建立顶空气相色谱法测定脉络通颗粒中大孔吸附树脂残留量

建立顶空气相色谱法测定脉络通颗粒中大孔吸附树脂残留量概述选题立项设定目标提出解决方案制定并实施对策效果验证巩固措施总结及今后打算护佑QC小组●

目录2021/3/202第一部分

概述2021/3/2031。产品概况

脉络通颗粒是扬子江药业集团独家生产的中药保护品种之一，是以古代主治气虚、血瘀、中风、半身不遂的名方—“补阳还五汤”为基础、结合多年临床治疗冠心病的经验，根据中医活血化瘀、益气通络的原则组方而成，该方为纯中药制剂，通补兼施，补不带邪，通不伤正，顺通人体的经脉和网络。

2021/3/2042.小组概况无极限QC小组制表人：赵沈娟2007年10月小组类型创新型小组人数8人活动周期07.10-08.03活动次数21次活动出勤率100%注册编号2021/3/2053.小组成员简介序号姓名性别受教育情况职务组内分工1赵沈娟女本科、质量工程师标准研究员组长、方案实施，资料整理

2武美荣女本科标准研究员方案实施，论文发表

3石晶萍女本科、工程师QC主管副组长、技术指导

4解加扬男研究生质管部长工作协调、技术指导

5李雪兰女大专、质量工程师仪器分析员方案实施

6马军男大专GMP提升员方案实施

7祖若玉女本科仪器分析员方案实施

8李明男研究生标准研究员方案实施制表人:赵沈娟日期:2008.32021/3/2064.活动计划P2007.10：提出问题，设计方案D2007.11：方案评估，制定对策。C2007.12～2008.01：对策实施，效果检查。A2008.02～2008.03：巩固措施，总结打算。2021/3/207第二部分

选题立项2021/3/208

选题立项——术语解释：顶空进样法

顶空进样气相法是将（液体或固体）密封入试样瓶中，在一定的温度下保温加热，使试样中的挥发成分挥发达到气液平衡，提取至气相（试样上部的空间：称这部分为顶空）。保温一定时间后，采集顶空气体的一部分，使用气相色谱仪进行分析的方法。在稀薄溶液中由于成分的蒸气压力与溶液中的摩尔浓度成正比例，所以，采用顶空进样分析可进行溶液中组分的测定。优适用于易挥发组分的微量、半微量和痕量分析。

2021/3/2091、可高灵敏度地分析挥发成分；2、由于高沸点成分不导入GC，分析时间缩短；3、由于不挥发成分不导入GC，GC的污染降至最小限度，便于维护。选题立项——如何应用起来,扩大该仪器的应用范围,提高其使用效益？顶空进样法的优点2021/3/2010选题立项——提出问题

本品在生产上采用苯乙烯骨架型大孔吸附树脂分离纯化技术，虽加强了有效成分的充分提取，提高了药品疗效，减少了患者的用药剂量。但这一技术的应用可能会带入正己烷、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙基苯等残留物，若这些有机溶剂残留量超标，将影响药品质量，危害人体的健康。2021/3/2011选题立项——提出问题组分对人体可能产生的危害正己烷抑制中枢神经、刺激皮肤粘膜。致多发性周围神经病变。苯强烈的致癌物质，破坏人体的循环系统和造血机能，导致白血病。甲苯刺激皮肤和粘膜，麻醉中枢神经系统。二甲苯刺激眼、，麻醉中枢神经系统。苯乙烯刺激和麻醉眼、上呼吸道粘膜。引起阻塞性肺部病变。二乙基苯刺激眼、粘膜、上呼吸道和皮肤2021/3/2012选题立项——选择突破口序号突破口内容分析评估得分选定突破口可行性可靠性经济性1购进质优的品牌树脂因缺乏统一的树脂标准，各厂家提供的树脂性能参数参差不齐，缺乏指导。●▲●7不选2改进树脂的处理和再生技术树脂处理和再生技术经过多次优化，无法彻底清除残留物。●●▲8不选3研究寻找树脂残留量测定的方法开拓思路，寻找适合生产、检验要求的方法，加强质量控制，是分析工作者开展工作的重要方法之一。★★●13选注：可行性、可靠性、经济性三个指标均以1分（▲一般）、3分（●良好）、5分（★显著）为评分标准，上述得分为QC小组成员的总评分数。制表人：李明制表时间:2007.10.122021/3/2013选题立项——确定课题建立顶空气相色谱法测定脉络通颗粒中大孔吸附树脂的残留量

我们的课题2021/3/2014第三部分

设定目标2021/3/2015目标：建立脉络通颗粒中大孔吸附树脂残留量测定的新方法，可以进行三批以上样品的检测。

目标值：1.各裂解产物峰的分离度≥2.0；

2.标准溶液重复进样的RSD≤5%；3.方法的回收率不低于80%~110%确定研究目标2021/3/2016第四部分

提出解决方案

2021/3/2017

可行性分析为了使该产品载入《中国药典》、走向国际市场，增加该产品的大孔吸附树脂裂解产物检测势在必行。大孔吸附树脂的裂解产物(正己烷、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙基苯）属易挥发性有机溶剂,适合于顶空进样。顶空进样法技术的成熟,小组成员均为在质检岗位工作过多年的技术骨干，分析问题、解决问题的能力强，检验操作熟练，经验丰富。领导对此课题非常重视，认为此课题的开展对提升产品质量具有非常重要的意义，因此在人力、时间上给予大力支持。可行性分析2021/3/2018

设计方案确定色谱分离评价产关键指标期望值。准确度Y%分离度R%分析时间T查阅资料、联系经验确定顶空气相色谱法测定脉络通颗粒中大孔吸附树脂残留量孔吸附树脂单因素试验条件组合试验确定影响色谱分离效果的关键参数及其组合色谱柱流速柱温A℃平衡温度B℃平衡时间C℃方法验证（精密度、线性、重复性、回收率稳定性）实际应用按药典及ICH规定试验培训考核2021/3/2019第五部分

制定并实施对策

2021/3/2020制订对策表No问题点目标对策措施负责人完成时间1

查阅资料，联系实际确定相关指标和参数确定Y，R，T以指导条件试验,确定分离效果好的色谱柱、流速查阅资料，总结近几年的工作经验。专人负责,集体讨论武美荣07.102单因素试验确定分离效果好的柱温、性质稳定的平衡温度及气液平衡达到稳态的最佳平衡时间对比试验选择各因素的若干个水平进行测试,选择最佳值

赵沈娟07.103条件组合试验在单因素试验的基础上寻找优化组合

正交试验选用3因素正交表,3指标综合评价

李明07.114方法学考察精密度、重复性、稳定性的RSD均≤5％，回收率80%～110%，确定线性范围及方程按药典及ICH规定试验

标准曲线法、加样回收法及线性方程

赵沈娟马军07.12～08.015实际应用将建立方法应用于实际检验工作

培训、考核理论和操作考试

李雪兰08.02～08.032021/3/2021实施一：查阅资料,联系实际确定相关指标和参数查阅资料：“大孔吸附树脂分离纯化中药提取液的技术要求”“药品注册管理规定”《药物分析杂志》《色谱理论基础知识》

……2021/3/2022查阅资料,联系实际确定相关指标和参数2021/3/2023苯乙烯骨架型树脂裂解产物组分复杂：正己烷苯甲苯二甲苯：邻、间、对二甲苯苯乙烯二乙基苯：邻、间、对二乙基苯查阅资料,联系实际确定相关指标和参数10组分2021/3/2024综合考虑，小组讨论研究,确定了下一步条件试验的评价指标:查阅资料,联系实际确定相关指标和参数Y准确度(％):望大,此为关键指标,在满足Y尽可能选优的基础上考虑其余指标;R分离度(％):此指标虽然是望大,实际上大于5％以上分离效果差异不大

T分析时间(min):望小,但前提是须满足R足够大(大于2.0％)。2021/3/2025查阅资料,联系实际确定相关指标和参数确定四个基本条件

：

流速:2.0ml/min

色谱柱:HP-INNOWaxPolyethyleneGlycol（30m×0.53mm×5.00μm）弹性石英毛细管柱柱温：程序升温法多组的裂解产物，以正丙醇为内标物，消除系统及操作误差。2021/3/2026

实施二：单因素试验1.柱温的选择取混合对照品溶液和正丙醇内标溶液各1.0ml置于10ml顶空瓶中，密封，混匀。于瓶温90℃平衡30min，顶空进样量1ml，分别用下述条件检测：色谱条件初始T维持时间升温速率维持时间升温速率维持时间条件一60℃2min2℃/min→85℃2min20℃/min→220℃5min条件一60℃1min2℃/min→92℃0.5min10℃/min→200℃6min2021/3/20271.正己烷2.苯3.正丙醇4.甲苯5.二甲苯6.苯乙烯7.二乙基苯

程序升温2图程序升温1图

1.柱温的选择色谱条件选二未分离R﹥3.02021/3/20282.气液平衡温度选择

在顶空分析法中，被测物质的色谱峰与其蒸气压成正式比，一般情况下，平衡温度越高，被测物质的蒸气压越高，顶空气体的浓度越高，分析灵敏度也越高。然而，过高的温度会造成顶空气体压力过高，进样针离开样品瓶的瞬间针尖的压力降为大气压，势必会造成一部分样品从针尖逸失，反而使灵敏度下降，且增大了分析误差。

苯为强致癌物质，本实验中优先考虑。

本实验选择了85℃、90℃、100℃、110℃四个温度进行实验，每个条件下平行进样三次。结果见下表苯致癌2021/3/20292.气液平衡温度选择T℃

对照品与内标物峰面积比值正己烷苯甲苯二甲苯苯乙烯二乙基苯

850.450.321.581.651.461.70900.420.331.631.731.531.881000.210.261.641.641.561.921100.150.221.621.701.541.952021/3/2030

3.气液平衡时间的选择取混合对照品溶液和正丙醇内标溶液各1.0ml置于10ml顶空瓶中，密封，混匀。于瓶温90℃分别平衡15、20、25、30、35、40min，顶空进样量1ml，结果各裂解产物在15min～25min时峰面积与内标物峰面积比值随时间增大而增大，30min后基本保持不变，即30min以后气液基本达到平衡。（见图）

2021/3/2031在既定的色谱柱、流速条件下,上面3个因素单独试验找出了相对最优的水平(位级)值,但组合起来可能会互相影响。在单因素试验的基础上寻找优化组合,在上述选定的A、B、C水平(位级)值的基础上分别增大和减小一定的幅度,定出各3个位级,如果全面组合共有3×3×3=27种,现选用4因素3位级正交表安排9次试验,希望通过它们展望出全部组合中的最优组合。

实施三：条件组合试验2021/3/2032综合评价指标：流速：2.0mL/min柱温：升温程序，初始温度为60℃，保持1min，以每分钟2℃的速度升温至92℃，保持0.5min，再以每分钟10℃的速度升温至200℃，保持6min。平衡温度：30℃实施三：条件组合试验2021/3/2033实施四：方法学考察1.精密度试验取对照品溶液，进样6次，测定色谱峰面积，计算各对照品峰面积与内标物峰面积比值的RSD。结果表明，精密度良好。名称对照品与内标物峰面积比值平均RSD%123456正己烷0.40840.41090.40870.40290.40470.41260.40800.9苯0.32820.32820.32830.33540.33440.32820.33041.0甲苯1.62871.62431.62131.67081.65421.62421.63732.3二甲苯1.69111.68691.67981.73141.71841.67491.69711.3苯乙烯1.53151.51981.51671.56031.55221.51861.53321.2二乙基苯1.87951.86631.84921.88021.88931.82941.86561.22021/3/20342.重复性实验

随机抽取一批样品，连续点样6次，按上述色谱条件进行检测分析，结果正己烷、苯、二甲七均未检出，共余裂解产物结果如下：名称对照品与内标物峰面积比值(×10-6%)

平均RSD%123456甲苯8.889.289.809.439.769.589.463.6苯乙烯9.8910.99.889.8510.29.6910.14.4二乙基苯33.330.431.932.831.330.831.83.6结果表明，方法的重复性良好。

2021/3/20353.回收率试验名称回收率％平均％RSD%123456正己烷91.395.489.793.294.896.293.42.7苯104.099.8102.0101.7101.797.12101.02.3甲苯97.399.297.494.194.290.495.43.3二甲苯92.393.992.790.090.186.590.92.9苯乙烯90.591.495.896.193.291.093.02.6二乙基苯85.684.286.182.188.586.585.52.5取已知检测结果的本品约0.2g，精密称定，置10ml顶空瓶中，精密加的对照品溶液与内标溶液1ml，制成所需溶液，测得目标物峰面积与内标物峰面积比值，计算回收率：结果表明，方法的准确性良好。

2021/3/20364.线性关系考察取正己烷、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙基苯及正丙醇对照品，制成6个系列浓度，顶空进样，以各对照品的峰面积与内标物正丙醇峰面积之比F为纵坐标Y，各对照品浓度C为横坐标，分别进行线性回归，得回归方程：名称回归方程r浓度范围/μg•mL-1正己烷Y=1.6357X-0.043310.99930.3048～0.6858苯Y=3.9004X+0.020780.99470.07112～0.1600甲苯Y=3.8555X+0.096270.99590.3359～0.7558二甲苯Y=3.8270X+0.091180.99620.3226～0.7258苯乙稀Y=3.1941X+0.30910.99580.3517～0.7913二乙基苯Y=4.4081X+0.20770.99280.3234～0.7276注：二甲苯、二乙基苯为邻、间、对3峰，以峰面积和计算。2021/3/20375.稳定性试验取对照品溶液，每隔一段时间进样，计算内标物峰面积与各对照品峰面积的比值和RSD。

结果表明，对照品溶液7小时内性质稳定。

名称内标峰面积/对照品峰面积的比值平均RSD%0h2h3h5h7h正己烷2.66502.82712.58992.80982.75932.73023.7苯2.94933.04822.81472.92402.83962.91523.2甲苯0.59050.59220.55670.57000.56090.57402.9二甲苯0.63000.64080.59420.60840.59940.61453.3苯乙烯0.62460.62920.59550.60110.59720.60952.6二乙基苯0.51360.52380.52230.52360.53510.52371.52021/3/2038总的验证结论:

以上各项验证表明,所建立的成套试验条件合适,新方法──顶空进样法成立。成功2021/3/2039检验流程图结束报告仪器清洗顶空进样检测气液平衡气相仪运行顶空装置运行对照品供试品开始2021/3/2040实施五：方法的培训、考核和实际应用我们对检验员工进行了培训考核，使检验员工掌握了原理、操作方法并能实际操作。培训内容培训要求培训人员日期授课人考核顶空气相法的原理了解气相色谱仪的结构张进韩磊胡浩然姚伟臧晓红段小寒刘德兰蒋雪兰2.14李雪兰提问考试顶空气相色谱仪的结构、原理掌握顶空气相法的原理2.18李雪兰药品标准分析方法验证指导原则了解方法学验证基础知识2.22李明大孔吸附树脂分离纯化中药提取液的技术要求熟悉大孔吸附树脂应用及其技术要求2.28马军大孔吸附树脂裂解产物检测的操作方法掌握方法，能实际操做3.10赵沈娟操作2021/3/2041第六部分

效果验证

巩固措施

2021/3/2042

（一）效果检查

为验证实施效果，我们随机抽取不同批号样品,分别测定10批样品的裂解产物量，结果正己烷、苯、二甲苯均未检出，其余裂解产物测得量如下：

效果检查柱型图2021/3/2043

实施效果一我们本次QC活动的成果已经得到国家药典委员会的认可，且已列入国家药品标准提高行动计划中，脉络通颗粒将收载入2010版《中国药典》一部中，目前我部已经将起草后的标准送交江苏省药检所复核。2021/3/2044

实施效果二序号

项目（平均素质）活动前活动后1运用工具能力572创新意识363质量意识584解决问题能力475分析问题能力276团体协作精神38

此次QC活动的开展充分调动了每个成员的积极性和主动性,增强了全面质量管理意识和团队协作精神,培养了发现问题、分析问题和解决问题的能力,在提高思维能力的同时也开拓了