临床基因扩增检验实验室的设置质量管理优秀课件

临床基因扩增检验实验室的设置质量管理第1页，共69页，2023年，2月20日，星期三题外话：不参加实习课……？参加实习课……？第2页，共69页，2023年，2月20日，星期三对相关管理文件的理解：临床基因扩增检验实验室管理暂行办法临床基因扩增检验实验室基本设置标准（第六条）临床基因扩增检验实验室工作规范（第十条、第十三条、第十四条）临床实验室必须遵循的管理办法及其它行业标准第3页，共69页，2023年，2月20日，星期三强调：污染的控制：预防为主质量保证第4页，共69页，2023年，2月20日，星期三污染的途径：实验材料试剂每一成分设备的每一部位每一操作步骤第5页，共69页，2023年，2月20日，星期三污染的判断：经验：全阳性，CT值>35；标准品的CT值发生波动阴性质控阳性阳性率异常增高轻微污染和非特异性扩增？第6页，共69页，2023年，2月20日，星期三污染和非特异性扩增:目的基因过程控制反应体系（引物、模版、酶、镁离子、退火、循环）条件优化第7页，共69页，2023年，2月20日，星期三控制的手段：工作区的严格划分SOP的制订和严格执行去污染措施的常规采用第8页，共69页，2023年，2月20日，星期三污染的监测：阴性质控的设置：阴性血清样本以水为模拟标本仅含扩增反应液（加鉴别实验室是否污染的空白管)第9页，共69页，2023年，2月20日，星期三质控品的位置标准品－空白－阳性质控－阴性质控－临床样本标准品－空白－阳性质控－临床样本－阴性质控第10页，共69页，2023年，2月20日，星期三实验室的设置管理要求：设置标准和工作规范具体落实：实事求是、因地制宜第11页，共69页，2023年，2月20日，星期三设置标准和工作规范

“原则上分为四个分隔的工作区；……各区必须有明确的标记……”“每一区域都须有专用的仪器……；不同的工作区应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服……；离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出……”“……，可在开展临床标本检测前对提取方法进行评价”“……，本区如采用副压条件或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前区的可能性。第12页，共69页，2023年，2月20日，星期三理想的设置缓冲间缓冲间扩增区试剂准备区样本制备区产物分析区空气流向空气流向空气流向缓冲间专用走廊工作流向磁性连锁装置第13页，共69页，2023年，2月20日，星期三现实的问题是：建筑结构通道、门水电供应采光、通风第14页，共69页，2023年，2月20日，星期三基本的要求:四个区域必须是相互独立的各区的仪器设备及各种物品必须是专用的各区间不能直通，应有缓冲间，供换工作服及鞋子用产物分析区应安装排风扇或其它抽风装置。第15页，共69页，2023年，2月20日，星期三扩增区试剂准备区样本制备区产物检测区其它实验室走廊实例：第16页，共69页，2023年，2月20日，星期三其它实验室样本制备区扩增区试剂准备区产品检测区走廊实例：第17页，共69页，2023年，2月20日，星期三实例：产物检测区扩增区样本制备区其它实验室第18页，共69页，2023年，2月20日，星期三休息区试剂准备区扩增区产物检测区走廊模板加样区实例：样本处理区第19页，共69页，2023年，2月20日，星期三实例：第20页，共69页，2023年，2月20日，星期三小结：处理原则的核心是通过合理的设置解决好临床PCR检测实际运作动态过程中可能发生的污染的预防问题因此，实验室的设计必须充分考虑到对污染来源和污染途径的预防和控制第21页，共69页，2023年，2月20日，星期三实验室各区的功能和配置：第22页，共69页，2023年，2月20日，星期三试剂储存和准备区储存试剂的制备试剂的分装主反应混合液的制备冰箱混匀器微量加样器可移动紫外灯专用工作服和工作鞋消耗品（带滤心吸头、离心管、一次性手套等）专用办公用品等。第23页，共69页，2023年，2月20日，星期三标本制备区：临床标本的保存核酸提取、储存及其加入至扩增反应管测定RNA时cDNA的合成不得在本区对样本进行PCR扩增冰箱(2~8℃和-20℃或-80℃)高速台式冷冻离心机水浴箱和/或加热模块生物安全柜混匀器微量加样器可移动紫外灯专用工作服和工作鞋专用消耗品专用办公用品等第24页，共69页，2023年，2月20日，星期三扩增区：DNA或cDNA扩增已制备的DNA模板和合成的cDNA的加入主反应混合液制备成反应混合液如果空间允许的话，模板的加入也可以在一个独立的空间内完成核酸扩增仪微量加样器(视情况定)可移动紫外灯专用工作服和工作鞋专用消耗品专用办公用品等第25页，共69页，2023年，2月20日，星期三产物分析区：扩增片段的测定最主要的扩增产物污染来源有可能使用致突变和有毒物质微量加样器可移动紫外灯专用工作服和工作鞋专用消耗品专用办公用品等第26页，共69页，2023年，2月20日，星期三辅助用房：清洁区标本接受区：灵活设置不干扰四区规范的保存和传递第27页，共69页，2023年，2月20日，星期三实验室使用和管理：标本接受区样本制备区扩增区产物分析区试剂准备区第28页，共69页，2023年，2月20日，星期三区域的适当合并：

“由于测定技术总是在发展之中，区域的合并应根据仪器的特点而定”第29页，共69页，2023年，2月20日，星期三小结：从核心仪器特点、实验室的现状出发，综合考虑管理要求尽可能在现有条件下满足管理要求以管理措施弥补硬件的不足有条件，留有余地再好的分区设置，如果不辅之与认真执行的相应的管理制度，等同于无。第30页，共69页，2023年，2月20日，星期三实验室质量体系的建立：管理要求体系建立第31页，共69页，2023年，2月20日，星期三管理要求：1实验室设置和设备1.1实验室原则上应分为四个区，但如使用全自动扩增检测仪，区域可适当合并。1.2各工作区的明确标记1.3实验室设置应能有效地防止PCR后区产物的污染。

……第32页，共69页，2023年，2月20日，星期三管理要求：2设施和环境2.1实验室的设施、工作区域、能源、照明、温控、通风等。应便于检测工作的正常进行。2.2实验室应配备温度湿度计、稳压电源等。2.3进入和使用实验室各区域应有明确的限制和控制。2.4应有实验室清洁、消毒制度及相应用具；2.5实验室应有有关生物污染物处理、生物防护等措施及相应用具；第33页，共69页，2023年，2月20日，星期三管理要求：3人员3.1实验室应配备足够数量的人员；这些人员必须经过培训，并取得上岗证；3.2实验室应有培训计划和措施，保证其技术人员得到及时培训。3.3实验室应保存其技术人员有关资格证书（如上岗证）、培训、技能和经历等技术档案。第34页，共69页，2023年，2月20日，星期三管理要求：4设备管理4.1主要设备应有维护程序文件及维护记录；4.2(a)有问题的设备应立即停止使用，并加上明显标识，如可能应将其贮存在规定的地方直至修复；(b)修复的设备必须经校准、检定（验证）或检测满足要求后方能再次投入使用；(c)实验室应检查由于上述缺陷对以前所进行的检测工作的影响。4.3加样器、温度计、扩增仪和酶标仪等应有校准程序并进行校准，扩增仪和酶标仪应有明显的标识表明其校准状态。4.4应保存扩增仪、酶标仪、生物安全柜、加样器等设备的档案第35页，共69页，2023年，2月20日，星期三管理要求：5检测方法5.1实验室应制定：有关仪器设备操作程序；有关扩增检测的工作程序。5.2所有上述标准操作程序都应现行有效并便于工作人员使用。5.3实验室应有仪器、试剂、消耗品的选购、验收、贮存和质检程序；必须使用经国家有关部门批准的试剂和仪器。第36页，共69页，2023年，2月20日，星期三管理要求：6标本管理6.1实验室应建立对拟检测标本的唯一编号识别系统。6.2实验室应制定有关标本收集、处理、运送、贮存程序。6.3在接收标本时应有其状态的详细记录。6.4实验室应确定标本是否符合检测要求,拒收标本原因要明确。6.5如果标本必须在特定的环境条件下（如2-8℃、

-20℃和-70℃低温）贮存，则应对这些条件加以维持、监控和记录；第37页，共69页，2023年，2月20日，星期三管理要求：7记录7.1实验室应有适合自身实际情况又符合现行规章制度的记录管理制度；7.2记录应有参与标本收集、标本准备和处理、检测的人员签字。7.3所有记录和报告都应安全贮存、妥善保管并保密。第38页，共69页，2023年，2月20日，星期三管理要求：8报告8.1检测结果的报告应准确、清晰和客观。定性测定报告“阴性”或“阳性”；定量测定则以拷贝数/ml或IU/ml报告。8.2每份报告应包括以下信息：（a）标题，例如“检测报告”（b）报告的唯一性标识（如序号）；（c）检测标本的特性和状态；（d）检测标本的接收时间和进行检测的时间；（f）采用的检测方法；（g）实验操作及校核人员的签字，以及签发日期；（h）检测报告中应给出参考结果或范围；8.3当报告的有效性发生疑问时，实验室应立即通知临床相关科室予以改正。8.4当临床科室或患者要求用电话、图文传真或其它电子和电磁设备传送结果时，实验室应保证工作人员遵循文件化的程序，并为对方保密。第39页，共69页，2023年，2月20日，星期三管理要求：9质量控制9.1实验室应有室内质量控制标准操作程序文件：（a）质控物的合理性；（b）质控方法（图）的有效性；（c）失控的判断；（d）失控的措施。9.2实验室应参加室间质量评价第40页，共69页，2023年，2月20日，星期三管理要求：10抱怨10.1实验室应制定抱怨及其处理的标准操作程序；应将抱怨资料及处理抱怨所采取的措施及结果记录归档保存。10.2当抱怨或其它任何事项是对实验室是否符合其现行程序、或者是否符合《临床基因扩增实验室管理暂行办法》和《临床基因扩增实验室工作规范》、或是对其它有关实验室校准或检测质量提出疑问时，则实验室应立即对这些范围的工作和有关职责进行审核。第41页，共69页，2023年，2月20日，星期三管理要求（现场考核）：送审的文件描述与实验室实际情况的一致性实际运行与文件规定的一致性人员素质：对文件的认知、熟悉、灵活运用程度第42页，共69页，2023年，2月20日，星期三现场考核的实际内涵：认识到不到位落实到不到位符合性检查加指导性检查有重点的全面检查第43页，共69页，2023年，2月20日，星期三建立质量管理体系首先要解决的问题：第一个问题：质量体系建立的核心问题是什么？第二个问题：质量体系模式要达到的管理目的是什么？第三个问题：达到目的的方法（途径、手段）是什么？第44页，共69页，2023年，2月20日，星期三质量体系的定义

为实施质量管理所需的组织结构、程序、过程和资源。要点：定义涵盖了实验室管理的每一个方面。

第45页，共69页，2023年，2月20日，星期三组织结构：一个组织为行使其职能，按某种方式建立的职责、权限及其相互关系。程序：为进行某项活动所规定的途径。过程：将输入转化为输出的一组彼此相关的资源和活动。第46页，共69页，2023年，2月20日，星期三四个组成部分的关系：关键：核心——过程（活动）纽带——程序

组织结构程序

资源过程第47页，共69页，2023年，2月20日，星期三理解“过程”的重要性

1、工作是通过过程来完成的。

2、质量管理是通过对各种过程的控制来实现的。

3、质量管理本身也是一系列的过程过程的分解、控制过程的有机组合过程第48页，共69页，2023年，2月20日，星期三前处理检测样本采集和接受编制报告审核报告发放记录保存登记编号质控咨询第49页，共69页，2023年，2月20日，星期三质量体系运行的目的方针目标质量环及要素QS结构QS文件QS运行QS审核QS评审质量改进报告证书第50页，共69页，2023年，2月20日，星期三主要手段：质量体系文件质量方针：质量手册：阐明实验室的质量方针，各方面质量管理的一般性描述程序性文件：对通用于整个实验室的某些方面工作的文件化描述标准操作程序（SOP文件）：是实验室最为具体、最具有可操作性、也是使用频率最高的文件第51页，共69页，2023年，2月20日，星期三PCR实验室技术验收对文件的要求：仪器设备的维护保养程序；仪器设备的校准程序；仪器设备的操作程序；临床标本的收集程序；临床标本的处理（核酸纯化）程序；临床标本的保存程序；核酸扩增及产物分析检测的操作程序；试剂的质检操作程序；实验室消耗品购买、验收和贮存程序；实验室废弃物的处理程序；实验室的清洁程序；室内质量控制程序；抱怨处理程序。第52页，共69页，2023年，2月20日，星期三申请表的附录5“需准备的标准操作程序（最低要求）”对实验室的质量手册和程序文件没作要求对必须具备的SOP文件的编撰格式没作具体要求第53页，共69页，2023年，2月20日，星期三SOP：实验室最具个性的文件不够严谨准确不够连贯不够严密第54页，共69页，2023年，2月20日，星期三例：用加样枪取100μl样品加入提取液用加样器（移液器）以前进式移液法吸取100μl样品加入提取液第55页，共69页，2023年，2月20日，星期三例：

向一新的经高压灭菌处理过的0.5ml离心管中加入10μl充分混匀的RNA提取液A（RNA提取液A易沉淀，取样前需用移液器反复吸打混匀后吸取）。加人50μl血清标本或阴阳性标准品，再加人200μl的RNA提取液B充分混匀。室温放置5分钟。6000rpm离心1分钟，小心吸去上清，用75％的预冷乙醇（DEPC水配制）洗沉淀两次。（取75％乙醇450μl洗沉淀，充分震荡混匀，6000rpm，离心1分钟，然后去上清，再用75％的乙醇450μl洗一次），65℃干燥沉淀10分钟。（注：75%乙醇配制时须用试剂盒中提供的DEPCH2O）。第56页，共69页，2023年，2月20日，星期三

机械地抄书、说明书、其它实验室的文件。第57页，共69页，2023年，2月20日，星期三撰写SOP文件要做到：具有专业知识的人，按文件就能顺利完成实验忠实而且连贯地反映实验过程对文件表述的理解无歧义严谨、严密准确和简练第58页，共69页，2023年，2月20日，星期三文件的文字组织：简练明确向一新的经高压灭菌处理过的0.5ml离心管中加入10μl充分混匀的RNA提取液A（RNA提取液A易沉淀，取样前需用移液器反复吸打混匀后吸取）。加人50μl血清标本或阴阳性标准品，再加人200μl的RNA提取液B充分混匀。室温放置5分钟。6000rpm离心1分钟，小心吸去上清，用75％的预冷乙醇（DEPC水配制）洗沉淀两次。（取75％乙醇450μl洗沉淀，充分震荡混匀，6000rpm，离心1分钟，然后去上清，再用75％的乙醇450μl洗一次），65℃干燥沉淀10分钟。（注：75%乙醇配制时须用试剂盒中提供的DEPCH2O）。第59页，共69页，2023年，2月20日，星期三质量体系文件的构成：

质量手册程序性文件质量文件

质量文件（作业指导书、表格、报告等）第60页，共69页，2023年，2月20日，星期三程序文件和SOP的关系对通用于整个实验室的某些方面工作的文件化描述具体操作的标准化文件程序文件等同于以往的管理制度SOP等同于以往的操作卡或操作说明书第61页，共69页，2023年，2月20日，星期三WhatWhoWhereWhenWhyHow写合乎管理要求的，写你做得到的第62页，共69页，2023年，2月20日，星期三难点：写你所做的做你所写的记录你所做的关键：SOP和记录的必要性和重要性第63页，共69页，2023年，2月20日，星期三仪器设备的校准程序目的：保证检验的有效性，准确性。范围：本程序适用于满足PCR实验室检测需要并可能对检验结果造成误差的仪器设备。主要有：……职责：校准由PCR实验室主任负责组织执行。工作流程：4.1校准方法：……Finpipette可调式移液器校准采用厂家推荐方法。校准主要使用设备为BS110S电子天平（Max110g,d=0.1mg）。……4.2校准计划：4.2.1启用校准：设备在投入使用时实施启用校准。4.2.2周期校准：设备在投入使用后，每半年实施一次校准。4.2.3维修后校准：设备在维修后须经校准方可重新投入使用。4.2.4校准计划外的校准：如在检测及EQA，IQC活动中发现存在结果漂移或偏差及其它可疑情况时，通过分析对可疑设备实施校准。4.2.5Finpipette可调式移液器的校准顺序：按照单一流向规定，对Finpipette可调式移液器的校准首先校准试剂准备区，然后依次为样本处理区和PCR扩增区。每校准完一个区的移液器，将其放回原处后，再取下一个区的移液器进行校准。4.2.6校准安排在不进行样本检测的日期完成。4.3校准的有效标识：经校准的设备加贴绿色标签，标签上应标明本次校准的日期和结果及下次校准的计划预定日期。4.4校准结果的审批及记录保存：每次校准的结果须及时送交科质量负责人审阅签字予以核准。校准记录须妥善保存直至设备报废。校准涉及的文件：5.1校准方法文件：Cal-SOP-1Cal-SOP