植物生理学实验教案

植物生理学实教案实验指导书：候书林主编.植物生理学实验指导.科学出版社，2004实验一、植物组织渗透势测定-质壁分离法实验二、植物组织水势测定-小液流法实验三、叶绿体色素的提取与分离及理化性质鉴定实验四、叶绿素a,b含量测定实验五、植物体内几种呼吸酶的测定实验六、植物叶面积测定实验七、植物根系对离子的选择性吸收实验八、叶片光合速率的测定及光合仪的使用实验九、种子活力的快速测定实验十、植物组织可溶性糖含量的测定实验十一、低温对植物的伤害实验十二、丙二醛含量的测定实验一、植物组织渗透势测定-壁分离法原理]将植物组织置于对其无毒害的一系列不同浓度的溶液里处理一定时间后镜检发生质壁分离的细胞数，通常视野中有％的细胞发生质壁分离时定为初始质壁分离，细胞初始质壁分离时压力势为零因可把引细胞初始质壁分离的外界溶液称之为等渗溶液溶具有的渗透势即为细胞的渗透势。由于很难正好找到引起50％胞发生质壁分离的浓度。因此通常用插值法求得等渗溶液浓度，代入公式即可计算渗透势。器材试]器材：显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，刀片，培养(或具塞试)，记号笔，滴管。试剂：蔗糖。方法步]配制0.20.30.40.50.60.7mol蔗/L水质量摩尔浓度，贮6个试剂瓶中，必要时配制溶液浓度的相差可≤蔗糖L水取6套干净清洁的小培养皿，用号笔编号，将配制好的不同浓度的蔗糖溶液按顺序倒入各个培养皿中使成一薄层，盖好皿盖。将带有色素的植物组织或叶(可用有色素的洋葱鳞片的外表皮，紫鸭跖草，蚕豆，小麦，玉米等叶的表皮撕取表迅速分别投入各种浓度的蔗糖溶液中，每个培养皿中放材料3个右，使其完全浸没，浸泡20-40钟。到时后，取出表皮，放在载玻片上，滴一滴相同浓度的蔗糖，盖上盖玻片，在显微镜下观察质壁分离的细胞数和细胞总数，直接或间接(插法地找出引起50％细胞发生质壁分离的外界溶液浓度，即为细胞渗透浓度值。插值法求细胞渗透浓度的公式为：式中O为胞的渗透浓度，mg为起p质壁分离的浓度m为引起P质壁分离的浓度，P为由m溶液起质壁分离百分数p为由m溶液引起质壁分离的百分数。求得按下计算渗透势

=-iRTO为细胞渗透势(；为体数(0.083barT为绝对温度(℃；等渗系数，蔗糖为1。【思考题】1．配制蔗糖溶液时为何用质量尔浓度mol/kgH2O而不用容积摩尔浓度mol/L？2．植物叶片吸水饱和时的渗势经测定为-0.8MPa，用质壁分离法测出其渗透势为-0.9MPa，计算质壁分离状态的细胞液体积相当于饱和时的百分数。实验二植物织水势的测定（液流法）一、原理将植物组织分别放在一系列浓度递增的溶液中，当找到某一浓度的溶液与植物组织之间水分保持动态平衡时，则可认为此植物组织的水势等于该溶液的水势。因溶液的浓度是已知的根公式算出其渗透压负值液渗透π即代表植物的水势（ψw）waterpotential）。ψwψπ＝－＝－CRT（大气压）二、材料、仪器设备及试剂材料：小白菜、菠菜、油菜或其它作物叶片仪器设备：1.带塞青霉素小瓶12个2.带有橡皮管的注射针头3.镊子；打器5.培养皿。试剂：1.0.05、、0.15、0.200.250.30mol/L蔗糖溶液；甲烯蓝粉末。三、实验步骤（一取燥洁净的青霉素瓶6个甲组各瓶中分别加入0.05～0.30mol/L蔗糖溶液约4ml（约为青霉素瓶／3处），另取6个干洁净的青霉素瓶为乙组，各瓶中分别加入0.05～0.30mol/L蔗糖液和微量甲烯蓝粉末着色，上述各瓶加标签注明浓度（）取待测样的功能叶数片，用打孔器打取小圆片约50片，放至培养皿中混合均匀用子分别夹入5～小圆片到盛有不同浓度的甲烯蓝蔗糖溶液的青霉素瓶乙组塞叶圆片全部浸没于溶液中约30～60min，为加速水分平衡，应经常摇动小瓶。（三）经一定时间后，用注射针头吸取乙组各瓶蓝色糖液少许，将针头插入对应浓度甲组青霉素瓶溶液中部，小心地放出少量液流，观察蓝色液流的升降动向。（每次测定均要用待测浓度的甲烯蓝蔗糖溶液清洗几次注射针头）。如此方法检查各瓶中液流的升降动向。若液流上升，说明浸过小圆片的蔗糖溶液浓度变小（即植物组织失水）；表明叶片组织的水势高于该浓度糖溶液的渗透势；如果蓝色液流下降则说明叶片组织的水势低于该糖溶液的渗透势，若蓝色液流静止不动，则说明叶片组织的水势等于该糖溶液的渗透势，此糖溶液的浓度即为叶片组织的等渗浓度四、结果计算将求得的等渗浓度值代入如下公式：ψw＝π＝中ψw＝物组织的水单位Mpa）ψπ＝液的渗透势C＝等浓度（mol/L＝气体常数0.008314MPa/L/mol/K）T＝绝对温度i＝解离系数（蔗糖，CaCl＝2.60）大气压1.013＝0.1MPa。【意事】1所取料在植株上的部位要致，打取叶圆片要避开主脉和伤口。2取材及打取叶圆片的过程作要迅速，以免失水。3带有晶水的甲烯蓝不易溶CaCl液，可在100下烘干成无水甲烯蓝粉末使用。实验三叶体色素的提取分离和理化性质一、叶绿体色素的提取与分离【原理】叶绿体中含有绿色（括叶绿和叶素和黄色（括胡萝卜素和叶黄素两大类。它们与类囊体膜上的蛋白质相结合，而成为色素蛋白复合体，这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。提取液可用色层分析的原理加以分离。因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相（流动相和固定相）间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，便将混合色素分离。【仪器与用具】研钵2套；漏斗；100ml三瓶玻璃棒；剪刀；滴管；培养皿（直径11cm维或平底短玻管（也可用塑料药瓶盖代替勺；圆形滤纸（直径11cm纸（5cm×1.5cm【试剂】95%乙醇；石英砂；碳酸钙粉；推动剂：按石油醚︰丙酮︰苯10︰︰）例配制（体积比【方法】1．叶绿体色素的提取取菠菜或其他植物新鲜叶片4～5片（左右净擦干，去掉中脉剪碎，放入研钵中。研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉2～3ml95%乙磨至糊状再10～15ml95%乙醇，提取3～，清液过于三角瓶中，残渣用10ml95%乙冲洗，一同过滤于三角瓶中。如无新鲜叶片，也可用事先制好的叶干粉提取。取新鲜叶片（以菠菜叶最好用105℃杀青，再在80℃烘干，研成粉末，密闭贮存。用时称叶粉1g放入小烧杯中，加95%乙20～30ml浸，并随时搅动。待乙呈深绿色时，滤出浸提液备用。（）取一研钵，放入剪碎的新鲜叶片，放入少量石英砂（不加碳酸钙粉磨先加2ml蒸馏水，研至糊状，再加蒸馏水30ml，搅均，不过滤。2．叶绿体色素的分离取圆形定性滤纸一张（直径11cm其中心戳一圆形小孔（直径约3mm取张滤纸条（5cm×1.5cm滴管吸乙醇叶绿体色素提取液沿纸条的长度方向涂在纸条的一边，使色素扩散的宽度限制在0.5cm以，风干后，再重复操作数次，然后沿长度方向卷成纸捻，使浸过叶绿体色素溶液的一侧恰在纸捻的一端。将纸捻带有色素的一端插入圆形滤纸的小孔中，使与滤纸刚刚平齐（勿凸出在培养皿内放一康维皿，在康维皿中央小室中加入适量的推动剂，把带有纸捻的圆形滤纸平放在康维皿上，使纸捻下端浸入推动剂中。迅速盖好培养皿。此时，推动剂借毛细管引力顺纸捻扩散至圆形滤纸上，并把叶绿体色素向四周推动，不久即可看到各种色素的同心圆环。如无康维皿，也可在培养皿中放入一平底短玻管或塑料药瓶盖，以盛装推动剂。但所用培养皿底、盖直径应相同，且略小于滤纸直径，以便将滤纸架在培养皿边缘上。当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，即可看到分离的各种色素：叶绿素为蓝绿色，叶绿素b为绿色，黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。用铅笔标出各种色素的位置和名称二、叶绿体色素的理化性质【原理】叶绿素是一种二羧酸—叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇叶酸的盐生盐能溶于水中用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开；叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性表现出一定的吸收光谱可用分光镜检查或用分光光度计精确测定；叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。叶绿素中的镁可以被H+所取代而成褐色的去镁叶绿素后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。【仪器与用具】20ml刻度管10ml小管；试管架；分光镜；石棉网；药匙；烧杯100ml精；玻棒；铁三角架；刻度吸量管2ml、各；火柴。【试剂】95%乙醇；苯；醋酸铜粉末5%稀盐酸；醋酸-醋酸铜溶液：6g醋酮溶于100ml50%的酸中，再加蒸馏水4倍稀而成；KOH-甲醇溶液20gKOH溶100ml甲中，过滤后盛于塞有橡皮塞的试剂瓶中。【方法】用本实验第一项中提取的叶绿体色素乙醇溶液和水研磨匀浆，进行以下实验。1．光对叶绿素的破坏作用取4支试管，其中两支各加入5ml用研磨的叶片匀浆，另外两支各加入2.5ml叶绿体色素乙醇提取液，并用95%乙醇稀释1倍。取支有叶绿素乙醇提取液的试管和1支装水研磨叶片均浆的试管放在直射光下，另外两支放到暗处，40min后比观察颜色有何变化，解释其原因。荧现象的观察取1支20ml刻度试管加入浓的叶绿体色素乙醇提取液在射光下观察溶液的透射光与反射光颜色有何不同？解释原因。．皂化作用（绿色素与黄色素的分离）在做过荧光现象观察的叶绿体色素乙醇提取液试管中加入1.5ml20%KOH-甲溶液，充分摇匀。片刻后，加入5ml苯摇匀，再沿试管壁慢慢加入～1.5ml蒸馏水，轻轻混匀（勿激烈摇荡试管架上静置分层。溶液不分层，则用滴管吸取蒸馏水，沿管壁滴加，边滴加边摇动，直到溶液开始分层时，静置。可以看到溶液逐渐分为两层，下层是稀的乙醇溶液，其中溶有皂化的叶绿素a和b（以及量的叶黄素层是苯溶液，其中溶有黄色的胡萝卜素和叶黄素。4．吸收光谱的观察

将上述已分层的试管溶液，用分光镜观察两类色素的吸收光谱，首先让下层绿色素部分对准进光孔，看光谱有何变化；然后再将上层黄色素溶液对准进光孔，看光谱又有何变化。把观察的结果用简单的图表示出来。5．和Cu++对叶绿素分子中Mg++取代作用方法一：取两支试管，第一支试管加叶绿体色素提取液2ml作为对照。第二支试管中加叶绿体色素提取液5ml，再加入5%HCl滴，摇匀，观察溶液颜色变化。当溶液变褐后，再加入少量醋酸铜粉末，微微加热，观察记载溶液颜色变化情况，并与对照试管相比较。解释其颜色变化原因。方法二：另取醋酸－醋酸铜溶液20ml，烧杯盛之。取新鲜植物叶片两片，放入烧杯中，用酒精灯慢慢加热，随时观察并记录叶片颜色的变化，直至颜色不再变化为止。解释原因。【注意事项】．在低温下发生皂化反应的叶绿体色素溶液，易乳化而出现白絮状物，溶液浑浊，且不分层。可激烈摇匀，放在～℃的水浴中加热，溶液很快分层，絮状物消失，溶液变得清澈透明。．分离色素用的圆形滤纸，在中心打的小圆孔，周围必须整齐，否则分离的色素不是一个同心圆。【思考题】．用不含水的有机溶剂如无水乙醇、无水丙酮等提取植物材料特别是干材料的叶绿体色素往往效果不佳，原因何在？．研磨提取叶绿素时加入CaCO3什么作用？．从叶绿素a、叶绿素、萝素和叶黄素的吸收光谱讨论其生理意义。实验四叶绿含的测定一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收用光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与中溶质浓度C和液厚度L成比，即＝αCL式中α比常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm，α为物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得溶液中有数种吸光物质则混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和就吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、和胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，根据叶绿素ab及胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素ab时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。二、材料、仪器设备及试剂材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。仪器设备1.分光度计电子载天（感量0.01g3.研4.棕色容量瓶；小漏；定量滤纸7.吸水8.擦境9.滴管试剂：％醇（或80％丙酮；石英砂；碳酸钙粉。三、实验步骤1.取新植物叶片（或其它绿组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。2.称剪碎的鲜样品，共份，别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95％乙醇，研均浆，再加乙醇，继续研磨至组织变白。静置3～5min。3.取纸1张置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。4.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至25ml匀把叶体色素提取液倒入光径的比色杯内95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm下定吸光度。四、实验结果计算：将测定得到的吸光值代入下面的式子Ca=13.95A－6.88A；Cb=24.96A－7.32A。此即可得到叶绿素a和绿素b的浓度（、：mg/L）二者之和为总叶绿素的浓度。最后根据下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量：叶绿素的含量（mg/g）=[叶绿的浓度×提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重（或干重）。实验五、植物体内可溶性蛋白质含量的测定考马斯亮蓝法植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，测其含量是了解植物体总代谢的一个要指标。在研究每一种酶的作用时，常以比活（酶活力单位／mg蛋白）表示酶活力大小及酶制剂纯度。因此，测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。常用测定方法Lowry和考马斯亮蓝G-250染结合法。本实验将分别介绍这两种方法。【原理】考马斯亮蓝测蛋白质含量属于染料结合法的种亮蓝在离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在，后者在。在一定蛋白质浓度范围内（0～100μ白质－色素结合物在波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。故可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结在左右的时间内达平衡，完成反应十分迅速其合物在室温下内保持稳定该应常灵敏可微克级蛋白质含量所以是一种比较好的蛋白质定量法。【仪器与用具】分光光度计10ml量1支研体10ml容瓶1；1ml刻吸管3支10ml塞刻度试管支【试剂】牛血清白蛋白配成1000g/ml和μg/ml考马斯亮蓝：取100mg考斯亮蓝G-250溶50ml90%乙醇中，加入85%）磷酸100ml，最后用蒸馏水定容至。溶液在常温下可放置一个月；90%醇）酸（85%【方法】标曲线的绘制（10100μg/ml标曲的制作取6支管按表数据配制0～100μg/ml血白蛋白液各。准确吸取所配各管溶液0.1ml，别放入10ml具试管中，加入5ml考马斯亮蓝试剂，盖塞，反转混合数次，放置后在下比色，绘制标准曲线。表配制0～μg/ml血清白蛋白液管

号

12345

6100μg/ml牛血清蛋白量ml)

0.61.0蒸馏水量(ml)蛋白质含量(mg)

1.00

0.8

0.6

0.4

0.2

0（20μ标曲线的制作另支管按表据配制～1000g/ml牛血清白蛋白溶液各1ml。与步骤（）操作相同，绘出0～1000μ的准曲线。表配制～1000μg/ml清蛋白血液管

号

7

8

9

10

11

121000g/ml血清白蛋白（ml蒸馏水量(ml)蛋白质含量(mg)

01.00

0.20.80.2

0.40.60.4

0.60.40.6

0.80.20.8

1.001.0样品提取液中蛋白质浓度的测定吸取样品提取液（样品提取见各酶活测定入具塞刻度试管（两个重复管入考斯亮蓝G-250试剂，充分混合，放置min后下比色，记录吸光度值，通过标准曲线查得蛋白质含量。结果计算

V样品蛋白质含量重=

式中－查标准曲线所得每管蛋白质含量V提取液总体积a测定所取提取液体积W取量实验六、植物叶面积测定[实验原理植物的生长与叶面积密切相关，一方面叶面积的大小影响了植物的光合物质积累，另一方面掌的生长又通过叶面积的变化得到体现，因此测定植物的叶面积对于植物的生长生理、光合生理逆境生理具有重要的意义。可以用叶面积仪直接测定，没有条件的试验室也可以通过测量、称重的方法测得。[材料与用品]校园里各种植物叶片直尺、剪刀、复印纸、电子天平等[方法与步骤]从叶片基部用剪刀小心剪取10片片。用直尺量取每一片叶的最长处为叶长、最宽处为叶宽，记录下来。将叶片固定在复印纸上，用铅笔沿叶缘将叶片形状描下来，用剪刀剪下来。将剪下的纸叶子在电子天平上称重，记录。称出一张复印纸的质量，测量出长和宽，计算出纸的面积，然后换算出每克重量所对应的纸面积。将剪下来的纸叶子的质量换算成面积，是为每片叶的面积。用每片叶的面积除以其长度与宽度的乘积，可以得到一个小于的数，该系数与叶片的形状有关，称为形状系数或校正因子，计算10叶子的形状系数，算出其平均值。在以后的测量中以用直尺测量该种物叶片的长和宽者乘积乘以形状系数为面积。测定形状不规则叶片的叶面积可按照上述12，，，，6步操作。[结果与分析]测量出叶片的长和宽，计算出叶面积和形状系数。[思考题本实验需注意哪些方面，你可以用其他方法测出叶面积吗？测量并计算出一些常见植物叶片的形状系数。实验七、植物根系对离子的选择性吸收植物的根对矿质元素具有选择吸收的特性至对同一盐类的阴离子和阳离子也不同的比例吸收。所以盐类可分为生理酸性盐（根对阳离子吸收多理性盐（对阴离子吸收多生理中性盐（阴阳离子等比例地吸收根系对离子吸收有选择性，使得培养液的成份会逐渐改变。因此，在水培崐或无土栽培植物时，要经常更换与补充培养液，本实验为验证根对离子吸收有选择性而设计的。原理]植物对组成同一盐类的阴离子和阳离子的吸收量不同时会改变溶液的ｐＨ值通过酸度计测定放根系前后溶液的Ｈ值变化就能判别根系是否对离子吸收具有选择性。器材试]器材：计（精密pH试筒，广口瓶试剂：0.01mg/ml(NH)SO，0.01mg/ml，0.01mg/mlNHNO。方法步]1.材料准备：预先在自来水中培好具有相当大根系的洋葱鳞茎，或其他植物的根系。2.测定实验开始时溶液的原初pH值：取四个200ml广口瓶，分别放上0.01mg/ml。取四株根系发育良好小似的洋或其他植物材料的根系别放在四个广口瓶的溶液中～2分后出分别测定瓶中pH值为实验开始的原初pH值后把根系放回广口瓶中。3.测定植株吸收离子的终态pH值在室温下放置小左右（放置时间视根的大小，吸收能力和溶液温度而定出株，测定溶液的pH值实验结果按下表24-1记，加以分析。表1植从盐溶液中吸收的离子和pH值化为了避免根系的分泌作用影响实验结,用蒸馏水作对照。实验八植物片光合速率的测及光合仪的使用光合速率测定是植物生理学的基本研究方法之一，在作物丰产生理、作物生态、新品种选育、及光合作用基本理论研究方面都有着广泛的用途。根据光合作用的总反应式C0O→(CHO)OHO光合强度原则上可以用任何一反应物消耗速度或生成物的产生速度来表示。由于植物体内水分量很高而且植物随时都在不断吸水和失水参与的生化反应又特多体内水分含量经常变，所以实际上不能用水的含量变化来测定光合速率。在科学实验中可用以下方法方式来测定和表光合速率(表9—，中最常用的法有：改良半叶法，红外线CO-2分法，和氧电极法。红线C0分析C2[原理植物叶片的光合呼吸)速率可以单位叶面积位时间里同(释)的量来表示。C0浓度以通过红外线C0气分析仪迅速测量把植物叶片放入叶室在开启气路中测定照光或光条下叶室进出口之的浓度，就可以计算光合(呼吸)速率。[器材与试剂]器材红外气体分析仪测定(呼)速率装(图9-1)剪刀橡泥叶面积仪，光量子(或照度计。试剂：无水[方法与步骤]1.按图9-1装连接各部件根“红外线气体分析使用说明书”进行仪器调整定灵敏度。图9-1用外线气体分析仪测定物叶片光呼吸速率的装(开启式气略)2.开启无油气泵，向空气贮气袋打入空气。待红外线气体分析仪预机数小时后，开启小气泵，向红外线气体分析仪通气，测定空气中CO-2浓度并把记录笔移动到满量程的3/4处。3.把待测叶片20cm左(过大过宽的叶片可剪二边，保留中放入叶室，用橡皮泥封口。调节气体流(1-2升小时cm的改变量，即测定呼吸速率。

叶面积，定叶片在暗中因呼吸释放对气路C0浓4.开启光源，用光量子(或照计测定叶室处光强。移动幻灯机与叶室间距离，或通过调节光源电压可调节实验所需要的光强。连续记录叶室出口处C0浓度的变化，直至记录线走直。图9-2开式气路测定(呼)速率记录图5.再次测定空气基线。记录图如图-2所示，通过半导体点温计读取叶图9-2开启式气路测定光合(呼吸速率记录图室温度。测定放入叶室面积。按表-3要记录测定数据，并计算光合速率与呼吸速率。A=F(Ce-Co)/SF：流速ml/S)Ce：叶室入口处C0浓(μmol/ml)；Co叶室出口处C0浓(μmol/ml)A：表观光合(呼吸速率(μmol·m·S)如果C0浓用ppm(l/L)表，光合速率单位采用mgC0·dm·h，则光合强度计算公式：A=(Ce-Co)F·K/SA：表观光合(呼吸速(C0·dm·h)Ce：叶室进口处C0浓(ppm)Co：叶室出口处C0浓(ppm)F：气体流量(S：叶面积dm)K：CO-2转系(密mg/μl)J80K=44×273/22400×(273)为室温度℃)(Ce-Co)为因叶片光(呼吸)所成的CO-2浓度差，Ce-Co=△L×S△L：记录纸上空气基线到测量的距(cm)S：敏(ppm/cm)d那么计算光合(呼吸速率的计算式为J80A=△L·S·F·K/S实验九种子力的快速测-染染色法一、原理有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内，胚部不染色。而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收能力，染料可自由进入细胞内使胚部染色。所以可根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命力。二、材料、仪器设备及试剂材料：水稻、玉米、大豆、棉花、小麦及一些树木种子。设备：1.小烧杯；刀片；镊子试剂：％～0.2％靛红溶液％红墨水（酸性大红G）。三、实验步骤将种子用温水（约30℃）浸泡2～6h使种子充分吸胀。随机取种子100粒，水稻种子要壳，豆类种子要去皮，然后沿种胚中央准确切开，取其一半备用。将准备好的种子浸于红墨水溶液中，于恒温箱30～35℃）中保温30min。染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。倒出红墨水溶液，再用清水将种子冲洗～次观察种胚被染色的情况，凡种胚不着色或着色浅的即为具有生命力的种子。种胚与胚乳染色一致的为死种子。实验十植物织中可溶性糖含测定在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH的体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质为物的各种合过程和各种生命活动提供了所需的能量于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。Ⅰ蒽法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下可脱水反生成糠醛或羟甲基糠醛成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中不然因为细胞壁中的纤维素半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差此外同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同糖色最深萄次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm，在此波长下进行比色。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。（二）试剂80％乙。葡萄糖标准溶液（100μg/mL确取100mg分析无水葡糖，溶于蒸馏水并定容至100mL，使用时再稀释10倍（100g/mL3．酮试剂：称取1.0g蒽，溶于80%浓硫（将98%浓硫稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中）1000mL中却室温于具塞棕色瓶内冰箱保存使用～3周。（三）仪器备分光光度计分天平离管离心机恒温水浴试管三角瓶移（5、1、0.5mL刀瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸。三、实验步骤样品中可溶性糖的提取称取剪混匀的新鲜样品0.5g（或样粉末5～100mg入试管中，加入15mL蒸馏，在沸水浴中煮沸20min，取冷却，过滤入mL容瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。标准曲线制作取支大管，从0～分别号，按表24-1加入各试剂。表蒽法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量管号试剂100g/mL葡糖

00

10.2

20.4

30.6

40.8

51.0溶液（mL）蒸馏水（mL）蒽酮试剂（）葡萄糖量（g）

1.05.00

0.85.020

0.65.040

0.45.060

0.25.080

05.0100将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10min取出冷却，在620波长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（μg）为坐标绘制标准曲线。3．品测定取测样品提取1.0mL加酮试剂5mL，同上操作显色测定光密度。重复3次。四、结果计算式中：C—从标准曲线查得萄糖量，μgVT—样品提取液总体积,mL。1—显色时取样品液量，。——样品重（实验十一低对植物的伤害（导仪法）一、原理植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。在正常情况下，细胞膜对物质有选择透性能力。当植物受到逆境影响时，如高温、低温、干旱、盐渍或病原菌侵染后，细胞膜遭破坏，膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，以致植物细胞浸提液的电导率增大。膜透性增大的度与逆境胁迫强度有关，也与植物抗逆性的强弱有关。这样，比较不同作物或同一作物不同品种在同胁迫温度下膜透性的增大程度，即可比较作物间或品种间的抗逆性强弱，因此，电导法目前已成作物抗性栽培、育种上鉴定植物抗逆性强弱的一个方法。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料植物叶片。（二）试剂NaCl溶液（三）仪器设备电导仪，天平，温箱，真空干燥器，抽气机，恒温水浴锅，注射器。三、实验步骤制作标准曲线如需量测定透性变化，可用纯NaCl配成、10、20、40、60、80、100g/mL的标液20～25℃温下用电导仪测定出导率电导率为纵坐标，NaCl量为横坐标做标准曲线。选取小麦或其他植物在一定部位上生长叶龄相似的叶子若干，剪下后，先用纱布拭净，称取两，各重2g。3.一插入小杯中放在40℃温箱内萎蔫0.5～1另一份插入水杯中放在室温下做对照处理后分别用蒸馏水冲洗两次，并用洁净滤纸吸干。然后剪成长约1cm小段放入小烧杯中（大小以能够容纳电极为度），并用玻棒或干净尼龙网压住，在杯中准确加入蒸馏水20mL，浸没叶片。4.放真空干燥器，用抽气机抽气7～min以抽出细胞间隙中的空气。重新缓缓放入空气，水即被压入组织中而使叶下沉。将抽过气的小烧杯取出，放在实验桌上静置20min，后用玻棒轻轻搅动叶片，在20～25℃恒温下，用电导仪测定溶液电导率。测过电导率之后，再放入100℃水浴中15min，杀死植物组织，取出放入自来水冷却10min，20～25℃温下测煮沸电导率。四、结果计算伤害率可以用下列三种形式表示：[注事项]整个过程中，叶片接触的用具必须绝对洁净（全部器皿要洗净），也不要用手直接接触叶片，免污染。各处理和对照的待测液的体积要一样。测定后电极要清洗干净。[思题]植物抗逆性与细胞膜透性有何关系用电导仪法定量测定细胞膜透性变化为什么要用纯NaCl做标准曲线?【附注】DDS-11A型导率仪使用方法．未打开电源开关之前，电表指针应指零；否则，应调整表头螺丝使指针指零。．打开电源开关，指示灯即亮，预热至指针稳定为止。．把开关拨至“校正”挡，调节“调正”旋钮使指针停在最大刻度。当测物的电导率低于300μS/cm时将开关拨向“低周”被测物电导率为～103μS／cm时，将开关拨向“高周”。．将量程开关打到所需范围。若初测不知测量范围大小，应先将量程开关打到最大位置，然后格下降，以防过载，否则指针迅速摆动时易被打弯。．将电极插入电极插口内，旋紧插口上的紧固螺丝，同时把电极常数调节器调节在与之配用的极常数相应的位置上。（测量范围在10～10μS/cm时，使用DJS-I型铂黑电极；当被测物的电导率大于104S／cm时选DJS-10型铂黑电极应调节在与之所配用电极常数1/10的位置上，例如：电极常数为9.8，应调节在0.98位上，但要将测得的读数乘以，即被测液的电导率）。．将电极完全浸入待测液中，把开关打到“测量”挡，从电表读数乘以量程开关所指的倍数（程开关指红色时，读表中的红色数字；指黑色时则读黑色数字），即为被测溶液的电导率。．每测完一个样品，必须用蒸馏水冲洗电极，然后用滤纸吸干水珠，再测另一个样品。实验十二、丙二醛含量的测定植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛(MDA)是膜脂过氧化的最终分解产物，其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度从上产生的位置释放出后，可以与蛋白质、核酸反应，从而丧失功能，还可使纤维素分子间的桥键松驰，或抑制蛋白质的合成。因此的累可能对膜和细胞造成一定的伤害。原理]丙二醛MDA)是常用的膜脂过氧指标性和高温度条件下以与硫代巴比妥(TBA)反应生成红棕色的三甲川