马铃薯种薯的茎尖脱毒培养技术

作物生产技术专业/教学资源库任务二马铃薯种薯的茎尖脱毒培养技术1．材料的选择选择具有该品种典型特性、生长健壮的单株（或无性系），结合产量情况，选择高产、大薯率高、无病斑的单株作为茎尖脱毒的基础材料，以提高脱毒效果。作物生产技术专业/教学资源库马铃薯种薯2．热处理

材料的热处理，以钝化病毒的活性，消除马铃薯卷叶病毒，提高脱毒效果。把入选的马铃薯块茎进行打破休眠和催芽处理，当薯块顶芽生长至1厘米后，转入光照培养箱内，以每天12小时光照，照度3000LX，37℃的高温处理6-8周。热处理脱毒主要是利用病毒受热的不稳定性而失去其活性达到脱病毒目的。一般采用35—55℃的热水或高温蒸汽、高温空气处理，温度越高处理的时间越短。通常是将热处理中伸长生长出的新梢顶端部分嫩枝嫁接到无病毒砧木上，或进行进一步的茎尖培养，或茎尖微芽嫁接以增大脱去病毒的机率。

茎尖脱毒是利用植物茎尖组织培养，结合血清病毒检测技术，在防蚜传毒条件下，将影响植物正常生长的植物病毒脱除的高新农业生物技术。

作物生产技术专业/教学资源库3．取材和消毒

剪取经过热处理后发芽块茎上2－3厘米长的芽若干个，用软毛刷轻轻逐个刷洗后放于烧杯中，用纱布封口，放于自来水下冲洗半小时，然后在超净工作台进行严格消毒：先用75%的酒精浸15秒，无菌水冲洗2次；再用0.1%的升汞浸泡8-10分钟（或用5%次氯酸钠浸泡15－20分钟），无菌水冲洗5-8次，每次3-5分钟（用无菌水冲洗过程中要不断的晃动放置材料的容器，以保证漂洗更彻底），冲洗完后放在灭过菌的培养瓶内待用。作物生产技术专业/教学资源库4．剥离茎尖和接种

在超净工作台上，将消毒过的芽置于40X的解剖镜下，一手用一把眼科镊子将芽按住，一手用灭过菌的解剖针将叶片一层一层仔细剥掉，直至露出圆亮的生长点，用锋利的无菌解剖针小心切取0.3毫米以下的带1-2个叶原基的茎尖，随即将茎尖接种于已准备好的马铃薯茎尖培养基上，以切面接触琼脂。

作物生产技术专业/教学资源库5．茎尖培养与病毒检测

5．1

培养基

选择合适的培养基是茎尖培养成功与否的关键，根据我们的经验，以MS+GA30.2毫克/升+6-BA0.5毫克/升+NAA0.05+肌醇100毫克/升+D－泛酸钙0.2毫克/升+食用白糖3%+琼脂0.6%，PH5.8，为比较好的培养基组合。

作物生产技术专业/教学资源库作物生产技术专业/教学资源库5．茎尖培养与病毒检测

5．2

培养5.2.1外植体培养

从已催出芽（芽长一般2—4cm）的干净健康马铃薯块茎上掰下芽，用自来水冲洗干净，放入0.1—0.15%的升汞溶液中浸泡8—10分钟，在超净工作台上消毒完后，放入无菌水中浸泡6次，每次5分钟，然后接种到MS＋6－BA1.5mg/L（毫克/升）＋GA3

0.5mg/L＋IBA0.5mg/L＋琼脂8g/L＋蔗糖30g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种1—5个外植体。作物生产技术专业/教学资源库5．茎尖培养与病毒检测

5．2

培养5.2.2茎尖剥离及初代培养

外植体培养20天后，在超净工作台上解剖镜下用解剖针将生长点0.1——0.5mm部分剥离出来，转接到MS＋肌醇100mg/L+6－BA1.5mg/L＋GA30.5mg/L＋泛酸钙1.5mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂8g/L＋活性炭0.17g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种4—5个生长点。光照保持3000—6000Lux（勒克斯）左右，每天照光13—16小时，温度控制在23℃，经2—6个月左右培养诱导，其间转接2——3次，生长点即可长成新的小植株。作物生产技术专业/教学资源库5．茎尖培养与病毒检测

5．3病毒检测

病毒检测的目的，是鉴定所获得的试管苗