(48)-9-血小板聚集实验临床血液学检验技术

血小板聚集功能实验

2血小板简介

出血血小板凝集血小板粘附暴露于胶原纤维ADP从

PLT,RBC和组织中释放出来从组织中释放组织因子凝血酶生成血小板变形血小板血栓红色血栓血液循环减慢，凝血因子水平升高血管修复纤维蛋白溶解活性增强RBCWBCPLT毛细血管内皮细胞胶原纤维对于原发性的血栓来说，需要血小板的粘附和凝集。对于凝血反应来说，血小板是关键的因素。激活后血小板生理功能粘附功能：血小板附着在破损血管胶原表面聚集功能：血小板相互间的粘附释放功能：释放血小板内容物，加强凝血因子、血小板、内皮细胞功能促凝功能：激活凝血系统血块收缩功能维护血管内皮的完整性。血小板聚集（plateletaggregation,PAg）

是指血小板与血小板之间相互粘附过程。是形成血小板血栓的基础，也是血小板进一步活化和参与二期止血、促进血液凝固的保证。如今心脑血管病已经成为影响人类健康的第一杀手。心脑血管病病理变化的核心是血栓的形成,而血栓的形成的基础是血小板功能的变化。因此，血小板功能检测在血栓性疾病的诊断、治疗、检测及预防方面都具有重要的意义4血小板聚集功能检测试验原理优势劣势应用程度整体止血功能出血时间体内观察止血体内，生理，POC敏感性低，有创，重复性差既往广泛应用，目前以少使用TEG/ROTEM监测血凝块形成的速率和质量全血检测，POC反映血凝块特性，受影响因素多，重复性差广泛应用于围手术期基于剪切力PFA100/200高剪切力血小板粘附与聚集全血，高剪切力，用血少，简单快速，POC灵活性差，受VWF、Hct及PLT计数影响，成本高只用于阿司匹林监测基于血小板聚集光学比浊法（LTA）低剪切力条件下诱导血小板聚集金标准样本制备，缺乏标准化应用广泛Plateletworks对比血小板活化前后的血小板计数变化快速简便，POC间接反映血小板聚集手术科室/心内科VerifyNow全自动血小板聚集仪，监测抗血小板治疗简单，POC，可测试ASA、P2Y12及GPIIb/IIIa抑制剂灵活性差，成本高应用日趋广泛全血血小板聚集仪（WBA）监测加入诱聚剂后电阻抗的变化全血，多通道半自动、受血小板计数影响专业实验室血小板功能检测方法血小板功能检测各方法学LTAVerifyNowTEGPFA-200方法学评价血小板聚集检测的“金标准”POCT评估凝血全象高剪切力，模拟ACS过程反应主要血小板功能聚集功能聚集功能促凝功能粘附聚集功能所需条件浊度监测仪VerifyNow仪器TEG仪器PFA仪器检测限制脂血样本无特殊无特殊无特殊操作流程繁琐简便中等简便标准化困难好差可标准化价格便宜昂贵较昂贵较便宜与临床事件相关性YESYESYESYES监测阿司匹林YESYESYESYES监测P2Y12受体抑制剂YESYESYESYES监测GPIIbIIIa拮抗剂YESYESYESNO血小板功能检测各方法学汇总LTA法原理7光学比浊法（LTA）：是测定血小板聚集的经典方法，也是目前使用最广泛的方法。

原理：先用乏血小板血浆（PPPplateletpoorplasma）对仪器进行调零。然后在富血小板血浆（PRPplateletrichplasma）中加入诱聚剂使血小板发生聚集，PRP血浆的浊度减低，透光度增加，连续记录透光度的变化可以判断血小板的聚集能力。光源诱导剂(ADP，胶原

等等)PRP透射光PRP在37°C条件下，在小试管内搅拌，并将小试管置于光源和光器之间。加入诱导剂之后，血小板发生聚集，吸收的光较少，因此透射度增加，并被感光器接受。

原理如何做血小板凝集检测转换的吸光度与聚集的比例(%)基线为PPPPPP:乏-血小板血浆吸光度聚集(%)9

对受检者的要求

1.饮食2.烟酒3.药物4.采血前需处于安静状态5.年龄、经期、妊娠期等生理因素

实验流程：标本的准备9方法抽取血液标本

制备PRP和PPP

室温下离心

未应用药物应用阿司匹林，NSAIDs类药物和氯吡格雷。置入真空的血液试管中枸橼酸钠0.109M(3.2%)注射针头(21-gauge以上)

富含血小板的血浆(PRP)：

1000r/min

离心

10min血小板数量:(100-200)*109/L

乏-血小板的血浆(PPP)；3000r/min

离心

20

min血小板数量:<(10-20)*109/L最好在血浆准备完成后60-120min内检测完成实验流程：采血步骤及制备PRP和PPP11对试验条件的要求1.诱导剂2.PRP中的血小板数3.搅拌条件4.采血后测定时间5.放置PRP的温度6.抗凝剂7.pH8.血细胞、溶血及血脂的干扰11注意事项加入诱导剂各类诱导剂2µM二磷酸腺苷ADP2µg/mL胶原Collagen5µM肾上腺素Epinephrine

1.2mg/mL瑞斯托霉素Ristocetin1.0mM花生四烯酸AA

实验流程13常用的诱聚剂：

低分子物质：ADP、肾上腺素、TXA2、AA等。

蛋白水解酶：Ⅱa、蛇毒等

颗粒及巨分子：胶原、微纤维等

凝集素：瑞斯托霉素等13血小板凝集功能检测的临床应用血小板聚集功能检测目前仍是血小板功能检测的“金标准”。适用于：（1）监测血栓性疾病抗血小板药物治疗前后是否有效、安全；（2）中老年人检查血小板功能可预防血栓性疾病；（3）出血性疾病筛选、诊断和治疗监测；（4）成分输血者检测浓缩血小板功能，保证输注有效血小板；（5）手术前后评价出凝血风险等。（6）血栓前状态的实验诊断如高血压病等。（7）血小板病的实验诊断如血小板无力症（GPIIb-IIIa缺陷）巨大血小板综合征（GPIb-IX缺陷）等。。抗血小板药物的治疗监测

传统抗血小板药物：阿司匹林、氯吡格雷（波立维）新型抗血小板药物：普拉格雷、替卡格雷、

西洛他唑、双嘧达莫替格瑞洛

正常血小板聚集实验的最大聚集率约为60-