【公开课】动物细胞融合技术与单克隆抗体课件-高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

2.2动物细胞融合与单克隆抗体本节聚焦1、什么是动物细胞核移植技术？2、动物体细胞核移植的基本过程是什么？3、体细胞核移植技术的应用前景有哪些？4、怎样理性看待体细胞核移植技术存在的问题？植物体细胞杂交植物细胞融合植物组织培养温故而知新植物体细胞杂交技术跨越不同种植物之间生殖隔离的屏障，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育出新的作物类型。

有没有技术让不同种动物的体细胞杂交，培育出集不同细胞优势于一身的动物细胞呢？思考实例：1970年，动物细胞融合实验人细胞鼠细胞红色荧光染料标记的膜蛋白绿色荧光染料标记的膜蛋白细胞融合人鼠杂交细胞37°培养40min细胞融合灭活的仙台病毒诱导

如果让动物细胞进行融合，与植物有哪些不同之处？思考无需去除细胞壁全能性受限制，不能培育成新的动物个体1．概念：动物细胞融合也称________，是指_____________动物细胞结合形成___________的过程。2．原理：________________。3．诱导细胞融合的三种方法(1)物理法：如________、___________等。(2)化学法：如_________________

(3)生物法：如___________________。4．过程：5．结果：融合后的杂交细胞具有原来______或___________的遗传物质。

细胞杂交两个或多个

一个细胞细胞膜的流动性离心电融合法聚乙二醇（PEG)灭活病毒诱导法一、动物细胞融合两个多个细胞动物细胞融合特有的诱导方法细胞膜融合细胞核融合细胞质融合融合完成的标志一、动物细胞融合技术仙台病毒紫外线灭活丧失感染活性（不感染细胞）保留融合活性（能诱导细胞融合）1、什么是病毒的灭活？灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。（二）问题：一、动物细胞融合技术病毒表面的糖蛋白和一些酶与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。2、灭活病毒诱导细胞融合的原理6.优点突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能种间、属间、科间，甚至动物和植物之间的细胞融合都已获得成功。一、动物细胞融合技术7.应用①研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。②利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。思考：19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。如何解释这一现象？病人体内病毒等能诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。肺结核病人病理切片一、动物细胞融合技术（三）灭活病毒诱导细胞融合过程：一、动物细胞融合技术（四）动物细胞融合技术全过程：动物细胞融合动物细胞培养一、动物细胞融合技术比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导融合的方法意义和用途（六）植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较克服远源杂交的障碍，获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性植物细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（离心、振荡、电激）化学（PEG）物理、化学方法（PEG）灭活的病毒获得杂种细胞，制备单克隆抗体一、动物细胞融合技术比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用途植物体细胞杂交动物细胞融合总结：动、植物细胞杂交技术比较细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合。用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合。离心、电刺激、振动、聚乙二醇。特有:灭活病毒。克服远源杂交不亲和，获得杂种植株。获得杂种细胞、制备单克抗体。植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞融合前的处理方法诱导细胞融合的方法细胞融合成功的标志主要用途意义细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性细胞膜具有一定的流动性用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法再生出细胞壁细胞核的融合获得完整的杂种植株主要用于制造单克隆抗体打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能例1[2021·天津静海一中月考]关于动物细胞融合与植物体细胞杂交技术的比较,下列叙述合理的是 (

)A.均可使用PEG、电激或灭活病毒诱导细胞融合B.两者都可以跨越种属间的生殖隔离C.两者都可以体现细胞的全能性D.在适宜条件下,均可发育成完整个体任务活动B①什么是克隆？

从一个共同祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体，在动物细胞水平指动物细胞培养。②什么是抗体？

抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白③抗体的分布？

主要分布在血清中二、单克隆抗体的制备二、单克隆抗体技术及其应用1.定义：

机体受抗原刺激后产生的，能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。2.抗体的分布：（1）血清（主要）（2）组织液及外分泌液（如乳汁中，为新生儿提供抗体）3.机体通过什么免疫过程分泌抗体？体液免疫抗体二、单克隆抗体技术及其应用产量低，纯度低，制备的抗体特异性差、反应不灵敏反复注射动物体内抗原多种浆细胞多种抗体（血清）每一个浆细胞只能产生一种特异性抗体体内产生的特异性抗体多达百万种缺点单克隆抗体技术1.机体通过什么免疫过程分泌抗体？体液免疫2.抗体主要分布在哪里？血清3.早期获得抗体的方法有哪些？

动物会接触多种天然抗原，体内相应产生的特异性抗体种类可以达到百万种以上，但每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。因此，要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的淋巴细胞，形成细胞群。面临问题：在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的。因为单个B淋巴细胞寿命有限，又因为能产生抗体的B淋巴细胞属于高度分化的细胞，不能无限繁殖不可能无限增殖。如何解决这个问题呢？二、单克隆抗体的制备1.传统抗体制备方法及缺陷（1）制备方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。（2）缺陷：产量低、纯度低，而且特异性差。每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体单一B淋巴细胞细胞群选择克隆产生大量纯度高特异性强的抗体B淋巴细胞不可能无限增殖2.大量制备单一抗体的思路和需解决的问题（八）传统抗体制备方法及缺陷不能无限增殖产生大量抗体动物体内抗原

刺激浆细胞多种抗体筛选单一B细胞增殖分化一、动物细胞融合技术抗原不纯缺点：制备的抗体一般为多克隆抗体，产量低、纯度低，特异性差

１）体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上２）每个B淋巴细胞只分泌一种特异性的抗体1、科学家发现：单克隆抗体如何获得大量、单一的抗体？体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖2、需解决问题：3、遗憾：如何解决这一难题？一个B淋巴细胞细胞群抗体克隆二、单克隆抗体技术及其应用注射每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群，就可以获取纯度高、特异性强的单克隆抗体。由于增殖能力有限，体外培养B淋巴细胞难以大量制备单抗有限稀释克隆化培养二、单克隆抗体技术及其应用由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。二、单克隆抗体及其应用1、单克隆抗体：3.单克隆抗体的制备（1）单克隆抗体：由单一B淋巴细胞克隆产生的特异性抗体。（2）单克隆抗体的制备思路一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖动物细胞融合杂交瘤细胞动物细胞培养单克隆抗体杂交瘤细胞：既能迅速大量增殖，又能产生抗体１：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的思考讨论２：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和无限增殖能力同时具备癌细胞动物细胞融合二、单克隆抗体及其应用一个极富创造力的方案：动物细胞融合杂交细胞动物细胞培养单克隆抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体1975年，米尔斯坦和柯勒1984年，诺贝尔生理学或医学奖二、单克隆抗体及其应用杂交瘤细胞

既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体用抗原注射小鼠从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞的培养已免疫B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合多种杂交细胞二、单克隆抗体及其应用小鼠的脾脏中获取2、单克隆抗体的制备过程置于选择性培养基上培养

2杂交瘤细胞13第一次筛选多种杂交瘤细胞融合的细胞骨髓瘤细胞自身融合B细胞自身融合杂交细胞132未融合的B淋巴细胞未融合的骨髓瘤细胞二、单克隆抗体及其应用克隆化培养抗体检测第二次筛选(抗原-抗体杂交技术)多种杂交瘤细胞能分泌所需抗体的杂交瘤细胞阳性细胞二、单克隆抗体及其应用若杂交瘤细胞混合培养，得到的是能与特定抗原结合的多种抗体。此处将杂交瘤细胞进行有限稀释，虽然接种到细胞培养板上，每个培养孔只有一个杂交瘤细胞，这样每个孔培养得到的抗体就是单抗。注射到小鼠体内体外培养分离、提纯单克隆抗体体内或体外培养能分泌所需抗体的杂交瘤细胞细胞培养工程师在工作二、单克隆抗体及其应用【培养杂交瘤细胞的方法比较】项目腹腔培养体外培养优点缺点易于控制培养条件（如无需提供无菌环境等），操作简单，成本较低规模小，产量少可大规模培养，大量生产需要人为控制培养条件，成本相对较高二、单克隆抗体技术及其应用单克隆抗体的制备过程动物细胞融合动物细胞培养给小鼠注射特定的抗原蛋白B淋巴细胞（免疫）骨髓瘤细胞杂交细胞杂交瘤细胞单克隆抗体能分泌所需抗体的杂交瘤细胞第一次筛选第二次筛选二、单克隆抗体及其应用诱导融合选择培养基克隆化培养，专一抗体检验体外培养或小鼠腹腔内增殖特异性强灵敏度高可大量制备既能大量繁殖又能产生专一抗体注射到腹腔注射抗原培养骨髓瘤细胞多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合多种杂交细胞诱导融合抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞体外培养用特定抗原对小鼠免疫，并从其脾中获取能产生特定抗体的B淋巴细胞用特定的选择培养基进行筛选：只有融合的杂交瘤细胞才能生长多轮次的克隆化培养和抗体检测体外大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖从培养液或小鼠腹水中获得大量的单克隆抗体杂交瘤细胞单克隆抗体B淋巴细胞依靠细胞表面受体与抗原（固定在固相载体上）结合。取出固相载体，再将与抗原结合的B林巴细胞从固相载体上冲洗下来。

（由于B细胞表面受体还在，所以此处得到的并不是浆细胞）同一种抗原可能与多种抗体与结合。因此，可能存在多种B淋巴细胞都可以依靠其细胞表面受体与同一种抗原结合。注射到腹腔注射抗原培养骨髓瘤细胞多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合多种杂交细胞诱导融合抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞体外培养用特定抗原对小鼠免疫，并从其脾中获取能产生特定抗体的B淋巴细胞用特定的选择培养基进行筛选：只有融合的杂交瘤细胞才能生长多轮次的克隆化培养和抗体检测体外大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖从培养液或小鼠腹水中获得大量的单克隆抗体杂交瘤细胞单克隆抗体HAT培养基上只有杂交瘤细胞可以生长增殖。机理可以自行查询。若杂交瘤细胞混合培养，得到的是能与特定抗原结合的多种抗体。此处将杂交瘤细胞进行有限稀释，虽然接种到细胞培养板上，每个培养孔只有一个杂交瘤细胞，这样每个孔培养得到的抗体就是单抗。注射到腹腔注射抗原培养骨髓瘤细胞多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合多种杂交细胞诱导融合抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞体外培养用特定抗原对小鼠免疫，并从其脾中获取能产生特定抗体的B淋巴细胞用特定的选择培养基进行筛选：只有融合的杂交瘤细胞才能生长多轮次的克隆化培养和抗体检测体外大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖从培养液或小鼠腹水中获得大量的单克隆抗体杂交瘤细胞单克隆抗体部分杂交瘤细胞在培养过程种可能失去增殖或分泌抗体的能力，因此需要多轮抗体检测和克隆化培养，以获得足够数量的稳定的既能增殖又能分泌抗体的杂交瘤细胞。进行诱导融合后，培养基中会有几种细胞？思考15种骨髓瘤+B细胞骨髓瘤+骨髓瘤B细胞+B细胞B细胞(未融合)骨髓瘤(未融合)如何筛选出所需的杂交瘤细胞？思考2选择培养基二、单克隆抗体技术及其应用1．DNA的合成有D途径和S途径两种途径，其中D途径是在

叶酸的辅助下，由氨基酸等小分子合成核苷酸；S途径是利用酶，催化次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶脱氧核苷（T）生成相应的核苷酸。2．已知氨基蝶呤（A）是叶酸的拮抗物；实验所用的骨髓瘤细胞缺乏S途径中的酶。拓展二、单克隆抗体技术及其应用B淋巴细胞骨髓瘤细胞（A）合成DNAD途径S途径D途径氨基喋呤A、B、AA、BB、AB1、AB2、AB3克隆化培养、抗体检测多孔细胞培养板96孔板每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞①将杂交瘤细胞进行有限稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。②然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。③阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。检测原理？抗原—抗体杂交技术如何得到能够产生所需的单一抗体的杂交瘤细胞？思考3

使用96孔板培养杂交瘤细胞，尽可能每一个孔只接种一个杂交瘤细胞，即将单个杂交瘤细胞单独培养，通过克隆化培养+抗体检测，即可获得大量产生所需抗体的杂交瘤细胞。二、单克隆抗体技术及其应用克隆化培养、抗体检测？多孔细胞培养板96孔板每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞①将杂交瘤细胞进行有限稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。②然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。③阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。检测原理？抗原—抗体杂交技术思考4如何大量培养杂交瘤细胞，获得所需抗体？将抗体检测阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖，从而获得大量单克隆抗体。体外培养注射到小鼠腹腔内二、单克隆抗体技术及其应用抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞体外培养注射到小鼠腹腔内体内培养细胞培养液提取小鼠腹水中提取特异性强，灵敏度高，可大量制备单克隆抗体易于控制培养条件（如无需提供无菌环境等），操作简单，成本较低，规模小，产量少需要人为控制培养条件，成本相对较高知识拓展：第一次筛选获得杂交瘤细胞①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。②人B淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。如果D途径被阻断，它会因不能合成DNA而死。筛选出杂交瘤细胞方法？B淋巴细胞及同型融合细胞不能无限增殖，死亡骨髓瘤细胞及同型融合细胞不能无限增殖，死亡杂交瘤细胞能无限增殖，生长二、单克隆抗体及其应用培养基中加入氨基蝶呤阳性孔抗体检测的方法——抗原-抗体杂交法在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的目的和方法是不相同的。将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个细胞进行培养（克隆化培养）一段时间后，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔多孔细胞培养板抗体检测板分泌抗体能跟特定抗原结合的细胞即为所需杂交瘤细胞二、单克隆抗体及其应用第一次筛选(1)细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。(2)免疫的B淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但它不能分裂增殖，其本身也不能在体外长期存活。(3)鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但它能不断分裂增殖。如果它的D途径被阻断的话，它会因不能合成DNA而死。

请根据上述资料提出筛选出杂交瘤细胞的方法？培养基中添加氨基嘌呤（HAT选择培养基）克隆化培养和抗体检测每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞有限稀释法第二次筛选检测原理：抗原和抗体能够特异性结合(分子水平的鉴定）单克隆抗体制备过程中两次筛选的比较项目第一次筛选第二次筛选筛选原因筛选目的

筛选出？

筛选出

的杂交瘤细胞筛选方法用特定的选择培养基筛选：未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会

，只有融合的杂交瘤细胞才能

。

用96孔板培养，在每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞的情况下进行克隆化培养和

，经多次筛选得到足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞能分泌所需抗体死亡抗体检测生长诱导融合后得到多种融合细胞，还有未融合的细胞等由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞从已免疫小鼠的脾脏中取B淋巴细胞小鼠腹腔多种杂交细胞抗体检测阳性的杂交瘤细胞细胞融合选择培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞单克隆抗体体外细胞培养克隆化培养与抗体检测二、单克隆抗体技术及其应用例2如图2-2-6为单克隆抗体的制备流程示意图。下列叙述正确的是(

)图2-2-6A.甲是从已免疫的小鼠脾脏中获得的致敏T淋巴细胞B.①表示将骨髓瘤细胞去核后进行细胞融合C.乙为融合细胞,同时具有细胞甲和骨髓瘤细胞的特性D.②表示筛选能产生特异性抗体的细胞任务活动D变式训练如图所示为杂交瘤细胞的制备示意图。骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT-),在HAT选择培养液中不能正常合成DNA,无法生长。下列叙述错误的是 (

)A.可用灭活的病毒诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合B.两两融合的细胞都能在HAT选择培养液中生长C.杂交瘤细胞需进一步筛选才能用于生产D.细胞膜的流动性是细胞融合的基础B思考讨论资料1

用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”，在妊娠第8天就可以作出诊断，这比原来的诊断方法提前了10d左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90%以上。二、单克隆抗体技术及其应用

在受精后不久，胎盘滋养层细胞就会分泌人绒毛膜促性腺激素(HCG)，是由受孕妇女体内胎盘产生的一种糖蛋白类激素，在孕妇的尿液中大量存在。而在非妊娠妇女尿液中几乎不含有。抗（人绒毛膜促性腺激素）单克隆抗体思考讨论资料2

使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀伤肿瘤细胞。但细胞毒素没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，这限制了它在临床上的应用。抗体一药物偶联物（antibody-drugconjugate,ADC）通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。ADC通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成，它的作用机制如下图所示。二、单克隆抗体技术及其应用抗体药物接头细胞凋亡ADC被细胞吞噬讨论1：ADC的抗体和药物各具有什么作用？

抗体主要发挥靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞；药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞。2.除了细胞毒素，还有哪些物质理论上可以作为ADC偶联的药物？3.单克隆抗体诊断试剂盒和ADC在临床应用上各具有什么优势？①可以用放射性同位素标记单克隆抗体进行靶向放疗；②一些作用于细胞信号转导通路的药物可以通过阻断肿瘤细胞的信号通路来抑制其生长，理论上也可以将这些药物与单克隆抗体结合进行治疗①单克隆抗体诊断试剂盒中的单克隆抗体只与特定的抗原反应，因此检测的特异性和灵敏度大大提高；②生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可以传代培养、冷冻保存和复苏利用，有利于控制产品的质量和标准化生产诊断试剂盒；②ADC能够协同发挥抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿瘤细胞的杀伤作用，因此它在临床上具有靶点清楚、毒副作用小等优点二、单克隆抗体技术及其应用讨论1.ADC的抗体和药物各具有什么作用？

抗体主要发挥靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞。药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞。讨论2.除了细胞毒素，还有哪些物质理论上可以作为ADC偶联的药物？

可用放射性同位素标记单克隆抗体进行靶向放疗。一些作用于细胞信号转导通路的药物可以通过阻断肿瘤细胞的信号通路来抑制其生长，理论上也可以将这些药物与单克隆抗体结合进行治疗。二、单克隆抗体技术及其应用讨论3.单克隆抗体诊断试剂盒和ADC在临床上各具有什么优势？

单克隆抗体诊断试剂盒中的抗体只与特定的抗原反应，故特异性和灵敏度提高，生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可以传代培养、冷冻保存和复苏利用，利于控制质量和标准化生产。ADC能够协同发挥抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿瘤细胞的杀伤作用，因此它在临床上具有靶点清楚、毒副作用小等优点。二、单克隆抗体技术及其应用1、诊断试剂——最广泛应用抗原-抗体杂交法抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体比原来诊断方法提前了10d左右，准确率在90﹪以上。单克隆抗体的应用?具有准确、高效、简易、快速特点诊断优点：二、单克隆抗体及其应用思考讨论:乙肝测定试剂艾滋病检测试剂二、单克隆抗体及其应用主要用于癌症治疗。如：单克隆抗体+药物=“生物导弹”2、用于治疗疾病和运载药物优点：位置准确、疗效高、副作用小(“生物导弹”—单抗导向，药物为弹头)二、单克隆抗体及其应用“生物导弹”追踪癌细胞用于疾病的治疗和运载药物(主要用于癌症的治疗)生物导弹——单克隆抗体＋抗癌药物(放射性同位素/细胞毒素）单克隆抗体：(1).特异性强、灵敏度高

生物导弹单抗抗癌药物原理：组成：(2).疗效高、毒副作用小：不损伤正常细胞，减少剂量导向作用，将药物定向带到癌细胞所在位置抗癌药物：杀死癌细胞单克隆抗体的优点（1）能准确地识别抗原的细微差异；（2）与特定抗原发生特异性结合；（3）可以大量制备。单克隆抗体的应用（1）广泛用作诊断试剂利用同位素或荧光标记的单克隆抗体在特定组织中成像的技术，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。乙肝测定试剂艾滋病检测试剂（2）运载药物：如抗体-药物偶联物（ADC）。生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤(单抗导向，药物为弹头)优点：位置准确、疗效高、副作用小（3）直接用于治疗疾病。实例：利妥昔单抗(美罗华)是一种针对CD20抗原的人鼠嵌合型单克隆抗体，是第一个被FDA批准用于临床治疗的单抗。进入人体后能通过介导抗体依赖的细胞毒性作用、补体依赖的细胞毒性作用和抗体与CD20分子结合引起的直接效应，抑制细胞生长，改变细胞周期以及凋亡等方式杀死淋巴瘤细胞。在医学领域，单克隆抗体药物占有非常重要的地位。项目第一次筛选第二次筛选（需要多次筛选）筛选原因方法筛选结果诱导融合后得到多种杂交细胞，还有未融合细胞等用特定的选择培养基进行筛选：未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长。筛选出融合的杂种细胞选择培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞。用96孔板培养，在每个孔中尽量接种一个杂交瘤细胞的情况下进行克隆化培养和抗体检测，经过多次筛选得到足够数量的能分泌所需抗体的细胞。筛选出分泌所需抗体的杂交瘤细胞二、单克隆抗体技术及其应用动物细胞融合技术单克隆抗体的制备单克隆抗体的应用1.动物细胞融合的概念、结果、原理、意义是什么2.动物细胞融合常用的方法，3.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较1.单克隆抗体制备的研究背景1.诊断试剂2.运载药物3.治疗疾病2.单克隆抗体制备动物细胞融合技术与单克隆抗体课堂小结本节小结（1）第一次筛选的目的：（2）如何筛选：（3）筛选原理：（4）杂交瘤细胞的特点：（5）第二次筛选的目的：（6）如何筛选：筛选获得杂交瘤细胞用特定的选择培养基进行筛选

在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长既能迅速大量繁殖，又能产生抗体单克隆抗体及其应用获得足够数量的能分泌所需抗体杂交瘤细胞

用96孔板培养，在每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞的情况下，进行克隆化培养和抗体检测（进行多次筛选）（7）选择抗体检测呈___性的杂交瘤细胞，即_______________________（8）抗体检测原理__________________________________阳分泌的抗体能与特定的抗原结合抗原和抗体能够特异性结合(分子水平的鉴定）（9）如何获取大量所需杂交瘤细胞（10）如何获取单克隆抗体①体外培养____________________________②小鼠腹腔内培养____________________________（11）单克隆抗体的优点在体外条件下大规模培养（接种于培养液中）或注射到小鼠腹腔内增殖从细胞培养液中获取从小鼠腹水中获取

能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备一、概念检测1.下列有关动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述，错误的是（）A.它们的原理都涉及细胞膜的流动性B.都可以用电融合法或PEG融合法诱导融合C.融合前都需用纤维素酶或果胶酶处理细胞D.前者主要为了获得细胞产品，后者主要为了获得杂种植株练习与应用C2.科学家以SARS病毒的核衣壳蛋白为抗原，制备出了单克隆抗体。下列相关叙述正确的是（）A.利用该单克隆抗体可以诊断是否感染SARS病毒B.体外培养单个B淋巴细胞可以获得针对SARS病毒的单克隆抗体C.将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合,经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞D.将纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，从小鼠血清中分离出的抗体为单克隆抗体练习与应用A练习与应用二、拓展应用假如你掌握了动物细胞融合技术，你想用这种技术来解决哪些问题？解决这些问题的大致思路是怎样的？这样做会有什么风险？请查阅相关资料，完善自己的思路，并形成文字报告，与同学交流。可以利用动物细胞融合技术培育多倍体胚胎,研究其发育机制,甚至可能培育出新的物种。但是,目前相关技术还不成熟,存在融合率低、胚胎死亡率高等问题,并且还可能带来些伦理方面的问题。一、概念检测1.下列有关动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述，错误的是（）A.它们的原理都涉及细胞膜的流动性B.都可以用电融合法或PEG融合法诱导融合C.融合前都需用纤维素酶或果胶酶处理细胞D.前者主要为了获得细胞产品，后者主要为了获得杂种植株练习与应用C2.科学家以SARS病毒的核衣壳蛋白为抗原，制备出了单克隆抗体。下列相关叙述正确的是（）A.利用该单克隆抗体可以诊断是否感染SARS病毒B.体外培养单个B淋巴细胞可以获得针对SARS病毒的单克隆抗体C.将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞D.将纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，从小鼠血清中分离出的抗体为单克隆抗体A练习与应用下面为制备单克隆抗体和多克隆抗体的示意图，据图回答下列问题：

（1）图中向小鼠注射抗原后，所获得的免疫抗血清实际上是含有__

__

__（填写抗体的名称）的混合物，这种方法制备的抗体不仅产量低，而且纯度低。与其相比，单克隆抗体突出的优点在于它的__

___，并能大量制备。

（2）图中选用B细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，说明细胞膜具有______；如果仅考虑细胞的两两融合，其融合细胞有______种类型。

（3）图中两次筛选的目的不同，其中筛选①的目的是筛选出____

__，筛选②的目的是筛选出_____

_。

（4）科学工作者正在研究的用于治疗癌症的“生物导弹”就是__

____，请指出一种用“生物导弹”治疗癌症的方法较普通化疗