脂蛋白E基因多态性的研究，中华肾脏病杂志，2000，16（2）：123.3、党西强，易著文，何小解，等.小儿肾病综合征血管紧张素I转换酶基因多态性的研究，中华儿科杂志，2000，38（5）：288.4、何庆南，易著文，何小解，等.肾病综合征患儿外周血单个核细胞内GRα和GRβ表达的意义，中华儿科杂志，2001，39（7）：406.5、李志辉，易著文.儿童激素耐药型肾病综合征与肾素-血管紧张素系统关系的研究，中华肾脏病杂志，2002，18（3）：224.6、李志辉，易著文，何小解，等.激素耐药型和激素依赖型肾病患儿肾脏病理计量分析，中华儿科杂志，2001，39（8）：449.7、朱翠平，易著文，何小解.人胚胎肾组织形态发生与pax-2的表达，中华儿科杂志（inpress）.主持国家自然科学基金项目：国家自然科学基金资助课题2项：MsPGN系膜细胞IL-6mRNA含量与尿IL-6活性的相关研究（1993-1995年，批准号：39270701）和MCP-1在MsPGN病理进展中的作用及反向干预的研究（2000-2002年，批准号：39970776）。已获科研成果奖励：1、IL-6与系膜增殖性肾炎的相关研究，获1998年度湖南省医药卫生科技进步一等奖及湖南省科技进步三等奖。（第1名）