微生物学采样细菌

微生物学采样细菌第1页/共44页2

微生物学样品采集方法

第2页/共44页3良好的样品采集、保存、运送是微生物检验质量保证最重要的前提条件。采集的样品的质量常常决定了检验结果，从而直接影响食物中毒的处理工作。第3页/共44页4食品卫生微生物学检验——

GB4789.1-?总则4样品的采集4.1采样原则4.1.1根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。4.1.2应采用随机原则进行采样，确保所采集的样品具有代表性。4.1.3采样过程遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。4.1.4样品在保存和运输的过程中，应采取必要的措施防止样品中原有微生物的数量变化，保持样品的原有状态。第4页/共44页54.2采样方案4.2.1类型二级采样方案设有n、c和m值三级采样方案设有n、c、m和M值

n：同一批次产品应采集的样品件数

c：最大可允许超出m值的样品数

m:微生物指标可接受水平的限量值

M:微生物指标的最高安全限量值注1：二级采样方案-n个样品中

允许有≤c个样品其相应微生物指标检验值大于m值注2：三级采样方案-n个样品中

允许全部样品中相应微生物指标检验值小于或等于m值；允许有≤c个样品其相应微生物指标检验值在m值和M值之间；不允许有样品相应微生物指标检验值大于M值。第5页/共44页6

按采样方案的结果判定按三级采样方案设定的指标:

n=5,c=2,m=100cfu/g,M=1000cfu/g

若5个样品的检验结果均小于或等于m值（≤100cfu/g）√若≤2个样品位于m和M之间（100cfu/g<X≤1000cfu/g）√若3个及以上样品的检验结果位于m值和M值之间X若有任一样品的检验结果大于M值（>1000cfu/g）X第6页/共44页7

例1：婴幼儿配方粉微生物标准

CODEOFHYGIENICPRACTICEFORPOWDEREDFORMULAEFORINFANTSANDYOUNGCHILDREN

（2004－2007）微生物/采样方案

ncmM致病菌阪崎肠杆菌3000/100gNA

沙门氏菌6000/25gNA加工卫生指标菌落总数52500/g5000/g

肠杆菌1020/25gNA第7页/共44页8

例2：速冻预包装面米食品－微生物指标

项目指标生制品熟制品ncm（cfu/g）M（cfu/g）ncm（cfu/g）M（cfu/g）菌落总数－5110000100000大肠菌群－5110100霉菌计数－521001000沙门氏菌５００/25g－50０/25g－金黄色葡萄球菌511000/25g10000/25g51100/25g1000/25g单核细胞增生性李斯特菌a

－50０/25g－a仅适用于以肉、禽、蔬菜为主要原料的速冻熟制品。

第8页/共44页94.2.2

各类食品的采样按相应产品标准的规定执行4.2.3

食源性疾病及食品安全事件中食品样品的采样4.2.3.1

由工业化批量生产加工的食品污染导致的食源性疾病或食品安全事件，食品样品的采集和判定原则按4.2.1和4.2.2执行。同时，确保采集现场剩余食品样品。4.2.3.2由餐饮单位或家庭烹调加工的食品导致的食源性疾病或食品安全事件，食品样品的采集按GB14938中卫生学检验的要求执行。第9页/共44页10GB4789.1-?总则

4.3各类食品的采样方法4.3.1即食类预包装食品：取相同批次的最小零售原包装，检验前要保持包装的完整，避免污染。4.3.2非即食类预包装食品：包装小于500g的固态食品或小于500mL的液态食品，取相同批次最小零售包装；大于500mL的液态食品，应在采样前摇动或用无菌棒搅拌液体，使其达到均质后分别从相同批次的n个容器中采集5倍或以上检验单位的样品；大于500g的固态食品，应用无菌采样器从同一包装的几个不同部位分别采取适量样品，放入同一个无菌采样容器内,采样总量应满足微生物指标检验的要求。第10页/共44页114.3各类食品的采样方法4.3.3散装食品或现场制作食品：根据不同食品的种类和状态及相应检验方法中规定的检验单位，用无菌采样器现场采集5倍或以上检验单位的样品，放入无菌采样容器内,采样总量应满足微生物指标检验的要求。4.3.4食源性疾病及食品安全事件的食品样品：采样量应满足食源性疾病诊断和食品安全事件病因判定的检验要求。第11页/共44页12食源性疾病判定标准及处理总则

GB14938—修订要点13.1术语食源性疾病（foodbornedisease）:因摄入食物而导致的感染性或中毒性疾病。食源性感染（foodborneinfection）：摄入被细菌、病毒或寄生虫污染的食物而引起的感染性疾病。食物中毒（foodintoxication）:摄入被生物性毒素、化学性毒物污染或含有天然毒性成分的食物而引起的急性中毒性疾病。食源性疾病暴发（foodbornediseaseoutbreak）：因摄入相同食物而出现两例或两例以上症状相似病例的事件。食源性疾病散发（foodbornediseasesporadicoccurrence）:单个病例罹患某种食源性疾病的事件，或两个及多个病例在时间、地点的分布及病例相互之间并无关联的单个事件。第12页/共44页13食源性疾病判定标准及处理总则

GB14938—修订要点23.2分类细菌性食源性疾病：摄入含有一定数量的食源性致病菌或细菌毒素（如沙门氏菌、肉毒毒素等）的食物，而引起的一类感染或中毒性疾病。病毒性食源性疾病：摄入含有一定数量的病毒（如甲肝病毒、诺如病毒等）的食物而引起的一类感染性疾病。寄生虫性食源性疾病：摄入含有一定数量的感染性寄生虫（如广州管圆线虫、旋毛虫等）的食物而引起的一类感染性疾病。第13页/共44页14食源性疾病判定标准及处理总则

GB14938—?修订要点2化学性食物中毒：摄入被某种化学毒物污染，或在加工制作过程中产生或误用某种化学毒物（如亚硝酸盐、钡盐等）的食物，而引起的一类急性中毒性疾病。真菌毒素食物中毒：摄入被某种真菌毒素污染（如呕吐毒素、3－硝基丙酸等）的食物，而引起的一类急性中毒性疾病。有毒动物食物中毒：摄入含有有毒成分的动物性食物（如河豚鱼、有毒贝类等）所引起的一类急性中毒性疾病。有毒植物食物中毒：摄入含有有毒成分的植物性食物（如毒蘑菇、菜豆等）所引起的一类急性中毒性疾病。第14页/共44页15GB14938系列标准（1－13）食源性疾病判定标准及处理总则食源性沙门氏菌病判定标准及处理原则食源性金黄色葡萄球菌肠毒素中毒判定标准及处理原则食源性副溶血性弧菌病判定标准及处理原则食源性病原性大肠埃希氏菌病判定标准与处理原则食源性变形杆菌病判定标准及处理原则食源性蜡样芽胞杆菌病判定标准及处理原则食源性肉毒梭菌病判定标准及处理原则食源性椰毒假单胞菌酵米面亚种病判定标准及处理原则食源性单核细胞增生李斯特菌病判定标准及处理原则食源性空肠弯曲菌病判定标准及处理原则食源性志贺氏菌病判定标准及处理原则食源性阪崎肠杆菌病判定标准及处理原则第15页/共44页16食物中毒现场调查常备用品（1）采样工具：注射器、肛拭子、咽拭子、消毒棉签、消毒纱布、调匙、勺子、夹子、镊子、剪刀、屠工用刀、酒精灯、标号用品、75%酒精、其它消毒灭菌器具等。（2）样品容器：灭菌塑料袋、广口瓶、灭菌试管、灭菌粪便盒、样品冷藏设施等第16页/共44页17食物中毒现场调查常备用品（3）防护用品：工作衣或隔离衣、口罩、白帽子、手套、靴子等。（4）调查用表：食物中毒个案调查登记表、调查结果汇总表、卫生监督文书等。（5）检验设备：血平板、毒物快速分析设备、深部温度计等。

第17页/共44页18食物中毒现场调查常备用品6）取证工具：照相机、录音机、摄象机等。（7）参考资料：各种食物中毒诊断标准及处理原则、食品卫生相关法律法规、标准及其它有关专业技术参考资料等。（8）其它：通讯工具、交通工具、生活用品等。第18页/共44页19微生物采样方法

--采样要求应尽一切努力完成对中毒发生现场可疑中毒食品的样品采集工作，根据具体情况采集病人排泄物、呕吐物、血液样本、尿液。样品采集、保存、运送是微生物检验最重要的前提条件。采样的质量常常决定了检验结果，从而直接影响本次食物中毒的处理工作。第19页/共44页20微生物采样方法

--采样品种

按临床症状和检验目的：呕吐物、血液、尿液、大便、剩余的食品、食品容器和加工用具表面涂抹等，可能条件下还应采集厨师和直接接触食品人员的手拭、肛拭等。按现场具体情况进行：对腹泻病人要注意采集粪便和肛拭；对发热病人注意采集血液样品；对怀疑化学性食物中毒应采集血液和尿液；无剩余可疑食品时应采集相关容器、用具、抹布等涂抹样品。第20页/共44页21微生物采样方法

--采样人数尽可能采集较多的人数：对一起发病规模较大的食物中毒事件一般至少应采集10-20名具有典型临床症状的病人的检验样品，同时应采集部分具有相同进食史但未发病者的同类样品作为对照。第21页/共44页22微生物采样方法

--粪便(一)、病人粪便标本的采集和运送1.

选取有脓血、粘液部分的粪便3-5克，液体粪便则取絮状物2-5ml，盛于灭菌的容器中，或用采便管采集腹泻病人大便，及时送检和接种。2.在无法获得粪便的情况下，可用经无菌生理盐水（或保存液）或增菌液用湿润的棉拭子插入肛门4-5cm深处（小儿2-3cm），轻轻转动一圈，擦取直肠表面的黏液后取出，盛入运送培养基或保存液中送检。*注意为保证多个检验项目的开展，同一病人应至少采集2支肛拭。第22页/共44页23微生物采样方法

--粪便3.粪便标本应尽量在病程早期和治疗前采集；无论中毒病人是否已经服药，均应进行大便采集。同时应采集新鲜粪便。若无法获得时，可用采便管或棉拭子采集。4.标本采集后要立即送检。拖延送检可使病原菌数量迅速减少或杂菌过度生长，影响致病菌的检出率。5.应采集严重腹泻中毒病人的大便。第23页/共44页24微生物采样方法

--粪便不同病原菌导致的腹泻，其粪便的性状不同，在采样过程中既要采集有价值的部分（如脓血部分），又要从大便性状上判断引起食物中毒的病因。

典型的黏液脓血相兼大便：志贺菌脓便：志贺菌、EIEC血便：沙门、弯曲菌、志贺菌、EIEC米泔样大便：霍乱水样便腹泻：各种食物中毒血水样大便：肠出血性大肠杆菌阑尾炎症状：耶尔森菌第24页/共44页25微生物采样方法

–咽拭1.拟检查脑膜炎奈瑟菌时，应自鼻咽部采集标本。即用无菌的咽拭子（一端弯曲的金属棉拭子）由口腔进入伸向鼻咽部，到达咽后壁擦取标本。标本采集后应立即保温送检。第25页/共44页26咽拭示范咽拭子：将棉签檫拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将棉签浸入4-5ml采样液中，尾部弃去。第26页/共44页27微生物采样方法

–鼻拭漱口液2.拟检查流感等病毒等采集标本时，成人标本为咽喉漱洗液及鼻拭子。儿童为咽拭子。采样液为20%牛肉汤生理盐水，成人咽喉漱洗液用10ml，儿童咽拭子用3ml。病人先咳嗽数次，然后将采样液倒入口内，仰头漱洗咽部约1分钟，吐回采样杯中，倒入无菌试管，塞紧塞子，再取棉拭子沾取鼻腔分泌物，放在同一采样试管中。儿童采样用棉拭子涂抹咽壁及扁桃体，放入3ml采样液中，置冰瓶中立即送检。注：取鼻洗液和漱口液时，需预先了解患者是否对抗菌素有过敏史，如有，则洗液和漱口液不应含有抗菌素。如为细菌检验，也不应有抗生素。第27页/共44页28鼻拭示范鼻拭子：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓缓转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入4-5ml采样液中，尾部弃去。第28页/共44页29微生物采样方法

–食品标本（一）食品样品采集的基本要求

（1）

尽量采取中毒患者食用后的剩余食品；

（2）无直接剩余食品时，采集可疑中毒食品的包装或者用灭菌生理盐水洗涤盛过可疑中毒食品的容器，取洗涤液；

（3）采集同一加工场所加工的其它直接入口食品；

（4）半成品或原料，若是化学性、有毒动植物食物中毒采集食品原料尤为重要；

（5）调查人员应对食品加工场所进行认真全面搜查，以客观结果判断是否还存在剩余食品或者原料。第29页/共44页30微生物采样方法

–食品标本

（二）食品标本的采集方法被污染的食品，采样前应先通过调查，基本上弄清污染物、污染范围和造成污染的原因，才能对可疑污染物进行采样检验。1.采样时，应根据被污染食品数量的多少，决定取样件数。发现可疑污染物或污染物的包装材料，都应加以收集和保管好。2.样品的采集必须在无菌操作下进行，各种采样用具必须是无菌的，采样用的工具不能重复使用。第30页/共44页31微生物采样方法

–食品标本3.

采集污染食品的检样数量一般应根据检验项目进行确定。检样一般至少以25g（ml）开展一个项目的检测为准。液体样品要振摇混匀，冰冻样品应保持冷冻状态，非冷冻食品可放0-5℃中保存。4.采样后应立即送检，一般不得超过3小时。如路途遥远，可将检样保存在1-5℃环境中。第31页/共44页32微生物采样方法

–食品标本（三）操作环节的采样

食品在生产经营过程中，对直接接触食品的生产设备、工具、用具、盛放食物的容器及操作人员的手等，均可进行采样检验，以证明其染菌的情况和对食品的污染程度。采样的面积以10cm×10cm为基准。这类采样主要针对细菌性食物中毒。１.对食品生产设备、工具的采样，可用经过灭菌的小刀，在机械设备、管道或工具上刮下黏附在表面的污物，放入灭菌采样管或采样瓶中。第32页/共44页33微生物采样方法

–食品标本2.

对食品用具、盛器的采样，可用经过灭菌的棉拭，蘸取灭菌的生理盐水等，在刀、砧板、抹布、碗盆等容器、冰箱、水池、下水道口、设备、工具或操作人员的手上，直接抹擦后，放入采样管中。在放入试管时，应用灭菌剪刀，将接触手的棉拭剪掉，或折断后装入，并在火焰上将管口灭菌后，及时将试管盖好。第33页/共44页34微生物采样方法

–食品标本（四）采样单的填写采集的样品要及时填写采样单，记录相关项目，做好样品标记。对采集的样品，确定检验项目时，应根据实际情况综合考虑，做到目的明确，有选择有针对性的确定需要检验的项目。第34页/共44页35微生物采样方法

–食品标本（五）采样器械及试剂的注意事项1.

采样用的试管、瓶子、盛器、剪刀、镊子、棉拭等均应该是无菌。2.

采样用的生理盐水、漱洗液、运送培养基及有关试剂等都应该满足新鲜、无菌的要求，同时应符合采样所需要的试剂量。一般运送培养基为5ml/管为宜。第35页/共44页36微生物采样方法

–食品标本3.

肛拭、食品和环节等采样，其采样量须满足必须开展的检验项目的要求，如肛拭采样要用二根棉拭，食品采样须多于25g（ml）以上。4.

采样的同时，应及时做好样品标记，完整填写采样单。立即将检样送检验室，并有交接手续。第36页/共44页37微生物采样方法

–其他标本呕吐物采集呕吐物已被处理掉时，涂抹被呕吐物污染的物品。应采集洗胃液。

血液采集至少5名中毒病人急性期(3天内)和恢复期(2周左右)静脉血3ml。副溶血弧菌为1-2日和1周。同时采集正常人静脉血作为对照。

食品加工人员带菌情况采样手、鼻、咽和有感染灶的皮肤等涂抹样。便样。

尿液采集

水样采集

其它采样第37页/共44页38微生物采样方法

--注意问题采样要规范：采集食品要保证一定的数量；肛拭采样必须保证运送培养基的质量，用二根棉拭进行采样，采样时必须有一定的深度，否则即使是肛拭样本也会造成无细菌生长现象；采样要及时，用于细菌性食物中毒检验的样品尽量在服用抗生素以前采集。第38页/共44页39微生物采样方法

--注意问题4.不同样品采样方法不同。采集样品时应尽量符合无菌要求；5.样品采集后应妥善保管，有条件时备检样品应置冰箱内或冰盒中保存（温度通常控制在4℃左右）；6.采样时应注明样品名称、来源、建议检验项目等。第39页/共44页40微生物采样方法

–标本运送标本运送：标本采集后应根据检验目的及时送检。一般情况下，标本应在低温下，24小时内运送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，48小时内能进行接种的可置于4℃保存，如未能接种应置-70℃或以下保存。血清标本可在4℃存放一周，长期保存置-20℃或以下。第40页/共44页河北cdc2009年5月41微生物采样方法----通用要求样品种类采样数量采样方法

粪便2ml(g)置无菌样品容器内呕吐物50-200g置无菌样品容器内血液不少于3ml静脉无菌采样尿液30-50ml取清洁中段尿固体食品200-500g置无菌样品容器内液体食品