动物细胞融合与单体克隆抗体

2.2.2

动物细胞融合与单克隆抗体现在是1页\一共有33页\编辑于星期四本节要点一、动物细胞融合技术二、动物细胞融合基本原理三、诱导方式？与植物细胞杂交的不同的是？四、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较五、获得抗体的传统方法六、单克隆抗体的含义？如何制备？优点？七、整个制备过程为何要经过两次筛选?现在是2页\一共有33页\编辑于星期四一、动物细胞融合技术1.概念：

动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。现在是3页\一共有33页\编辑于星期四二、动物细胞融合基本原理细胞膜的流动性三、诱导方式物理法：化学法：生物法：灭活的病毒电激、振动、离心聚乙二醇（PEG）如：仙台病毒为什么要用灭活的病毒？仙台病毒物理/化学方法丧失感染活性保留融合活性现在是4页\一共有33页\编辑于星期四灭活的病毒灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞融合，形成杂种细胞现在是5页\一共有33页\编辑于星期四四、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞融合的方法诱导方法用途获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）制备单克隆抗体灭活的病毒现在是6页\一共有33页\编辑于星期四为什么“甲流”康复者或接种疫苗1月以上者的血浆会成为救治重症“甲流”患者的妙药？血浆中的抗体会与“甲流”病毒反应，从而将病毒消灭。现在是7页\一共有33页\编辑于星期四五、获得抗体的传统方法把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。缺点：人们发现，B淋巴细胞尽管可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。怎样才能获得大量的单一性抗体呢？产量低纯度低特异性差现在是8页\一共有33页\编辑于星期四抗原决定簇：抗原表面具有的某些特定的化学基团，能决定抗原特异性，是免疫细胞识别抗原的重要依据。各种抗原的决定簇数目不同，同一抗原的决定簇可能有多种。现在是9页\一共有33页\编辑于星期四抗体与相应抗原特异性结合现在是10页\一共有33页\编辑于星期四

抗体由何种细胞产生？主要分布在哪里?现在是11页\一共有33页\编辑于星期四怎样才能获得单一性抗体？大量克隆单一的B淋巴细胞其寿命仅有几天，无法长期体外培养动物细胞培养技术骨髓瘤细胞无限增殖杂交瘤细胞产生抗体无限增殖细胞融合现在是12页\一共有33页\编辑于星期四G.Kohler

C.Milstein

英国科学家米尔斯坦和科勒于1975年设计和实践了这个想法，并获得成功。摘得1984年诺贝尔生理及医学奖。现在是13页\一共有33页\编辑于星期四六、单克隆抗体的制备用抗原免疫小鼠骨髓瘤细胞的培养B淋巴细胞骨髓瘤细胞融合多种细胞现在是14页\一共有33页\编辑于星期四由于培养基中缺乏相应的营养物，骨髓瘤细胞死亡B淋巴细胞培养几天后死亡杂交瘤细胞置于选择培养基上培养现在是15页\一共有33页\编辑于星期四细胞膜的流动性灭活病毒、PEG、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞诱导的手段？融合后细胞的类型？AB杂种细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB（A、B）含两种生物的遗传物质1.2动物细胞融合过程原理？杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。现在是16页\一共有33页\编辑于星期四①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。

③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是能不断分裂增殖。你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？

小资料：现在是17页\一共有33页\编辑于星期四在培养液中加入氨基蝶呤，收集增殖细胞！加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞因为可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。现在是18页\一共有33页\编辑于星期四通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不超过一个，再由这些单细胞克隆生长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。②再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞现在是19页\一共有33页\编辑于星期四阳性孔方法——抗原-抗体杂交法

在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。现在是20页\一共有33页\编辑于星期四多孔细胞培养板阳性克隆的筛选和克隆化培养用培养液稀释现在是21页\一共有33页\编辑于星期四注射到小鼠体内体外培养由单个杂交瘤细胞通过克隆，所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。单克隆抗体现在是22页\一共有33页\编辑于星期四七、整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选：第二次筛选：用特定的选择培养基筛选出多种杂交瘤细胞筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。现在是23页\一共有33页\编辑于星期四现在是24页\一共有33页\编辑于星期四现在是25页\一共有33页\编辑于星期四三、单克隆抗体的特点和应用“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物诊断试剂用于治疗疾病1、特点：特异性强，灵敏度高，产量高。2、应用：用于运载药物优点：准确，高效，快速现在是26页\一共有33页\编辑于星期四现在是27页\一共有33页\编辑于星期四2.3单克隆抗体的应用诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。现在是28页\一共有33页\编辑于星期四“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物单抗导向，药物为弹头治疗疾病和运载药物主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。现在是29页\一共有33页\编辑于星期四练习1、动物细胞融合技术最重要的用途是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞B2、单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）

A.B淋巴细胞B.T淋巴细胞C.骨髓瘤细胞D.杂交瘤细胞D3、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A.②④B.①③⑤C.①②③④D.②③C现在是30页\一共有33页\编辑于星期四B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC

4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。(1).该实验方案的目的是：________________(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？(3).A是从小鼠的脾脏中取得__________该细胞能够产生______。(4).图中B为________________过程，常用_________________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。(5).C过程指细胞培养，该过程包括________培养和__________培养两个阶段。B淋巴细胞抗体细胞融合灭活的病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代现在是31页\一共有33页\编辑于星期四BBBB瘤瘤瘤