药品微生物限度检验方法标准操作规程

标 准 操 作 规 程标标题：药品微生物限度检验方法标准操作规程生效日期 年月日编号：SOP－QC－028－01新订□编制：修订□部门审核：颁发部门：质量管理部原文件号：QA审核：批准：目的：建立一个药品微生物限度检验标准操作规程。适用于本企业生产的所有品种，本企业所有洁净生产洁净工作室等。QC规程：000年版。种检查方法QC无菌操作室的管理及使用制度见本文附录一。2）的3破裂的包装不得作为样品，凡已能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）长霉、虫蛀及变质的药品，可直接判为不合格，无需要再抽样检验。供试品的保存：供试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，以防供试品中的污染禁开启，包装已开启的样品不得作为供试品。检查：波长。均匀状态取样。制成供试液后，应6标准操作规程标标题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号.3℃，霉菌、酵母菌培养温度为1ml或为单位。.复检菌数测定不合格者应复检，控制菌检查以一次检出为准，不再复试，但应保留检出菌株一个月备查。测定次。复试报告，以3次测定结果的算术平均值报告。.检验报告1ml或为单位。测定菌数报告，以每次测定结果全部平均值报告。控制菌按检验结果报告，如未检出控制菌时，报告为“按规定抽样检验结果未检出XX出XX菌，不符合药品微生物限度标.培养基、试药及稀释剂的相关内容见本文件附录三。供试品的取样及注意事项抽取两瓶或两盒以上的包装单位，检验时每次应分10g或。供试品在检验前微生物再繁殖，以免影响检验结果，凡已将原包装启开，则无代表性应另取样。供试品稀释后须品应作特殊处理后进行检验。液体供试品：取供试90ml适量聚ft10g或10ml标准操作规程标标题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号作为供试液（固体、半固体或黏稠液供试品：称取供100ml中，用ft并适当加温，但不应超非水溶性供试品加入含溶化的无菌司803、聚ft801080m2。肠溶胶囊（片）1，置含无菌磷酸盐缓冲液00m含抑菌成分的供试品照《中国药00供试液。.对照用菌液000年版附录。20。对照菌的加入量个。菌种短期保存法.检查法检查前的准备：用具的洗涤与灭菌。试管：使用过的试管经消毒后，将培养基倒出，用清洁液洗刷，用纯化水冲洗4－5次，倒立，晾干备用。灭菌前，用棉塞塞上管口，牛皮纸包紧，扎紧。标准操作规程标题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号标题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号菌前，用牛皮纸将钵体和锤包裹。培养皿：使用过的培养皿经消毒后，将培养基倒出，用清洁液洗涮，用水养皿，扎紧。将上述包好的用具，放0min生物限度检查室定点位置，备用。m、l0m至无菌室内3i。操作人员用肥皂洗手75%似者，若经证实为生霉、长螨即可判定为不合格，无须继续检验。细菌、霉菌、酵母菌计数。.检查程序（如下列。.操作步骤供试液制备10制备。稀释及取样1ml吸管110（20供试液1m1cm处，测管壁注入装9ml或1︰10，1︰200）的稀释液。10（20供试液1m2~31ml吸管，按上述操作下一级的稀释与吸取。注皿与干燥标准操作规程标标题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号（图1）10均注入平皿培养基倾注入平皿5ml10基混匀后，置水平台上待凝。培养基凝固后，使平板干燥，减少平板表面的水分，防止菌00计入培养时间。培养：将上

3~42菌落计数：

供试液用肉眼直接计数5~10倍放大镜检查漏。2212计数。

培养标准操作规程菌落计数标 题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号 页次报告平板上有片状菌落或花斑样菌落蔓延生长以及平板受到污染当同一稀释级使22221515~2~2~4~15~16~17~1菌数报告规则间的稀释级之间的稀释级作为菌数计算的依据。若在1数乘以稀释倍数，为报告菌数。若有2值。2时，以两级的菌落数均值为报告菌数；2时，以低稀释级平均平板菌落乘以稀释倍数为报告菌数。若有32算级间比值。2时，以两级的菌落数均值为报告菌数；2时，以低稀释平均平板菌落数乘以稀释倍数为报告菌数00释倍数为报告菌数，或适当增中稀释数，重作测定后报告结果。0~300030300的稀释级平均平板菌落数乘以稀释倍数为报告菌数。0小时数为报告菌数，但若用原液为供试液10稀释级与原液的平均平板菌落数相等或大于时，应以培养基稀释法测定。标准操作规程标标题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号培养基稀释法：取供试液（1100供试液31m5个平皿内（2m5m3组数据，稀释级平均菌落数小110原液供试品稀释倍数原液供试品稀释倍数—1-113651-2 1-3164 20值—菌落数16400报告数书写113或16000—27602954637750313或38000—28902716027100213或27000—2392023527600213或28000—23619642—19600213或20000—不可计4650513—51300513或51000—不可计30512—30500313或30000—241912—240211或240277——270211或270—0600—6<10注：100个以内时，按实测数书写报告。1000空白对照平板有菌生长，表明培养基已被污染；10同一稀释级的两个平板上生长的菌落数菌落蔓延生覆盖整个平板无法计数；出现以上情况，该次实验数据不得计数报告。大肠杆菌检查法；标准操作规程标标题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号检验程序（见附页）.操作步骤标准操作规程标标题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号取胆盐乳糖培养3100个作阳性对照318~24（4835mlMUG培养基管内培养524MUG365n紫外光下观察UGMUG管呈现荧光，MUGMUGMUG呈试剂本色为阴性。无菌生长，判未检出大肠杆菌。供MG阳性，靛基质阳性，判断检出大肠杆MG阴性，靛基质阴性，判未检出大肠杆菌。如MUG阳性、靛基质阴性，MUG培养基培养物划线于曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂18~2上述供试液培养物的分离平板无菌落生2~3V~枸橼酸盐利用试验）及革兰染色、镜检，按下表规定判断结果。＋＋曙红亚甲蓝琼脂IMVic结果检出大肠杆菌－＋－－无菌生长未检出大肠杆菌未检出大肠杆菌＋－有菌生长－＋―①检出大肠杆③－＋有菌生长＋＋―②检出大肠杆③注：①、②如①出作试验；③为革兰氏阴性杆菌。宝靛基质试养24阴性。甲基红试验培养48色为阳性，呈黄色为阴性。标准操作规程标标题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号~:取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡2ml14枸橼酸盐得用试斜面上，一般培养48~7时为阳性，培养基颜色无改变为阴性。革兰氏染色法、镜检：，与80ml混匀静置48h后，加蒸馏水稀释（蕃红）染液：将沙黄10ml2~3次以固定涂片。滴加结晶紫梁液，染色数分钟，水洗，滴加磺液媒染1秒，水洗，吸干，滴加沙黄复染液1阴性菌呈红色。活螨检查法：笔、载玻片、盖玻片、酒精灯、培养皿或小搪瓷盘（内衬油水。mm以下，一般呈卵圆形或椭圆表、无头胸、由25呈爪或钳状目及彼此长短比例和排列位置因种类而异。螨类与蜘蛛、昆虫（见下表：标准操作规程特征分类成螨（如腐食醋螨）蜘形纲、蜱螨目蜘蛛蛛形纲、蜘蛛目昆虫（如书虱）昆虫纲、啮虫目足443触角无无1体段头、胸、腹无界限头、胸、腹无界限头、胸、腹无界限标题标题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号直检法：取供试品先用肉眼观察，有无疑似活螨的白点或其它颜色的点状物5，再用滴一滴甘油水的载玻片上，置显微镜下观察。10和食盐水至瓶口处（的显微镜下检查。普法玻璃漏斗里的灯泡，6cm装半杯甘油水，放在漏壮举的下口处，收集爬出来的活螨。活螨卵的检验方法：倍入大镜或显微意检查活螨卵。3~8液中孵出幼螨，则判断为检出活螨卵。标准操作规程标标题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号供试品检验报告在供试品中未检出活螨，但检出活螨卵时，可按检出活螨处理。滴有17当处理。发线针的制作10cm的小金属棒一根度的一半紧贴在金属棒的一端，用细棉线将其缠紧，然后粘上加拿大树脂或油漆，晾干，即得。内包装材料中不易溶解的V，铝箔等，取100c100ml无菌生理盐水，浸泡后振摇，制得供试品溶液，照上述方法检验，1c100/10c10/10c及活螨。注：本文含有的附件有：无菌操作室的管理及使用制度、设备、仪器、人员及无菌操作室常用的消毒、灭菌方法、培养基、试药及稀释剂、药品卫生检验记录、附录一：无菌操作室的管理及使用制度拖鞋和消毒用的洗手盆和毛巾等，入室前应严格洗手消毒，穿戴无菌衣帽、口罩、拖鞋。吸管筒、酒精和碘酒棉球等。无菌操作衣帽应经常热压灭菌。打开琼脂平板培养基，放30483个以下。在无菌操作前后作室。冷却后，方可使用或收还，吸取菌液时，严禁直接用口吸。附录二：设备、仪器、人员及无菌操作室常用的消毒、灭菌方法1.常用消毒液的配制g用于擦拭工作台面和手消毒。即得，用于手或地面的消毒。.75%乙醇棉球配制：取95%的乙醇原液78ml加水22ml混匀即得，而后将脱脂棉花球泡在内。用于手的消毒。.2100ml952g械的消毒，注意此液要保存于棕色瓶中。2.玻璃器皿的洗涤2小时左右，滤尽酸液，用清水冲洗干净，备用。2出倾出废物，用洗洁精水刷洗，清水冲净，烘干备用。粉水煮沸，洗净，清水冲洗，蒸馏水2遍后，晾干备用。灭菌器具的准备松紧应适度防尘，变硬无弹性时应重新更换。常规消毒灭菌法.将待灭菌器具置干燥箱内，逐步加1162温，方可取出，即可达到完全灭菌的目的。.湿热灭菌法高压蒸汽灭菌是采用高压灭菌同1120b.12230分钟。附录三：培养基、试药及稀释剂培养基.培养基制备注意事项制备培养基时所用的各种玻璃器皿和分装容器、棉塞等，皿。高压灭菌时，应将灭菌锅内的冷空气全部排除后，锅内培养基达到100℃闭蒸汽阀，否则温度不足，则灭菌不彻底。pHpHpHNaOHH可比最终要求的约高左右，灭菌后基本合适。3蒸馏水，加热溶解，分装，116℃20（蒸馏水，加热溶解，分装，116℃（数）.胆盐乳糖培养基Bac，116℃0（用于大肠杆菌检查）装，116℃20（用于大肠杆菌检查）.－甲基伞形酮葡萄培养蒸馏水，分装，115℃0（用于大肠杆菌检查）.M：取营养琼脂培养100m60℃m205ml及亚甲蓝指示液－，摇匀，倾注平皿即）、水调节pH）、磷酸氢二钾、葡萄、水混合，微温使溶解，调pH，121℃，即得。.枸橼酸盐培养基5（无水211000mpH值使灭菌后为±15-202m）注：培养基(生物试剂)中国药品生物制品检定所生产。试液取供制备培养基用。.无菌对氨基苯甲酸试液取对氯基苯甲酸，加入10ml水的具塞试管中，121℃0供磺胺类药物检验用。.氢氧化钾试液供作.a－萘酚乙醇溶液取供作.靛基质试液稀释剂20灭菌20指示液得。mol/L～（）1药品卫生检验记录标准号：方法号：编号：R-QC-037-01检验号：品名代 号规格数 量批号送检单位检验日期年月日 报告日期年 月日检验依据紫外消毒时间时 分至 时分细菌总数： 取样量：取样品10g加入100ml稀释液中，每一浓度吸10ml名称 营养琼脂培养基培养基 培养温度 30~35℃培养时批号

48h+2h稀释倍数碟号1碟号2平均菌落数

10-1

10-2 10-3

判定总数：霉菌总： 取样量：取样品10g加入100ml稀释液中，每一浓度吸1ml。培养基稀释倍数碟号1碟号2平均菌落数

名称批号10-1

虎红琼脂培养基10-2

10-3

培养温度25~28℃培养时间阴性对照