动感七方块模板

动感七方块模板第1页，共31页，2023年，2月20日，星期三13实验结果45项目成果经费使用目录研究对象6收获体会7后期打算2研究方案第2页，共31页，2023年，2月20日，星期三第3页，共31页，2023年，2月20日，星期三

EMA研究方案实验结果项目成果经费使用收获体会后期打算研究对象

腺病毒第4页，共31页，2023年，2月20日，星期三单击添加大标题Yourtext第5页，共31页，2023年，2月20日，星期三研究方案实验结果项目成果经费使用收获体会后期打算研究对象细胞的选择和培养腺病毒培养及其滴度的测定EMA-RealTimePCR检测死活腺病毒预试EMA-PCR检测死活腺病毒方法建立第6页，共31页，2023年，2月20日，星期三1、细胞选择和培养Hela细胞使用广泛易于培养对腺病毒敏感培养方法：传代细胞培养法研究方案第7页，共31页，2023年，2月20日，星期三研究方案2、腺病毒培养和滴度测定制备密度为80%单层细胞接种腺病毒标准株（购自ViraQuestinc）结果观察细胞病变效应（CPE）收获病毒，于-80℃冻存50%终点法测定滴度第8页，共31页，2023年，2月20日，星期三研究方案3、EMA-RealTimePCR检测死活腺病毒预试初步证明EMA能够有效抑制死病毒的扩增。在预试结果良好的情况下，对EMA浓度进行了优化。问题：RealTimePCR影响因素较多优化相关条件，影响实验进度RealTimePCR实验耗材较贵，研究经费受限实际检测中，对病毒定量的意义第9页，共31页，2023年，2月20日，星期三研究方案4、EMA-PCR检测死活腺病毒方法建立病毒灭活条件EMA浓度选择：抑制死病毒DNA扩增的最低浓度

最低EMA浓度对活病毒PCR扩增的影响PCR方法评价第10页，共31页，2023年，2月20日，星期三研究方案病毒灭活条件

取200μL滴度已知的病毒，于65℃水浴30min后，接种生长良好的Hela细胞，观察灭活后的病毒能否感染Hela细胞从而出现葡萄串状的CPE。第11页，共31页，2023年，2月20日，星期三研究方案PCR方法评价DNA模板制备引物及PCR扩增程序PCR扩增产物检测分析方法灵敏度测定方法特异性检测PCR方法第12页，共31页，2023年，2月20日，星期三单击添加大标题Yourtext第13页，共31页，2023年，2月20日，星期三研究方案实验结果项目成果经费使用收获体会后期打算研究对象第14页，共31页，2023年，2月20日，星期三实验结果表1细胞致病变效应百分率计算法稀释度细胞培养病变孔数/接种孔数累计数（孔）累计病变细胞孔有病变无病变比例%10-44/4909/910010-53/4515/68310-62/4232/54010-70/4070/701、收获106CFU/mL腺病毒第15页，共31页，2023年，2月20日，星期三实验结果依据Reed-Muench公式：根据Poisson分布的公式P(0)=e(-m)，因为任何CCID50的P(0)=0.5，因此e(-m)=0.5，m=-㏑0.5≈0.7。所以0.7乘以CCID50的滴度即为预计的PFUs。该病毒预计的PFUs为1.1×106PFU/mL第16页，共31页，2023年，2月20日，星期三实验结果低倍镜2、病毒灭活条件：65℃，30min。第17页，共31页，2023年，2月20日，星期三实验结果低倍镜第18页，共31页，2023年，2月20日，星期三实验结果图1抑制死细胞DNA扩增的EMA浓度选择结果注：孔1～7分别是：阳性对照、阴性对照、MarkerⅠ、EMA浓度为0、70、120、150μg/mL。3、EMA浓度选择120μg/mL第19页，共31页，2023年，2月20日，星期三实验结果图2120μg/mLEMA对活菌扩增的影响结果

注：孔1～8分别是：阳性对照、阴性对照、MarkerⅠ、活病毒数106、105、104、103、102。120μg/mLEMA对活菌扩增无影响第20页，共31页，2023年，2月20日，星期三实验结果图3PCR检测腺病毒的灵敏度

注：孔1-9分别是：阴性对照、阳性对照，稀释度10-1～10-4，MarkerⅠ,稀释度10-4、10-5.4、方法灵敏度103PFU/mL第21页，共31页，2023年，2月20日，星期三实验结果图4PCR检测腺病毒特异性结果1

注：孔1～8分别是：阳性对照、阴性对照、MarkerⅠ、3型腺病毒3株、4型腺病毒2株.5、方法特异性第22页，共31页，2023年，2月20日，星期三实验结果图5PCR检测腺病毒特异性结果2

注：孔1～7分别是：阳性对照、阴性对照、MarkerⅠ、7型腺病毒3株、新城疫鸡瘟病毒1株.第23页，共31页，2023年，2月20日，星期三第24页，共31页，2023年，2月20日，星期三研究方案实验结果项目成果经费使用收获体会后期打算研究对象论文《EMA-PCR技术用于快速鉴别死活腺病毒的初探研究证实EMA-PCR方法可快速鉴别死活腺病毒，能有效避免单纯PCR检测腺病毒产生的假阳性结果。第25页，共31页，2023年，2月20日，星期三单击添加大标题Yourtext第26页，共31页，2023年，2月20日，星期三研究方案实验结果项目成果经费使用收获体会后期打算研究对象项目支出金额（元）结余金额（元）腺病毒标准株350012500病毒DNA提取试剂盒2872.49627.6细胞培养6759.42868.2RTQ-PCR/PCR1430.31437.9其余实验室耗材876.7561.2合计15438.8561.2注：项目经费中有20%为教师指导经费，以上经费计算中均已扣除。

第27页，共31页，2023年，2月20日，星期三单击添加大标题Yourtext第28页，共31页，2023年，2月20日，星期三研究方案实验结果项目成果经费使用收获体会后期打算研究对象项目的认识加深自身能力的提高思考和学习的重要性意识到自己存在的问题第29页，共31页，2023年，2月20日，星期三单击添加大标题Yourtext第30页，共31页，2023年，2月20日，星期三研究方案实验结果项目