动物细胞融合和单克隆抗体的制备

动物细胞融合和单克隆抗体的制备第1页，共43页，2023年，2月20日，星期四

2002年12月30日，

两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”—黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在“产房”—电融合仪内孕育新生命。“太空婚礼”这两场“太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技术？植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术第2页，共43页，2023年，2月20日，星期四(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图第3页，共43页，2023年，2月20日，星期四材料1:1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？人-鼠(想像图)第4页，共43页，2023年，2月20日，星期四A细胞B细胞人工诱导1.1动物细胞融合的概念杂交细胞动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。一、动物细胞融合第5页，共43页，2023年，2月20日，星期四阅读课本P52及识图2-23，并完成学案第1页【学习过程】第6页，共43页，2023年，2月20日，星期四细胞膜的流动性灭活病毒、PEG、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞诱导的手段？融合后细胞的类型？AB杂种细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB（A、B）含两种生物的遗传物质1.2动物细胞融合过程原理？第7页，共43页，2023年，2月20日，星期四1.2动物细胞融合过程为什么灭活的病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性保留融合活性第8页，共43页，2023年，2月20日，星期四1.3动物细胞融合技术的意义和应用第9页，共43页，2023年，2月20日，星期四比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用途植物体细胞杂交细胞膜的流动性纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动、聚乙二醇克服远源杂交不亲和，获得杂种植株动物细胞融合细胞膜的流动性用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外，还有灭活病毒获得杂种细胞、制备单克隆抗体1.4比较动、植物细胞杂交技术第10页，共43页，2023年，2月20日，星期四学习·探究区本课时栏目开关知识·储备区学习·探究区自我·检测区第11页，共43页，2023年，2月20日，星期四学习·探究区本课时栏目开关知识·储备区学习·探究区自我·检测区第12页，共43页，2023年，2月20日，星期四学习·探究区本课时栏目开关知识·储备区学习·探究区自我·检测区第13页，共43页，2023年，2月20日，星期四学习·探究区本课时栏目开关知识·储备区学习·探究区自我·检测区第14页，共43页，2023年，2月20日，星期四强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。温故知新二、单克隆抗体B淋巴细胞效应B淋巴细胞记忆B淋巴细胞分化第15页，共43页，2023年，2月20日，星期四抗体的传统生产方法抗原反复注射动物从动物的血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。如何解决这个问题呢？单克隆抗体！第16页，共43页，2023年，2月20日，星期四读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念

人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。2.1单克隆抗体的概念单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体第17页，共43页，2023年，2月20日，星期四提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。2.2单克隆抗体的制备

第18页，共43页，2023年，2月20日，星期四一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验第19页，共43页，2023年，2月20日，星期四①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？②会有几种融合方式？③杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？④是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？⑤如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？第20页，共43页，2023年，2月20日，星期四BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体的B细胞（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞√体外培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。第21页，共43页，2023年，2月20日，星期四第22页，共43页，2023年，2月20日，星期四①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。

③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是能不断分裂增殖。你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？小资料：第23页，共43页，2023年，2月20日，星期四在培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞！

加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞因为可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。第24页，共43页，2023年，2月20日，星期四

通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养②再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞答案2．用流程图形式写出单克隆抗体的制备过程第25页，共43页，2023年，2月20日，星期四单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？

你学会了吗？第26页，共43页，2023年，2月20日，星期四学习·探究区本课时栏目开关知识·储备区学习·探究区自我·检测区第27页，共43页，2023年，2月20日，星期四学习·探究区本课时栏目开关知识·储备区学习·探究区自我·检测区第28页，共43页，2023年，2月20日，星期四学习·探究区本课时栏目开关知识·储备区学习·探究区自我·检测区第29页，共43页，2023年，2月20日，星期四2.3单克隆抗体的应用诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。第30页，共43页，2023年，2月20日，星期四“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物单抗导向，药物为弹头治疗疾病和运载药物主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。第31页，共43页，2023年，2月20日，星期四两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法－－灭活病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势本节小结重点第32页，共43页，2023年，2月20日，星期四学习·探究区两个或多

一生物膜的流动性聚乙二醇诱导、灭活的病毒诱导、电刺激有性杂交单克隆抗体B淋巴细胞杂交瘤细胞单克隆抗体理化性质单一，特异性强、灵敏度高，并能大量制备本课时栏目开关知识·储备区学习·探究区自我·检测区第33页，共43页，2023年，2月20日，星期四自我·检测区本课时栏目开关知识·储备区学习·探究区自我·检测区第34页，共43页，2023年，2月20日，星期四自我·检测区本课时栏目开关知识·储备区学习·探究区自我·检测区第35页，共43页，2023年，2月20日，星期四自我·检测区D

本课时栏目开关知识·储备区学习·探究区自我·检测区第36页，共43页，2023年，2月20日，星期四自我·检测区B

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细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。（2）d过程是一个_____________过程，该过程的进行常用_____________或_____________的诱导。(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成

种类型的C细胞，因此需用__________培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是

，其特点是_________________________________________。效应B

抗原

细胞融合

聚乙二醇灭活的病毒

选择性3既能无限增殖又能产生特异性抗体

杂交瘤细胞第42页