人工授精医学知识培训专家讲座

人工授精技术

ArtificialInsemination韩从辉徐州市中心医院生殖医学中心东南大学徐州生殖医学研究所人工授精医学知识培训第1页人类辅助生殖技术分类近30年来辅助生殖技术发展快速，极大造福人类人类辅助生殖技术(ART)，是指利用当代医学最新结果用人工伎俩代替自然生殖过程一部分或者全部技术无性生殖（克隆）有性生殖

人工授精体外受精代孕母亲夫精人工授精他精人工授精辅助生殖技术IVF/ICIS人工授精医学知识培训第2页人工授精定义人工授精（artificialinsemination）是指经过非性交方法将精子置入女性生殖道或子宫内，使精子与卵子结合到达受精目标一个医学助孕技术。是应用最早和最基础人类辅助生殖技术人工授精医学知识培训第3页人工授精分类人工授精技术依据所使用精子起源分为两大类:夫精人工授精（artificialinseminationwithhusband`ssperm，AIH

）

：使用患者丈夫精液进行人工授精供精人工授精（artificialinseminationwithdonor`ssperm，AID）

：使用志愿供者精子进行人工授精人工授精医学知识培训第4页AIH适应症男方因少精（<20×106/ml）、弱精、精液液化异常、性功效障碍（阳萎、早泄）、生殖器畸形、逆行性射精等原因引发不育。女方因宫颈黏液分泌异常、严重宫颈炎、宫颈糜烂、阴道痉挛、生殖道畸形以及心理原因造成性交不能等不育。部分免疫性不育。精液量过少或者过多，少于1ml或大于8ml。原因不明不育（10%左右）。人工授精医学知识培训第5页AIH禁忌证输卵管双侧梗阻男女任何一方患有生殖泌尿系统急性感染或性传输疾病男女任何一方患有严重遗传、躯体疾病或精神心理疾病（尤其是女方）男女任何一方接触致畸量射线毒物药品并处于作用期男女任何一方有吸毒等不良癖好人工授精医学知识培训第6页AID适应证不可逆无精子症（比以往条件要严格，以往严重少精症、弱精症和畸精症、输精管复通失败也是适应症）男方和/或家族患有不宜生育严重遗传性疾病母儿血型不合不能得到存活新生儿人工授精医学知识培训第7页AID禁忌证输卵管双侧梗阻男女双方任何一方患有生殖泌尿系统急性感染或性传输疾病男女任何一方患有严重遗传、躯体疾病或精神心理疾病（尤其是女方）男女任何一方女方接触致畸量射线毒物药品并处于作用期男女任何一方女方有吸毒等不良癖好人工授精医学知识培训第8页人工授精术前准备工作1.准备生育证实：准生证、身份证、结婚证，计划内二胎必须是当地政府颁发正式文件，我中心当前由韩淑君负责检验证件，准生证使用期为1年，三证合格后才能进入下一步2.筛选患者：体格检验排除无法耐受促排卵及妊娠内、外科疾病，明确不孕原因，除外禁忌症。男病人筛选：韩从辉负责女病人筛选：王一波负责

人工授精医学知识培训第9页3.签署知情同意书：介绍治疗过程、成功可能性（目

前成功率15%左右）、可能并发症及治疗方法

（OHSS等）、治疗费用等，签署相关知情同意书。我中心当前需要签署知情同意书超促排卵知情同意书人工授精知情同意书多胎妊娠减胎知情同意书人工授精随访知情同意书精子冷冻保留和复苏知情同意书人工授精医学知识培训第10页4.常规试验室检验男女双方肝功、肝炎四对、爱滋、梅毒、血型、尿常规检验、血细胞分析（必做）女方精子抗体、内膜抗体、磷脂抗体、优生四项白带常规、细胞涂片、生殖道病原体（必做）生殖内分泌男方精液常规及精子运动轨迹分析（必做）人工授精医学知识培训第11页5.其它检验子宫输卵管碘油造影检验超声排卵检测胸片、心电图家系中有遗传病患者，必要时一方或双方染色体检验（需要提前两个月预约）人工授精医学知识培训第12页6.女方准备:药品促排卵和监测卵泡发育人工授精能够在自然周期或药品促排卵周期进行，大多数助孕中在实施人工授精前均采取人工促排卵技术，方便能更加好促使卵泡发育与成熟，确保子宫内膜与成熟卵泡发育同时性，改进黄体功效，克服排卵障碍，人为控制排卵时间，从而到达提升受精成功率。因为促排卵后多胎妊娠百分比显著上升，所以应严格掌握促排卵指征和促排卵药品品种、剂量，控制好卵泡发育个数，尽可能防止多胎妊娠。一旦发生多胎妊娠，及时实施选择性减胎术治疗。人工授精医学知识培训第13页惯用促排卵方案CC+HCGCC＋HMG+HCGHMG+HCGFSH+HCG人工授精医学知识培训第14页1、CC+HCG：于月经周期第5-9天口服克罗米酚（CC），每日一次，每次50-100mg，接着口服小剂量雌激素，己烯雌酚0.25mg/d或补佳乐0.5mg/d，连用7-15天。自月经周期第11天起开始B超监测卵泡发育，主导卵泡直径到达18mm以上时，子宫内膜厚度到达10mm，肌肉注射HCG5000-10000IU。人工授精医学知识培训第15页2、CC+HMG+HCG：

于月经周期第3-7天口服克罗米酚（CC），每日一次，每次50-100mg，月经周期第8、第10天每日注射HMG75-150IU，自月经周期第11天起开始B超监测卵泡发育，依据卵泡发育情况，隔日注射HMG75-150IU，主导卵泡直径到达18mm以上时，子宫内膜厚度到达10mm，肌肉注射HCG5000-10000IU。人工授精医学知识培训第16页3、HMG+HCG：于月经周期第5天开始用药，起始剂量依据卵巢功效而定（预先做克罗米芬或HMG刺激试验），普通天天75~150IU，至月经第10~11天开始观察卵泡发育和子宫内膜增加情况。视卵泡和子宫内膜生长程度决定用药剂量，普通能够75~300IU/日。隔天做B超监测卵泡和子宫内膜发育，调整用药剂量，直至最大卵泡直径到达18mm以上，子宫内膜厚度到达10mm，一次肌肉注射5000~10000IUHCG。人工授精医学知识培训第17页4、FSH+HCG

于月经周期第5天开始用药，起始剂量普通150~300IU/日，月经第10天阴超观察卵泡发育和子宫内膜增加情况。依据卵泡和子宫内膜生长程度及血E2浓度调整用药剂量，隔天做B超监测卵泡和子宫内膜发育，测血E2浓度，直至主卵泡直径到达18mm以上，内膜厚度到达10mm，血E2浓度到达1500~2500IU/L，一次肌肉注射5000~10000IUHCG。这种使用方法主要是针对卵巢功效较差者，如：多囊卵巢综合征（PCOS）患者，这些病人血LH水平较高，应用HMG促排卵轻易引发刺激过分（因为HMG中含有75IUFSH和75IULH），所以单独应用FSH效果更加好些。人工授精医学知识培训第18页卵泡发育监测超声卵泡监测激素测定：E2和LH分泌峰检测宫颈评分：出现羊齿状结晶，综合评分在9分以上子宫内膜监测：

A、B型子宫内膜，厚度在8mm以上时，妊娠率相对较高人工授精医学知识培训第19页1、超声卵泡监测：进入监测期间后能够隔天或天天进行B超监测。卵泡成熟征象：卵泡直径18mm，部分卵泡内壁可见半月形突起，称为“卵丘征”。排卵征象：成熟卵泡消失或显著缩小或形状不规则、内部结构含糊，有时子宫直肠凹内可见游离液体。人工授精医学知识培训第20页

2、激素测定：

（1）E2：卵泡发育过程中主要分泌雌二醇，循环中95%E2来自优势卵泡，排卵前24-36小时E2到达高峰，排卵后循环中E2快速下降，3天时间降到最低值，约为峰值50%，排卵后一周左右黄体形成，E2再度升高形成第二峰。LH峰之前每个直径17mm以上卵泡E2水平平均250-500pg/ml。人工授精医学知识培训第21页

（2）LH测定：卵泡成熟，E2到达高峰诱导LH峰出现，LH峰引发排卵。血LH峰起始在排卵前32小时、顶峰在排卵前16.5小时出现，尿LH峰比血LH峰晚出现6-7小时，与血LH水平有很好相关性且尿LH检测快捷方便。在卵泡近成熟时，每隔4-6小时测定一次，排卵普通在尿LH峰出现14-28小时内发生。人工授精医学知识培训第22页

3、宫颈评分：宫颈及分泌黏液随E2水平改变展现周期性改变。伴随卵泡发育，体内E2分泌增加，分泌黏液量增多，清澈透明象蛋清样，宫颈口松弛张开，拉丝度增加，出现羊齿状结晶。排卵后受孕激素作用，黏液分泌量降低，变为浓稠，形成黏液栓，宫颈口闭合。综合评分在9分以上，表明反应良好。人工授精医学知识培训第23页4、子宫内膜监测：A型子宫内膜：呈三线状，在子宫纵切面能够看到三条线形强回声。B型子宫内膜：内膜与周围肌层等回声，中线回声可见但不强。C型子宫内膜：内膜与周围肌层相比较呈均匀强回声。A、B型子宫内膜，厚度在8mm以上时，妊娠率相对较高。人工授精医学知识培训第24页当前我中心主要采取阴道内超声检验方法来监测排卵(包含卵泡大小和子宫内膜厚度/分型),必要时结合性激素测定(LH/E2)和宫颈黏液评分当前我中心配有专职超声检验人员,鹿小云医师负责超声检验工作，含有10年超声检验工作经历，并在卫生部指定生殖中心进行过3个月正规化培训，人工授精医学知识培训第25页人工授精时机当主导卵泡直径达18至20mm时；血E2水平大于300pg/ml；宫颈粘液＋＋＋～＋＋＋＋及经典羊齿状结晶；血或尿LH水平开始上升大于基础值2倍以上肌肉注射绒促10000u，因为卵子排放大约在HCG注射后34~36小时。确定24～36小时后行IUI人工授精医学知识培训第26页人工授精精液标本处理精液采集

采集精液前应禁欲3-5天，手淫法采集标本到无细胞毒性无菌容器中，要标明姓名、日期和采集时间。标本采集要完整，部分前列腺炎症或白细胞精子症患者可采取分段法采集。精液标本采集后置于25-35ºC环境中，待其液化后进行处理，处理前放置时间应不超出一个小时。人工授精医学知识培训第27页精液常规检验

正常精液标准（WHO1994年）：（1）2ml或更多；（2）pH7.2-8.0；（3）密度20106/ml或更多；（4）射精后一小时内V级活动精子25%以上或~V级活动精子50%以上；（5）正常形态精子不低于30%；（6）活精子75%以上；（7）白细胞<1106/ml。人工授精医学知识培训第28页人工授精处理前精液标准：精子密度10×106以上A+B<50%不过>25%畸形精子数量<70%白细胞<1106/ml，每个视野小于20个/20倍人工授精医学知识培训第29页人工授精精液处理惯用试剂人工合成血清代用具或胎儿灭活血清.精子培养液:胎儿灭活血清或10%白蛋白配成。当前我们惯用是COOK企业精子培养液和密度梯度离心液人工授精医学知识培训第30页授精用精子制备

1、上游法：原理:利用活动精子自主泳动能力，会从试管底部向上游动，靠近培养液液面层。而活动力差精子、死精子、凝集精子以及其它细胞成份则留在试管底部。经过吸收试管液面层培养液，就可搜集到活力很好精子，到达优选精子目标。上游法能够搜集到更多活力很好、形态正常精子，此方法适合用于正常精液标本，精子回收率较高，回收精子中活动精子可在90%以上。对于少、弱精症效果较差。人工授精医学知识培训第31页

2、密度梯度离心法原理:将培养液液配成由低到高不一样浓度梯度层，把液化精液置于最上层。离心后，依据精子质量不一样以及其它成份比重不一样，进入到不一样浓度层。只有活动力高精子能够逆行穿越密度梯度抵达分离液底层，由此可募集得到活动力高精子。活力差精子进入到低密度层，而白细胞及其它一些细胞进入到与精液相交界层内。用这种方法可将质量好精子分离出来。该方法优点是精子得率高、能分清其它细胞及杂质、染色质损伤小。另外，经过多层密度梯度离心还有可能分离出各种病原体。尤其对精液十分粘稠和少、弱精患者标本有很好分离效果。人工授精医学知识培训第32页人工授精处理后精液标准抽吸分离处理完成试管底部精液0.5毫升，混匀后取10ul样本，涂片并计数，其前向运动精子总数不得低于10×106。即可用于行宫腔内人工授精。假如最终止果低于该数值，应该马上向负责行IUI临床医生汇报，进行和病人沟通，同时征求病人意见

人工授精医学知识培训第33页逆行性射精精液处理1.碱化尿液在取精前二天，天天喝1.5升4~5%NaHCO3溶液，取精前1小时再喝200ml，5%左右NaHCO3溶液。然后，排去小便，夫妇同房或手淫，10分钟后搜集小便。2.处理尿液将取出尿液马上1200转/分钟，10分钟，弃去上清液，在沉淀物中加入精液洗涤液洗涤。最终加入0.8~1mlEarl`s精子培养液，混匀，放进37℃、含5%浓度CO2培养箱内上游20~30分钟，即刻授精。人工授精医学知识培训第34页冷冻精液人工授精操作步骤：将快速复温后液化精液置于锥底试管内，加入Earle精子培养液或其它精子洗涤液1~2ml，1000转/分离心10分钟，轻轻吸去上清液，再加入Earle精子培养液或其它精子培养液1ml，轻轻摇，将试管竖直置于37℃恒温箱内10分钟，吸收上层液体0.5-0.8ml做IUI。注：卫生部“人类精子库管理方法”要求禁止使用供者新鲜精液做AID人工授精医学知识培训第35页授精时间普通于肌肉注射10000IUHCG后36~48小时内进行人工授精，因为卵子排放大约在HCG注射后36~40小时。有单位采取二次授精法，即24小时和40小时各