实验二 细菌的染色实验

实验二细菌的染色实验第1页，共14页，2023年，2月20日，星期六微生物染色的基本知识一微生物染色的意义1进行微生物研究的基本技术;2微生物形态特征观察的基本方法;3不同形态微生物鉴别的基本技能。二微生物染色的染料①碱性染料（basicdye）—电离后为带正电荷的阳离子，可与细胞中带负电的组分结合。如Crystalviolet,Safranin,Methyleneblue，malachitegreen等。②酸性染料（Aciddye）—电离后为带负电荷的阴离子，可与细胞中带正电的组分结合。如Eosin,Congored,Acidfuchsin等。③脂溶性染料—如Sudanblack。第2页，共14页，2023年，2月20日，星期六细菌染色的方法第3页，共14页，2023年，2月20日，星期六实验五细菌的简单染色法一目的与要求1掌握细菌的简单染色法2初步认识细菌的形态3巩固油镜的使用方法二基本原理碱性染料电离后带正电能与带负电荷的细菌结合合,使其着色。三主要器材1枯草芽胞杆菌(12~18h培养物)2吕氏碱性美兰染色液

3仪器与用具(略)染色方法

见下图

第4页，共14页，2023年，2月20日，星期六涂片干燥固定染色2min水洗、吸干镜检实验五细菌简单染色的操作步骤沾取菌样第5页，共14页，2023年，2月20日，星期六五染色结果

六注意事项1菌龄合适。2注意涂片均匀，不宜过厚。枯草芽胞杆菌示意图第6页，共14页，2023年，2月20日，星期六实验六细菌的革兰氏染色法一目的与要求1掌握细菌的革兰氏染色法2了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性二基本原理革兰氏染色法基本步骤：涂片固定结晶紫初染色碘液媒染

乙醇脱色番红复染革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性(G-)表现出不同染色反应的根本原因在于它们的细胞壁结构存在差异。革兰氏阳性菌：紫色革兰氏阴性菌：红色第7页，共14页，2023年，2月20日，星期六StructureofaGram-PositiveCellWall

StructureofaGram-NegativeCellWall革兰氏阳性、阴性菌细胞壁结构的差异第8页，共14页，2023年，2月20日，星期六实验六细菌的革兰氏染色法三主要器材1金黄色葡萄球、大肠杆菌(约24培养物)2结晶紫、番红染色液

染色方法

结晶紫初染2min碘液媒染1min乙醇脱色30sec番红复染2min涂片固定涂片制作水洗水洗水洗第9页，共14页，2023年，2月20日，星期六五染色结果

革兰氏阳性菌——紫色革兰氏阴性菌——红色六注意事项1菌龄合适。2注意涂片均匀，不宜过厚。3注意控制好脱色程度。第10页，共14页，2023年，2月20日，星期六实验七细菌的芽胞染色法一目的与要求

1掌握细菌芽孢染色的方法及原理2初步了解芽孢杆菌的形态特征二基本原理

芽胞的简介；芽孢染色的原理；三主要器材

1枯草芽胞杆菌(约2d的培养物)25%孔雀绿、0.5%番红染色液四实验操作步骤（改良的Schaeffer-Fulton染色法)1菌液制备：取2滴生理盐水或蒸馏水于EP管中，沾取菌苔2环在水中混匀。2染色：EP管中加入5%孔雀绿3滴混匀，将在沸水浴中加热15~20min。3涂片固定：过火焰固定。4脱色：水洗至无绿色。5复染：0.5%番红染色3min。6镜检：油镜观察，绘出显微镜下观察到的结果。

第11页，共14页，2023年，2月20日，星期六五染色结果

六注意事项1注意掌握供试验菌种的培养时间。2制备菌液时，取菌量适宜。兰绿色部分为芽胞；红色部分为菌体和孢囊第12页，共14页，2023年，2月20日，星期六实验八细菌的荚膜染色法一目的与要求

掌握细菌荚膜染色的方法及原理二基本原理荚膜不易着色，且易被水洗，采用衬托染色使菌体和前景着色，荚膜在菌体周围形成一透明圈。三主要器材

1胶质芽胞杆菌（Bacillusmucilaginosus，俗称“钾细菌”）无氮培养基约2d的培养物。2绘图墨水（用滤纸过滤后的绘图墨水稀释1倍使用）。四实验操作步骤（湿墨水法)1制菌液：加1滴墨水于洁净的载玻片上，挑少量菌体与其充分混合均匀。2加盖玻片：放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向下轻压，吸去多余的菌液。3镜检：先用低倍镜、再用高倍镜观察。结果：背景灰色，菌体较暗，在其周围呈现一明亮的透明圈即为荚膜。第13页，共