黄曲霉毒素测定法高效液相色谱质谱法

中药制剂分析技术黄曲霉毒素测定法——高效液相色谱-质谱法ShandongCollegeofTraditionalChineseMedicine黄曲霉毒素测定法——高效液相色谱-质谱法一、原理本法系用高效液相色谱-串联质谱法测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总量计）。二、仪器与用具高效液相色谱-串联质谱系统、超纯水处理系统、移液管、容量瓶等。四、操作方法1.色谱、质谱条件与系统适应性试验色谱条件：填充剂——十八烷基硅烷键合硅胶；

流动相A——10mmol/L醋酸铵溶液；

流动相B——甲醇；

柱温25℃；

流速每分钟0.3ml黄曲霉毒素测定法——高效液相色谱-质谱法三、试药与试液10mmol/L醋酸铵溶液、甲醇（色谱纯）、高纯水、黄曲霉毒素混合对照液等。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0〜4.565→1535→854.5〜615→085→1006〜6.50→65100→356.5〜106535黄曲霉毒素测定法——高效液相色谱-质谱法表

梯度洗脱的时间及流动相的比例质谱条件：以三重四极杆串联质谱仪检测；电喷雾离子源（ESI），采集模式：正离子模式编号中文名英文名母离子子离子CE(V)1黄曲霉毒素G2AflatoxinG2313.1313.133331.1245.1402黄曲霉毒素G1AflatoxinG1329.1243.135329.1311.1303黄曲霉毒素B2AflatoxinB2315.1259.135315.1287.1404黄曲霉毒素B1AflatoxinB1313.1241.150313.1285.140黄曲霉毒素测定法——高效液相色谱-质谱法各化合物监测离子对和碰撞电压（CE）参考值2.系列混合对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的标示浓度分别为1.0µg/ml、3µg/ml、1.0µg/ml、0.3µg/ml）适量，用70%甲醇稀释成含黄曲霉毒素B2、G2浓度为0.04〜3ng/ml，含黄曲霉毒素B1、G1浓度为0.12〜10ng/ml的系列对照品溶液，即得（必要时可根据样品实际情况，制备系列基质对照品溶液）。黄曲霉毒素测定法——高效液相色谱-质谱法3.供试品溶液的制备供试品粉末15g加氢氧化钠3g75ml供试品甲醇溶液70%甲醇11000转/min搅拌2min2500转/min离心5min取上清15mL置50ml量瓶中水稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过取续滤液20ml通过免疫结合柱20ml水洗脱，3ml/min，弃洗脱液，再用适量甲醇洗脱收集洗脱液，置2ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度摇匀，即得供试品黄曲霉毒素测定法——高效液相色谱-质谱法4.测定法精密吸取上述系列对照品溶液各5µl，注入高效液相色谱-质谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液5µl，注入高效液相色谱-串联质谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的浓度，计算，即得。黄曲霉毒素测定法——高效液相色谱-质谱法五、注意事项本实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器（装有10%次氯酸钠溶液）内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。黄曲霉毒素测定法——高效液相色谱-质谱法六、应用实例柏子仁中黄曲霉毒素的测定采用2015年版《中国药典》四部通则黄曲霉毒素检查法（通则2351）测定第二法测定柏子仁中黄曲霉毒素的含量，规定柏子仁每1000g含黄曲霉毒素不得过5µg，黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素B1总量不得过10µg。黄曲霉毒素测定法——高效液相色谱-质谱法