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大鼠血管平滑肌细胞的培养本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家!相关帮助需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库,其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成,以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的,可以访问探生网biomean进行咨询,期待您的加入细胞培养方法组织块培养法消化培养法器官培养法细胞培养方法组织块培养法消化培养法器官培养法结合生化和化学手段把已经剪切成较小体积的组织进行进一步分离,制成细胞悬液。主要有:胰蛋白酶法胶原酶法EDTA法细胞培养方法组织块培养法消化培养法器官培养法体外培养细胞的分型贴附型:细胞贴附在支持物上生长悬浮型:不贴附于支持物,呈悬浮生长细胞培养实验室培养用品细胞培养液、培养基准备“无菌”培养试剂的配制Hank’s液(单位g)CaCl20.14KCl0.4KH2PO40.06MgSO4.7H2O0.10NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.12D-glucose1.0Phenolred0.01将CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中,其它成分溶在750mL的ddH2O中,混匀(用磁力搅拌器搅拌至溶解),定容至1000mL。高压蒸气消毒10分钟,4℃冰箱保存。D-Hank’s液(单位:g)KCl0.40KH2PO40.06NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.08Phenolred0.02青霉素、链霉素液配制青霉素80万U加Hank’s液至80mL,终浓度1万u/mL链霉素100万U(相当于1g)加Hank’s液至100mL,终浓度10mg/mL分装后至-20℃冰箱保存。DMEM培养液900mLddH2O于1000mL容器中,将DMEM粉1包倒入容器中,盛粉袋用50mLddH2O分次冲洗,也倒入容器,磁力搅拌溶解。加NaHCO3调PH至7.2加青、链霉素至终浓度100u/mL和100ug/mL0.22umX50滤膜过滤(负压泵抽吸),4℃冰箱保存。小牛、胎牛血清灭活55℃水浴箱30分钟,置4℃冰箱保存灭活前放于-20℃冰箱保存待用临用前加入DMEM液中操作步骤大鼠颈椎脱臼致死固定消毒胸腹部大组织镊、组织剪切开胸腹部皮肤另一组织镊、组织剪切开胸腹部,并切除部分胸壁以利暴露眼科镊和眼科弯剪分离胸腹主动脉并放入盛有Hank’s液的细胞培养皿中,转入无菌室。或先用生理盐水漂洗,再放Hank’s液中,转入无菌室眼科直镊和弯镊去除血凝块和血管外膜层。放入另一盛有Hank’s液的细胞培养皿中,剪去血管外的小分支用吸管把组织块转入玻璃培养皿中,均匀贴壁,组织块的间距为0.5cm盖好瓶盖,轻轻翻转培养瓶,让瓶底朝上,并向瓶内注入适量培养液,于37ºC孵箱内放置4~5小时,使得组织块干涸,并与瓶底贴附将培养瓶慢慢翻转平放,使组织块完全浸入培养液中,继续静置3~5天,切勿移动。待有细胞从组织块周围游离出后换液注意:初次传代对胰酶敏感,加入消化液30s,即消化充分,以后2分钟左右细胞消化完成后,用吸管反复抽吸打散细胞中止消化:加入DMEM培养液3滴管,用吸管反复吹打瓶壁细胞离心:1500X5分钟倒掉液体,加D-Hank’s液洗一次,再加10mLDMEM培养液,用吸管抽吸吹打分散细胞,分装于2个培养瓶。在倒置纤微镜下可见圆形细胞。放入细胞培养箱中培养血管平滑肌细胞的冻存和复苏冻存时间:较早期传代,以防细胞因为传代次数过多而造成细胞衰老或发生改变,以保持实验条件的一致性。冻存方法:冻存前24小时更换培养液,冻存时要将密闭好的冻存管依次放于:4ºC2小时-20ºC2.5小时液氮表面2小时浸入液氮培养细胞的鉴定1、形态学鉴定:用相差显微镜常规观察细胞生长形态以及生长规律。并依据常规制作电镜标本进行观察
电镜观察结果:细胞形态不规则,胞浆内有肌丝,纵向排列,有密区,具备平滑
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