药用仪器分析技术PPT完整全套教学课件

01模块1药物常用电分析技术02模块2药物常用光分析技术03模块3常用色谱技术04模块4综合实训药用仪器分析技术模块一药物常用电分析技术项目一常用注射液pH测定项目二亮氨酸含量测定项目三盐酸普鲁卡因含量测定项目一常用注射液pH测定01任务一pHS-25型pH计介绍02任务二pH计工作原理03任务三倍他米松磷酸钠、盐酸苯海拉明注射液pH检查04任务四检测报告能够熟练使用和维护pH计，能正确记录分析结果并能给出正确的药物检测报告。能力目标知识目标掌握用pH计测定溶液pH的原理，掌握pH计的操作方法和注意事项。任务一pHS-25型pH计介绍pHS-25型pH计是一种常用的数字显示pH计（如右图），可同时显示pH、温度值，也可以同时显示电位(mV)、温度值，适用于测定水溶液的pH。生存者现状任务一pHS-25型pH计介绍一、仪器结构1.温度补偿调节旋钮2.斜率补偿调节旋钮3.定位调节旋钮4.选择开关旋钮(pH、mV)5.电极梗插座6.电极梗7.测量电极插座8.参比电极接口9.保险盒10.电源插座11.电源开关12.电极夹13.电极任务一pHS-25型pH计介绍二、pHS-25型pH计标准操作规程熟悉pH计操作规程，填写操作规程表药物检测过程中，学生（或质管部QC检验人员）必须按照规范的pHS25型酸度计操作规程进行操作，填写操作规程表（表1-1）。任务一pHS-25型pH计介绍二、pHS-25型pH计标准操作规程操作规程开机前准备开机定位测量pH结束工作专家提醒1.经定位后，定位调节旋钮及斜率调节旋钮不应再有变动。2.定位的缓冲溶液应接近被测溶液pH的缓冲液，如被测溶液为酸性时，定位缓冲溶液应选pH=4的苯二酸盐标准缓冲液；如被测溶液为碱性时，则定位缓冲溶液应选pH=9的硼砂标准缓冲液。3.一般情况下，在24个小时内仪器不需再定位。任务二pH计工作原理运用pH计测量溶液pH属于直接电位法，以待测试液作为化学电池的电解质溶液，并于其中浸入两个电极，其中一个是指示电极，另一个是参比电极，用pH计在零电流条件下，测定这个电池的电动势，再根据其电极电位与待测物质的活（浓）度间的函数关系计算出待测物质的含量。pH计通常以玻璃电极为指示电极（∮玻璃＝K－0.059pH），以饱和的甘汞电极（∮甘汞）为参比电极，组成电池。其中玻璃电极为负极；饱和甘汞电极为正极。任务二pH计工作原理每支玻璃电极的K′均不同，并且每一支玻璃电极的不对称电位也不同，因此导致公式中常数K′值很难确定。在具体测定时常采用两次测量法消除其影响，其方法为：用同一支玻璃电极，先测量已知pH(pHs)的标准溶液的电池电动势为Es，然后再测量未知pH(pHx)的待测溶液的电池电动势为Ex。在25℃时，两次测定中，电池电动势与pH之间的关系满足下式：两式相减，即可计算出待测溶液的pH：任务三倍他米松磷酸钠、盐酸苯海拉明注射液pH检查一、仪器与试剂准备【仪器】pHS-25型pH计，50ml烧杯5只【试剂】标准缓冲溶液，倍他米松磷酸钠注射液，盐酸苯海拉明注射液，去离子水二、标准缓冲溶液配制任务三倍他米松磷酸钠、盐酸苯海拉明注射液pH检查苯二钾酸盐标准缓冲液精密称取在115℃±5℃干燥2~3h的邻苯二甲酸氢钾10.21g，加水使溶解并稀释至1000ml。磷酸盐标准缓冲液精密称取在115℃±5℃干燥2~3h的无水磷酸氢二钠3.55g与磷酸二氢钾3.40g，加水使溶解并稀释至1000ml。硼砂标准缓冲液精密称取硼砂3.81g（注意避免风化），加水使溶解并稀释至1000ml，置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免空气中二氧化碳进入。任务三倍他米松磷酸钠、盐酸苯海拉明注射液pH检查二、标准缓冲溶液配制任务三倍他米松磷酸钠、盐酸苯海拉明注射液pH检查三、倍他米松磷酸钠注射液pH检查3.测定用磷酸盐标准缓冲液和硼砂标准缓冲液进行校准定位。2.定位按任务一中“操作规程”，安装pHS25型pH计并接通电源预热。1.pH计准备将电极冲洗干净，用滤纸吸干，插入倍他米松磷酸钠注射液中，轻轻摇动溶液使均匀，均匀后显示的读数即为待测溶液的pH，反复测定两次，取平均值，并记录。任务三倍他米松磷酸钠、盐酸苯海拉明注射液pH检查四、盐酸苯海拉明注射液pH检查02011.定位将电极冲洗干净，用滤纸吸干，插入盐酸苯海拉明注射液中，轻轻摇动溶液使均匀，均匀后显示的读数即为待测溶液的pH，反复测定两次，取平均值，并记录。2.测定用苯二钾酸盐标准缓冲液和磷酸盐标准缓冲液对pH计重新进行校准定位。【案例】用下面电池测量溶液pH：(-)玻璃电极|H+(xmol/L)||SCE(+)用pH＝4.00缓冲溶液，25℃时测得电动势为0.208V。改用未知溶液代替缓冲溶液，测得电动势为0.268V。计算未知溶液pH。解析：答：未知溶液pH为5.02。项目二亮氨酸含量测定01任务一ZD-2型电位滴定仪介绍02任务二电位滴定仪工作原理03任务三亮氨酸含量测定04任务四检测报告能够熟练使用和维护电位滴定仪，能正确记录分析结果，学会滴定终点的判断及数据处理，并能给出正确的药物检测报告。能力目标知识目标掌握电位滴定法确认滴定终点的原理，掌握电位滴定仪的操作方法和注意事项。任务一ZD-2型电位滴定仪介绍ZD-2型电位滴定仪操作简便、外形美观、小巧、轻便，使用精度得到了明显的提高，仪器的指示由原来的表头指示改为0.8英寸数字显示，该仪器是广泛使用的一种理想的容量分析仪器，常用于药物检测。生存者现状任务一ZD-2型电位滴定仪介绍一、仪器结构1.电源指示灯2.滴定指示灯3.终点指示灯4.斜率补偿调节旋钮5.温度补偿调节旋钮6.定位调节旋钮7.“设置”选择开关8.“pH/mV”选择开关9.“功能”选择开关10.“终点电位”调节旋钮11.“预控点”调节旋钮12.“滴定开始”按钮13.电源开关14.保险丝座15.电源插座16.电磁阀接口17.接地接线柱18.电极插口19.记录仪输出任务一ZD-2型电位滴定仪介绍二、ZD-2型自动电位滴定仪操作规程熟悉电位滴定仪操作规程，填写操作规程表药物检测过程中，学生（或质管部QC检验人员）必须按照规范的ZD2型自动电位滴定仪操作规程进行操作，填写操作规程表（表2-1）。任务一ZD-2型电位滴定仪介绍二、ZD-2型自动电位滴定仪操作规程操作规程电位控制滴定pH自动滴定pH控制滴定(恒pH滴定)4电位自动滴定pH定位及测量2mV测量1滴定前的准备工作35678手动滴定任务二电位滴定仪工作原理电位滴定法是在滴定过程中通过测量电位变化以确定滴定终点的方法。容量分析中，如果待测溶液有颜色或浑浊，无法用指示剂指示终点，或某些反应原本就没有合适的指示剂，此时可考虑采用电位滴定法指示终点。进行电位滴定时，在滴定过程中，每加一次滴定剂，测量一次电动势，直到超过化学计量点为止。这样就得到一系列的滴定剂用量V和相应的电动势E数据。任务二电位滴定仪工作原理一、绘EV曲线法以滴定剂体积V为横坐标，电池电动势E为纵坐标作图，得到一条EV曲线，如图所示。此曲线的转折点（拐点）所对应的体积即为化学计量点的体积。此法应用方便，适用于滴定突跃内电动势变化明显的滴定曲线。任务二电位滴定仪工作原理二、绘ΔE/ΔV-V-曲线法又称一次微商曲线。ΔE/ΔV为E的变化值与相对应的加入滴定剂体积的增量之比，用表2-2中ΔE/ΔV值对V-(计算ΔE值时前后两体积的平均值)作图可得到一条峰状曲线，图尖峰所对应的V值即为滴定终点。任务二电位滴定仪工作原理三、绘Δ2E/Δ2V-V曲线法又称二次微商曲线或二阶导数曲线，用Δ2E/Δ2V对滴定剂体积V作图，得到一条具有两个极值的曲线，如图所示。近终点时，曲线上下两点连线为零时所对应的体积，即为化学计量点的体积。任务二电位滴定仪工作原理三、绘Δ2E/Δ2V-V曲线法滴定终点附近的曲线可以近似地看成直线，因此可利用表2-2数据，不用作图法，而用数学内插法予以确定。例如，从表中查得加入25.30ml滴定剂时，Δ2E/ΔV2=4400，加入滴定剂25.40ml时，Δ2E/ΔV2=-5900，设滴定终点（Δ2E/ΔV2=0）时，加入滴定剂xml，可得：解得，x=25.34ml任务二电位滴定仪工作原理选用适当的电极系统，电位滴定法可以作酸碱滴定、氧化还原滴定、配位滴定、沉淀滴定、重氮化滴定等的终点指示。例如：酸碱滴定时使用pH玻璃电极为指示电极；在氧化还原滴定中，可以用铂电极作指示电极；在配位滴定中，若用EDTA作滴定剂，可以用汞电极作指示电极；在沉淀滴定中，若用硝酸银滴定卤素离子，可以用银电极作指示电极。任务三亮氨酸含量测定一、仪器与试剂准备ZD2型自动电位滴定仪，干燥箱，分析天平无水冰醋酸，醋酐，高氯酸（70%～72%），邻苯二甲酸氢钾（AR），结晶紫指示液，亮氨酸粉剂，无水甲醇【仪器】【试剂】任务三亮氨酸含量测定二、标准溶液配制与标定高氯酸标准溶液配制取无水冰醋酸（按含水量计算,每1g水加醋酐5.22ml）750ml，加入高氯酸（70%～72%）8.5ml，摇匀，在室温下缓缓滴加醋酐23ml，边加边摇，加完后再振摇均匀，放冷，加无水冰醋酸适量使成1000ml，摇匀，放置24h。高氯酸标准溶液标定取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.16g，精密称定，加无水冰醋酸20ml使溶解，加结晶紫指示液1滴，用上述高氯酸溶液缓缓滴定至蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出高氯酸溶液的实际浓度。高氯酸滴定液的浓度c（mol/L）按下式计算：专家提醒1.由于冰醋酸随温度升高而膨胀，体积变化较大，当溶液使用时，如与标定温度有差别，则应重新标定或作浓度校正。若温度相差在10℃内，可以根据下式将滴定液的浓度加以校正：式中F0为标定t0时的浓度换算值，t1为滴定时的温度，t0为标定时的温度，0.0011为冰醋酸的膨胀系数。2.若本液在使用时与标定时温度相差在10℃以上或放置在1个月以上，使用时应重新标定。3.如滴定液含有10％～15%的无水丙酸，则在使用时应重新标定。任务三亮氨酸含量测定三、亮氨酸粉剂含量测定取亮氨酸粉剂约0.1g（m试样），精密称定，加无水甲醇1ml溶解后，加冰醋酸25ml，按照电位滴定法操作规程，用高氯酸标准溶液滴定，并将滴定结果用空白试验校正。因为每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于13.12mg的C6H13NO2。亮氨酸粉剂含量可用下式计算：式中，c为高氯酸准确浓度，单位mol/L;V为滴定终点所用高氯酸的体积，单位ml；m试样为亮氨酸粉剂质量，单位mg。项目三盐酸普鲁卡因含量测定01任务一ZDY-500型自动永停滴定仪介绍02任务二永停滴定仪工作原理03任务三盐酸普鲁卡因含量测定04任务四检测报告能够正确使用和操作永停滴定仪，能够依据质量标准按照永停滴定法测定芳伯胺类化合物的含量。能力目标知识目标掌握永停滴定法的原理，熟悉盐酸普鲁卡因含量测定的原理和条件，了解永停滴定仪的构造。任务一ZDY-500型自动永停滴定仪介绍永停滴定法是容量分析中一种确定滴定终点的方法。自动永停滴定仪是依据中国药典中对永停滴定法的要求而设计的一种仪器，具有精度高、测定准确、使用方便的特点，是化学实验室、药品检验所、各制药厂等医药化工单位进行容量分析时一种必不可少的测定仪器。生存者现状一、仪器结构任务一ZDY-500型自动永停滴定仪介绍1.电源指示灯2.滴定指示灯3.终点指示灯4.极化电压旋钮5.终点旋钮6.灵敏度旋钮7.手动/自动旋钮8.调零旋钮9.滴定开始旋钮生存者现状一、仪器结构任务一ZDY-500型自动永停滴定仪介绍1.电源开关2.保险丝座3.电源插座4.电磁阀接口5.电极接线柱6.接地接线柱二、操作规程熟悉pH计操作规程，填写操作规程表药物检测过程中，学生（或质管部QC检验人员）必须按照规范的ZDY500型自动永停滴定仪操作规程进行操作，填写操作规程表（表3-1）。任务一ZDY-500型自动永停滴定仪介绍二、操作规程操作规程任务一ZDY-500型自动永停滴定仪介绍准备工作滴定液的调节（1）连接滴定装置。（2）将滴定装置中的电磁阀三芯插头与电子单元的电磁阀接口连接好。（1）将滴定液倒入滴定管。（2）开启电源，“手动/自动”旋钮置“手动”，按下“滴定开始”旋钮，滴定液应滴下，调节电磁阀中的支头螺丝，使流量比较合适；放开“滴定开始”旋钮，应无滴定液滴下。（3）按上一步去除硅胶管及滴液管的气泡，并调节滴定液的起始位置。（1）在烧杯中放入搅拌棒，将被滴定溶液移取到烧杯，并将烧杯放在搅拌器上。（2）将260型电极插入被滴溶液。（3）打开仪器和搅拌器电源，调节搅拌器至合适转速。（4）记下滴定管起始读数V0。（5）根据化学反应的性质，调节“极化电压”旋钮，选择50mV。（6）调节“灵敏度”旋钮，选择合适的电流检测灵敏度×0.001[（10~100）×10-9A]。（7）调节“终点”旋钮，选择合适的终点电流，一般选60挡。（8）调节“调零”旋钮，使电流表指针指向零刻度。（9）“手动/自动”旋钮置“自动”，按一下“滴定开始”按钮，仪器即开始进行自动分析，待终点灯亮后，记下滴定管读数V1，V1-V0即滴定结果。滴定分析专家提醒1.过量盐酸可加速反应。按化学计量比，1mol芳胺与2mol盐酸作用，为加速反应并使重氮盐稳定，芳胺与加入盐酸的物质的量比为1∶（2.5～6）。2.滴定温度控制。温度高，反应快，但亚硝酸会逸失，并可使重氮盐分解；温度低，反应又过慢，故需将温度控制在规定温度下进行实验。3.加入适量溴化钾加速反应。该反应在溴化氢催化下反应较快，加入溴化钾后在酸性条件下会生成溴化氢，从而加速反应进行。4.滴定速度控制。为加速反应，开始需将大部分亚硝酸钠滴定液一次性迅速加入，待近终点时再逐滴加入滴定液。整体上的滴定速度为先快后慢。5.铂电极在使用前需进行处理，放入加有少量三氯化铁的硝酸溶液中浸泡数分钟后用蒸馏水清洗干净。6.有的铂电极玻璃和铂烧结工艺不佳，当用硝酸处理电极时，微量硝酸存留在铂片和玻璃空隙间不易洗出，以致电极刚插入就处于极化状态，使用时需注意。7.电磁搅拌的速度不可过快，以不产生空气漩涡为宜。8.使用完毕，立即清洁滴定管和电极。9.必要时，260型电极在含少量FeCl3的HNO3溶液中煮沸半小时进行活化。任务二永停滴定仪工作原理永停滴定法是一种借助电化学原理来确定滴定终点的方法。它将滴定体系置于一电流回路中，并根据滴定过程中电流的变化情况来确定滴定终点。在永停滴定法中需使用两个相同的电极（一般为铂电极），所以又称为双电流滴定法或双安培滴定法。任务二永停滴定仪工作原理I2/I-是一对氧化还原电对的氧化型和还原型，在电势高的阳极会发生氧化反应：在电势低的阴极会发生还原反应：I-和I2在两极之间循环转化，阳极和阴极上不断同时发生电子得失的反应，两极之间即有电流通过。像这样氧化型和还原型能够互相转化的电对称为可逆电对。任务二永停滴定仪工作原理溶液中同时存在S4O62-/S2O32-这一氧化还原电对的氧化型和还原型，插入双铂电极并加电压后，在阳极会发生氧化反应：而在阴极，并没有还原反应发生。此时，两电极间不存在等量的电子得失与交换，无电流通过。像这样只能在一个方向发生反应的氧化还原电对称为不可逆电对。任务二永停滴定仪工作原理一、可逆电对滴定不可逆电对任务二永停滴定仪工作原理二、不可逆电对滴定可逆电对任务二永停滴定仪工作原理三、可逆电对滴定可逆电对任务三盐酸普鲁卡因含量测定含有芳伯氨基或水解后能产生芳伯氨基的药物在盐酸等无机酸介质中能与亚硝酸钠作用生成芳伯胺盐的重氮盐，该反应称为重氮化反应。在滴定没有到达终点之前溶液中不存在可逆电对，无电流通过，电流计指针不偏转；终点后，稍过量的NaNO2在酸性条件反应生成NO，与HNO2形成HNO2/NO可逆电对，电路中即有电流通过，电流计指针偏转。电极反应如下：阳极：阴极：任务三盐酸普鲁卡因含量测定一、仪器与试剂准备ZDY500型永停滴定仪，260型铂电极，分析天平，滴定管，搅拌器，烧杯【仪器】【试剂】亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L），盐酸普鲁卡因原料药，盐酸（1→2）溶液，溴化钾（AR）任务三盐酸普鲁卡因含量测定二、亚硝酸钠滴定液标定2.标定取在120℃干燥至恒重的基准对氨基苯磺酸约0.5g，精密称定，加水30ml与浓氨试液3ml，溶解后，加盐酸（1→2）20ml，搅拌，在30℃以下用亚硝酸钠滴定液迅速滴定。滴定时，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终点。根据亚硝酸钠滴定液的消耗量与对氨基苯磺酸的取用量，算出其准确浓度。1.配制取亚硝酸钠7.2g，无水碳酸钠0.10g，加水适量使溶解成1000ml，摇匀。任务三盐酸普鲁卡因含量测定三、盐酸普鲁卡因含量测定调节永停滴定仪上电阻，使加于电极上的电压约为50mV，并将电流计灵敏度调为10-9A/格。在15～25℃取盐酸普鲁卡因约0.6g，精密称定，置烧杯中，加水40ml与盐酸溶液（1→2）15ml，而后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加溴化钾2g，插入双铂电极后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终点。每1ml的亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.28mg的C13H20N2O2·HCl。平行实验三次。计算盐酸普鲁卡因含量公式：T为亚硝酸钠滴定液的滴定度，V为亚硝酸钠滴定液消耗的体积，S为盐酸普鲁卡因取样量，F为亚硝酸钠滴定液的校正因子：重难点回顾用pH计测定溶液pH的原理，pH计的操作方法和注意事项。使用和维护pH计，能正确记录分析结果并能给出正确的药物检测报告掌握电位滴定法确认滴定终点的原理，掌握电位滴定仪的操作方法和注意事项能够熟练使用和维护电位滴定仪，能正确记录分析结果，学会滴定终点的判断及数据处理，并能给出正确的药物检测报告掌握永停滴定法的原理，熟悉盐酸普鲁卡因含量测定的原理和条件，了解永停滴定仪的构造能够正确使用和操作永停滴定仪，能够依据质量标准按照永停滴定法测定芳伯胺类化合物的含量THANKS模块二药物常用光分析技术项目四对乙酰氨基酚片含量测定项目五青霉素钾红外光谱的测定项目六健脾生血颗粒中亚铁含量测定项目四对乙酰氨基酚片含量测定01任务一UV-9100型紫外—可见分光光度计介绍02任务二紫外—可见分光光度计工作原理03任务三对乙酰氨基酚片含量测定04任务四检测报告能够正确使用和操作紫外—可见分光光度计，能够依据药典标准运用紫外—可见分光光度法测定在紫外—可见光区有吸收药物的含量，学会正确记录测定结果及数据处理、出具检测报告。能力目标知识目标掌握紫外—可见分光光度法的原理，熟悉对乙酰氨基酚片含量测定的方法和条件，了解紫外—可见分光光度计的构造等。任务一UV-9100型紫外—可见分光光度计介绍一、仪器结构1.波长调节钮2.波长读数窗3.功能面板4.数字显示屏5.吸收池暗箱6.吸收池架推拉杆分光光度计内部结构目前，紫外—可见分光光度计的型号繁多，虽然各种型号的仪器操作方法略有不同，但仪器的主要组成及工作原理相似，其基本结构都是由五部分组成（图4-2），即光源、单色器（分光系统）、吸收池、检测器和信号处理系统。图4-2紫外—可见分光光度计基本结构图任务一UV-9100型紫外—可见分光光度计介绍二、UV-9100型紫外—可见分光光度计标准操作规程熟悉分光光度计操作规程，填写操作规程表药物检测过程中，学生（或质管部QC检验人员）必须按照规范的UV9100型紫外—可见分光光度计操作规程进行操作，填写操作规程表（表4-1）。任务一UV-9100型紫外—可见分光光度计介绍二、UV-9100型紫外—可见分光光度计标准操作规程操作规程121.预热仪器开机后灯及电子部件需热平衡，故开机预热30min后才能进行测定工作。2.开机操作（1）在样品池中放置空白及样品。（2）调节波长旋钮，使波长显示所需波长值。（3）按方式选择键使透射比（%T）指示灯亮。（4）拉动样品池拉手，使空白溶液处在光路中。（5）推动样品池拉手，使挡光板进入光路。（6）拉动样品池拉手，使空白溶液处在光路中。（7）拉动样品池手柄使被测样品依次进入光路，显示透光率。任务二紫外—可见分光光度计工作原理紫外—可见分光光度法是根据物质分子对200～760nm范围电磁辐射的吸收特性建立起来的一种定性和定量方法。根据辐射本质属于分子光谱法，根据能量传递方式属于吸收光谱法。任务二紫外—可见分光光度计工作原理一、透光率和吸光度当一束强度为I0的平行单色光通过一个均匀、非散射和反射的吸收介质时，由于吸光物质与光子的作用，一部分光子被吸收，一部分光子透过介质。设透过的光强度为It，则It与入射光强度I0之比定义为透光率，用T表示，即：通常用吸光度A（也称为光密度D或消光度E）表示物质对光的吸收程度，吸光度的定义为：透光率T和吸光度A都是表示物质对光吸收程度的一种量度。透光率T越大，则吸光度A越小；反之，透光率T越小，则吸光度A越大。任务二紫外—可见分光光度计工作原理二、朗伯-比尔定律紫外—可见分光光度法的定量分析基础是朗伯比尔(Lambert-Beer)定律，即单色光辐射穿透被测物质溶液时，在一定的浓度范围内被测物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路）成正比，其公式如下：式中：k为吸光系数，c为被测物质浓度，l为液层厚度。物质对光的吸收符合朗伯比尔定律的前提条件一是入射光为单色光，二是被测溶液为稀溶液（当c>0.01mol/L时，吸光粒子相互影响，Ac线性关系发生偏离）。任务二紫外—可见分光光度计工作原理三、吸光系数百分吸光系数指在一定波长时，物质的浓度为1g/100ml、液层l为1cm时溶液的吸光度，用E%1cm表示。百分吸光系数摩尔吸光系数指在一定波长时，物质的浓度为1mol/L、液层l为1cm时溶液的吸光度，用ε表示。摩尔吸光系数任务二紫外—可见分光光度计工作原理四、吸收光谱吸收光谱又称吸收曲线，是以波长（nm）为横坐标，吸光度A或透光率T为纵坐标所绘制的曲线，如图4-4所示。在吸收曲线上，吸收峰对应的波长称为最大吸收波长（λmax）；吸收谷对应的波长称为最小吸收波长（λmin）。有共轭基团的物质在UV-Vis区才能产生吸收，但吸收曲线并不反映物质非共轭部分的结构。因此，在同一条件下，吸收曲线不同的肯定为不同物质，但结构相近的物质可能有相同的吸收曲线。任务二紫外—可见分光光度计工作原理五、紫外—可见分光光度法的应用紫外—可见分光光度法在药学领域中主要用于有机药物的分析。利用吸收光谱的特征可以进行纯物质的鉴别及杂质的检测、药物与制剂的定量分析，还可用于研究一些有机化合物的分子结构。定性鉴别（1）对比吸收光谱特征数据，如吸光系数、最大吸收波长等。（2）对比吸光度(或吸光系数)的比值。（3）与标准图谱进行核对。含量测定（1）吸光系数法：（2）标准曲线法：（3）对照法：任务三对乙酰氨基酚片含量测定一、仪器与试剂准备【仪器】紫外—可见分光光度计，分析天平，研钵，漏斗，滤纸，250ml容量瓶，100ml容量瓶，50ml量筒，镊子，滴管，250ml试剂瓶【试剂】对乙酰氨基酚片，0.4%的氢氧化钠溶液二、对乙酰氨基酚溶液配制任务三对乙酰氨基酚片含量测定取乙酰氨基酚片10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚40mg），置250ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液50ml及水50ml，振摇15min，加水至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，滤液装瓶贴标签备用。任务三对乙酰氨基酚片含量测定三、对乙酰氨基酚片含量测定精密量取上述滤液5ml，置100ml容量瓶中，加0.4%的氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀；根据分光光度法操作规程，在257nm的波长处测定吸光度，按对乙酰氨基酚百分吸光系数715计算对乙酰氨基酚片含量。清理实验仪器设备和场所。项目五青霉素钾红外光谱的测定01任务一傅立叶变换红外光谱仪介绍02任务二红外分光光度法原理03任务三青霉素钾红外光谱的测定04任务四检测报告能够正确使用和操作傅立叶红外光谱仪，能够依据药典标准运用红外分光光度法测定在中红外光区有吸收药物的红外光谱，学会溴化钾压片制备固体试样的方法，学会正确分析红外吸收光谱图、给出有关吸收峰的归属。能力目标知识目标掌握红外分光光度法的原理，熟悉青霉素钾红外光谱的测定方法和注意事项，了解傅立叶红外光谱仪结构等。任务一傅立叶变换红外光谱仪介绍一、仪器结构傅立叶变换红外光谱仪是测量各种化合物红外谱图的仪器，具有如下优点：①扫描速度快，可以在1s内测得多张红外谱图；②光通量大，可以检测透射较低的样品，可以检测气体、固体、液体、薄膜和金属镀层等不同样品；③分辨率高，便于观察气态分子的精细结构；④测定光谱范围宽，只要改变光源、分束器和检测器的配置，就可以得到整个红外区的光谱。在药品和食品分析、有机化学、高分子化学等领域有广泛的应用。IRprestige-21傅立叶红外光谱仪结构如图所示。生存者现状任务一傅立叶变换红外光谱仪介绍一、仪器结构傅立叶红外光谱仪内部由光源、干涉仪、样品室、检测器和计算机组成，如图所示。光源发出的光经过干涉仪转变成干涉光，干涉光中包含了光源发出的所有波长光的信息，当上述干涉光通过样品时某些波长的光被样品吸收，成为含有样品信息的干涉光，由计算机采集得到样品干涉图，经过计算机快速傅立叶变换后得到吸光度或透光率随频率或波长变化的红外光谱图。任务一傅立叶变换红外光谱仪介绍二、IRprestige-21傅立叶红外光谱仪标准操作规程熟悉IRprestige-21傅立叶红外光谱仪操作规程，填写操作规程表药物检测过程中，学生（或质管部QC检验人员）必须按照规范的IRprestige-21傅立叶红外光谱仪操作规程进行操作，填写操作规程表（表5-1）。二、IRprestige-21傅立叶红外光谱仪标准操作规程操作规程任务一傅立叶变换红外光谱仪介绍04020103开机图谱扫描图谱检索关机任务二红外分光光度法原理红外分光光度法(IR)是利用物质对红外线的特征吸收而建立起来的分析方法，又称红外吸收光谱法。红外吸收光谱的适用范围广，光谱特征性强，所有的有机化合物都能在红外区测得其特征红外光谱。任务二红外分光光度法原理一、红外光谱产生的原理当一定频率的红外线照射分子时，如果分子中某个基团的振动频率与照射的红外线频率相同时二者就会产生共振，分子吸收红外光能量后，由原来的基态能级跃迁到较高的振动能级，同时也伴随着转动能级的跃迁。分子的基本振动形式分为伸缩振动和弯曲振动。原子沿着键轴方向伸缩，使键长发生周期性变化的振动称为伸缩振动，按其对称与否，其振动形式又分为对称伸缩振动（υs）和不对称伸缩振动（υas）。使键角发生周期性变化的振动称为弯曲振动或变形振动，它又分为面内弯曲振动(β)和面外弯曲振动（γ）。面内弯曲振动又包括剪式弯曲振动（δ）和平面摇摆振动（ρ），面外弯曲振动（γ）可分为面外摇摆（ω）和扭曲振动（τ）。每一种振动形式对应一个振动能级，在产生跃迁时所需的能量不同，将选择吸收不同频率的红外光，即在红外光谱图上出现相应的特征吸收峰。若用连续改变频率的红外光照射某物质，就会得到该物质的红外吸收光谱图。任务二红外分光光度法原理二、影响吸收峰位置及强度的因素由分子的振动类型、电荷分布和偶极距变化、跃迁几率等因素决定峰强峰位由分子中原子的振动方式和振动频率等因素决定任务二红外分光光度法原理二、影响吸收峰位置及强度的因素若将双原子分子沿着键轴方向的伸缩振动视为简谐振动，由胡克（Hooke）定律，其基本振动频率可由下式计算：式中：k是化学键的力常数，化学键力常数k越大，则表明化学键的强度越大；μ是两个成键原子的折合相对原子质量，μ=mA·mB/(mA+mB)，其中mA及mB分别为化学键两端的原子A和B的相对原子质量。k越大，μ越小，其基本振动频率越大，即振动吸收峰的波数越大。红外吸收峰的强度主要取决于分子振动时的偶极矩的变化。振动时偶极矩变化越大，吸收峰的强度也越大。红外光谱吸收峰强度可用摩尔吸光系数ε来划分强弱等级，一般定性地用很强（vs，ε>100）、强（s，20<ε<100）、中强（m，10<ε<20）、弱（w，1<ε<10）和很弱（vw，ε<1）等表示。此外，尖锐吸收峰用sh表示，宽吸收峰用b表示，强度可变吸收峰用v表示。三、常用术语任务二红外分光光度法原理特征区习惯上把4000~1300cm-1区域称为特征区指纹区把1300~400cm-1区域称为指纹区相关峰由一个官能团所产生的一组相互依存的特征峰，称为相关吸收峰，简称相关峰任务二红外分光光度法原理四、红外光谱分区基团频率区任务二红外分光光度法原理四、红外光谱分区指纹区任务二红外分光光度法原理五、重要化合物吸收峰位置任务二红外分光光度法原理五、重要化合物吸收峰位置任务三青霉素钾红外光谱的测定一、仪器与试剂准备IRprestige21傅立叶红外光谱仪，玛瑙研钵，压片机，红外灯，分析天平青霉素钾（市售，样品），溴化钾（AR）【仪器】【试剂】任务三青霉素钾红外光谱的测定二、试样的制备称取干燥的青霉素钾对照品约1mg，置玛瑙研钵[图5-12（a）]中，加入干燥的溴化钾粉末约200mg，在红外灯照射下，研磨均匀，然后转移至专用红外压片模具[图5-12（b）]，合上模具置压片机（图5-13）上，先抽气约2min以除去混在粉末中的湿气和空气，再边抽气加压至1.5～1.8MPa2～5min。除去真空，取出压成透明薄片的样品，装入样品架，待测。同法制备试样压片、空白片。溴化钾压片制备固体试样的方法试样的制备有压片法、糊法、膜法、溶液法、气体吸收池法，最常用的是卤化物压片法（溴化钾、氯化钾）。卤化物压片法：基质有氯化钠、溴化钾、氯化银、碘化铯，最常用的是溴化钾与氯化钾，压成直径13mm，厚度0.5mm的薄片，溴化钾（氯化钾）与样品的比例为100∶1（样品1～2mg）。特别注意：①溴化钾必须干燥；②样品颗粒要求研磨到2μm以下；③控制溴化钾与样品的比例。带Cl-的样品选择氯化钾，如盐酸盐、氯化物。当药品采用氯化钾压片和溴化钾压片一致时，可以选择溴化钾压片法。此法适用于可以研细的样品，但对于不稳定的化合物，如发生分解、异构化、升华等变化的化合物不宜使用压片法。注意样品的干燥，不能吸水。任务三青霉素钾红外光谱的测定三、图谱的绘制仪器校正简单分析青霉素钾红外光谱图青霉素钾红外光谱的绘制专家提醒1.压片制样时，测试样品一定要干燥，干燥不充分的样品可以在红外灯下烘烤1小时左右。样品要磨细并混合均匀，加入模具中需均匀平整。2.所有用具应保持干燥、清洁；使用前可以用脱脂棉蘸酒精小心擦拭。3.压片过程应在红外灯照射下进行。4.操作过程中应保持模具表面干燥、清洁；防止药品腐蚀模具(KBr对模具表面腐蚀很严重)。5.KBr在粉末状态下极易吸水、潮解，应放在干燥器中保存，定期在干燥箱中110℃或在真空烘箱中恒温干燥2小时。6.试样应该是单一组份的纯物质，纯度应超过98%或符合商业规格，才便于与纯物质的标准光谱进行对照。项目六健脾生血颗粒中亚铁含量测定01任务一岛津AA-6300型原子吸收分光光度计介绍02任务二原子吸收分光光度法的基本原理03任务三健脾生血颗粒中铁含量测定04任务四检测报告能够正确使用和操作原子吸收分光光度计，能够依据药典标准运用原子吸收分光光度法测定有关药物中金属元素含量，学会正确记录分析结果和数据处理，并给出正规的药物检测报告。能力目标知识目标掌握原子吸收分光光度法的原理，熟悉健脾生血颗粒中铁含量测定的方法和注意事项，了解原子吸收分光光度计结构等。任务一岛津AA-6300型原子吸收分光光度计介绍一、仪器结构岛津AA-6300型原子吸收分光光度计任务一岛津AA-6300型原子吸收分光光度计介绍一、仪器结构

原子吸收分光光度计组成原子吸收分光光度计内部包括光源、原子化器、单色器、背景校正系统、自动进样系统和检测系统等几部分任务一岛津AA-6300型原子吸收分光光度计介绍一、仪器结构

光源光源的作用是发射出能为被测元素吸收的特征波长谱线。对于光源的基本要求是发射的特征波长的带宽要明显小于吸收线的带宽、辐射强度大、背景低、稳定性好，噪声小以及使用寿命长。最常用的光源是空心阴极灯，如图所示。任务一岛津AA-6300型原子吸收分光光度计介绍一、仪器结构原子化器原子吸收法测定的是自由原子对光的吸收，然而，样品中的待测元素是通过化学键与其他的原子结合在一起的，因此，必须使用一些手段切断相互的结合，这一过程称为原子化。最常用的方法就是把样品加热到高温，使分子转换到自由原子，加热的方法分为火焰法（火焰原子化器）与非火焰法（石墨炉原子化器）。任务一岛津AA-6300型原子吸收分光光度计介绍一、仪器结构单色器原子吸收分光光度计中，元素灯发射出的光谱中除了含有待测元素的特征谱线外，还存在待测原子的其他谱线、所填充气体的发射谱线等杂质谱线，单色器的作用就是把待测元素的特征谱线与其他谱线分开，便于测定。任务一岛津AA-6300型原子吸收分光光度计介绍一、仪器结构检测系统由检测器、信号处理器和指示记录器组成，应具有较高的灵敏度和较好的稳定性，并能及时跟踪吸收信号的急速变化。任务一岛津AA-6300型原子吸收分光光度计介绍一、仪器结构背景校正系统背景干扰是原子吸收分光光度法中的常见现象。背景吸收通常来源于样品中的共存组分及其在原子化过程中形成的次生分子或原子的热发射、光吸收和光散射等，这些干扰在仪器设计时应设法予以克服；仪器某些工作条件（如波长、狭缝、原子化条件等）的变化也可影响灵敏度、稳定程度和干扰情况。在火焰法原子吸收测定中可采用选择适宜的测定谱线和狭缝、改变火焰温度、加入配位剂或释放剂、采用标准加入法等方法消除干扰；在石墨炉原子吸收测定中可采用选择适宜的背景校正系统、加入适宜的基体改进剂等方法消除干扰。生存者现状任务一岛津AA-6300型原子吸收分光光度计介绍二、岛津AA-6300型原子吸收分光光度计操作规程熟悉岛津AA-6300型原子吸收分光光度计操作规程，填写操作规程表药物检测过程中，学生（或质管部QC检验人员）必须按照规范的岛津AA6300型原子吸收分光光度计操作规程进行操作，填写操作规程表（表6-1）。任务一岛津AA-6300型原子吸收分光光度计介绍二、岛津AA-6300型原子吸收分光光度计操作规程操作规程0501020304开机联机自检测定打印关机任务二原子吸收分光光度法的基本原理一、基本原理共振线和吸收线共振发射线原子外层电子从第一激发态直接跃迁至基态所辐射的谱线。共振吸收线原子外层电子从基态跃迁至第一激发态所产生的吸收谱线。原子吸收产生原子外层电子在能级之间的跃迁。共振线共振发射线和共振吸收线都简称为共振线，特征谱线，元素的灵敏线。任务二原子吸收分光光度法的基本原理一、基本原理原子吸收分光光度法的定量基础：吸收曲线轮廓吸收系数Kv随频率v的变化曲线。表征参数：1)中心频率v02)半宽度∆v任务二原子吸收分光光度法的基本原理一、基本原理原子吸收分光光度法的定量基础：吸收曲线轮廓谱线变宽原因自然宽度多普勒变宽(热变宽)压力(碰撞)变宽自吸变宽场致变宽任务二原子吸收分光光度法的基本原理一、基本原理原子吸收分光光度法的定量基础：原子吸收光谱的测量峰值吸收吸收线中心频率处的峰值吸收系数积分吸收在吸收曲线的轮廓内，对吸收系数的积分峰值吸收代替积分吸收的必要条件：1）发射线的中心频率与吸收线的中心频率一致2）发射线的半宽度远小于吸收线的半宽度(1/5~1/10)发射线吸收线任务二原子吸收分光光度法的基本原理一、基本原理原子吸收分光光度法的定量基础：原子吸收定量公式采用锐线光源，通过测定吸收线中心频率的峰值吸收系数计算待测元素的原子数。K0～N任务二原子吸收分光光度法的基本原理二、定量分析方法标准曲线法配制一组已知浓度被测物质的标准溶液，按各溶液浓度由低到高的顺序依次测定出吸光度，然后以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制A—c标准曲线，如图所示。在标准溶液测试完全相同的条件下，测定样品溶液的吸光度Ax，再从标准曲线上求出被测元素的含量cx。标准曲线法适用于组成简单或共存元素不干扰的试样，可用于同类大批量样品的测定。任务二原子吸收分光光度法的基本原理二、定量分析方法标准加入法当试样基体影响较大，又没有基体空白，或测定纯物质中极微量的元素时，可采用此法。取4份等量试样，除一份外，其余精密加入不同浓度的待测元素的对照溶液，制成从零开始递增的一系列溶液。在相同条件下分别测得吸光度，将吸光度与相应的待测元素加入量作图。这时，曲线并不通过原点，在纵坐标上的截距正是试样中待测元素所产生的吸光度值。将此外推至与横坐标相交，此交点与原点间的距离即相当于试样中待测元素的含量，如图所示。任务三健脾生血颗粒中铁含量测定一、仪器与试剂准备岛津AA6300型原子吸收分光光度计，铁元素空心阴极灯，容量瓶（1000ml，100ml，25ml），移液管（5ml），烧杯（50ml），研钵，分析天平【仪器】【试剂】健脾生血颗粒（市售），硫酸铁铵（AR），硫酸（AR），去离子水二、溶液的制备任务三健脾生血颗粒中铁含量测定对照品溶液的制备精密称取硫酸铁铵[FeNH4(SO4)2·12H2O]0.863g置50ml烧杯中，加水使溶解，加硫酸2.5ml，转移至1000ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0、1.5、2.0、2.5和3.0ml，分别置25ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，备用。供试品溶液的制备取健脾生血颗粒适量，研细，精密称取健脾生血颗粒粉末约1.0g置50ml烧杯中，用适量去离子水溶解，转移至100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取滤液5.0ml置25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，备用。21三、测定取对照品溶液及供试品溶液，按照原子吸收分光光度法操作规程，在248.3nm的波长处测定，绘制标准曲线，计算健脾生血颗粒中铁（Fe）含量。任务三健脾生血颗粒中铁含量测定重难点回顾掌握紫外—可见分光光度法的原理，熟悉对乙酰氨基酚片含量测定的方法和条件，了解紫外—可见分光光度计的构造等。能够正确使用和操作紫外—可见分光光度计，能够依据药典标准运用紫外—可见分光光度法测定在紫外—可见光区有吸收药物的含量，学会正确记录测定结果及数据处理、出具检测报告。掌握红外分光光度法的原理，熟悉青霉素钾红外光谱的测定方法和注意事项，了解傅立叶红外光谱仪结构等。能够正确使用和操作傅立叶红外光谱仪，能够依据药典标准运用红外分光光度法测定在中红外光区有吸收药物的红外光谱，学会溴化钾压片制备固体试样的方法，学会正确分析红外吸收光谱图、给出有关吸收峰的归属。掌握原子吸收分光光度法的原理，熟悉健脾生血颗粒中铁含量测定的方法和注意事项，了解原子吸收分光光度计结构等。能够正确使用和操作原子吸收分光光度计，能够依据药典标准运用原子吸收分光光度法测定有关药物中金属元素含量，学会正确记录分析结果和数据处理，并给出正规的药物检测报告。THANKS模块三常用色谱技术项目七功劳木小檗碱含量测定项目八银黄口服液质量定性鉴别项目九松节油α-蒎烯含量测定项目十甘草中甘草酸含量测定项目七功劳木小檗碱含量测定01任务一柱色谱装置介绍02任务二色谱法分析法原理03任务三功劳木小檗碱含量测定04任务四检测报告能够正确安装柱色谱装置，学会色谱柱制备、加样、洗脱等操作，进一步熟悉紫外—可见分光光度计的操作等相关知识。能力目标知识目标掌握柱色谱法的原理，熟悉柱色谱实验条件的选择，熟悉运用柱色谱对功劳木小檗碱提取分离的方法和注意事项等。任务一柱色谱装置介绍一、柱色谱装置柱色谱法是各种色谱法中建立最早的方法。早在1906年俄国的植物学家茨维特，将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙粉末的玻璃柱中，用石油醚自上而下淋洗，由于不同的色素在碳酸钙颗粒表面的吸附力和被石油醚溶解能力存在差异，导致不同色素向下移动的速度也不相同。经过一段时间洗脱后，色素在柱子上分开，形成一圈圈不同颜色的色带，使不同色素成分得到分离，这种分离方法因此称为“色谱法”。实验中所用的玻璃柱称为色谱柱，如图7-1所示；色谱柱中填充的固定不动的碳酸钙称为固定相；推动色素移动的石油醚称为流动相，色谱装置如图7-2、图7-3所示。色谱法在20世纪初并没有引起重视，直到20世纪30年代，R.Kuhn用Tsweet的方法分离类胡萝卜素异构体获得了成功，色谱法才得以广泛应用。其后40年代至50年代初，先后出现了纸色谱（PC）和薄层色谱法(TLC)；50年代James和Martin提出了气相色谱法（GC)，开创了现代色谱法的新时期；60年代后期新型色谱柱填料、高压输液泵和高灵敏度的检测器的出现，发展出了高效液相色谱（HPLC）；80年代初出现了超临界流体色谱法（SFC），是以超临界流体作为流动相的一种色谱方法；80年代末又出现了在医学研究中越来越受到重视的毛细管电泳技术（CE）。当前，色谱法发展的趋势是向着色谱—质谱（光谱）联用技术、多维色谱和智能色谱的方向发展。二、色谱柱制备及洗脱操作方法熟悉色谱柱制备及洗脱操作方法，填写操作记录表药物检测过程中，学生（或质管部QC检验人员）必须按照规范的色谱柱制备及洗脱操作方法进行操作，填写操作记录表（表7-1）。任务一柱色谱装置介绍二、色谱柱制备及洗脱操作方法色谱柱的制备121.干装法先在色谱柱下端铺上少量的脱脂棉，再在管上端放一玻璃漏斗，将吸附剂均匀地倒入柱内，使吸附剂经漏斗成一细流，中间不应间断，慢慢加入管内，同时轻轻敲打色谱柱使填装均匀（在装较粗的色谱柱时更应细心）。柱装好后，在吸附剂上面再铺上一层洁净细沙（或剪一直径大小适合的滤纸放入吸附剂上面），以防止倒入样品或洗脱剂时将吸附剂冲起，再打开下端活塞，然后沿管壁轻轻倒入洗脱剂，待吸附剂湿润后，要注意柱内必须没有气泡，如有气泡可再加洗脱剂并在上端通入压缩空气，使气泡随洗脱剂由下端流出。2.湿装法先在色谱柱下端铺上少量的脱脂棉，再将准备使用的洗脱剂装入管内，然后把吸附剂用相同洗脱剂拌湿后慢慢连续不断地倒入柱内，同时将管下端活塞打开，使洗脱剂慢慢流出。吸附剂慢慢沉于管的下端，待加完吸附剂后，继续使洗脱剂流出，直到吸附剂的沉降不再变动。此时吸附剂上面加少许脱脂棉或直径与柱内径大小合适的滤纸片，将多余的洗脱剂放出，至吸附剂上面的洗脱剂将尽时，把被分离样品的溶剂轻轻加于柱顶部，开始洗脱。任务一柱色谱装置介绍二、色谱柱制备及洗脱操作方法加样与洗脱任务一柱色谱装置介绍0201洗脱用分液漏斗连续不断地加入洗脱剂，并保持一定高度的液面。在收集洗脱液时，应采用等份收集。将收集液用薄层色谱（TLC）或纸色谱定性检查，根据检查结果，将成分相同的洗脱液合并，回收溶剂，得到某单一成分。如为几个成分的混合物，可再用其他方法进一步分离。加样应将柱上端的溶剂放出至近吸附剂表面。沿管壁加入样品溶液，溶液加完后，打开活塞使液体慢慢放出，至液面与吸附剂面相齐，必要时再用少量溶剂冲洗原来盛有样品的容器，全部加入色谱柱内，开始收集流出的洗脱液，如图7-3所示。二、色谱柱制备及洗脱操作方法检出任务一柱色谱装置介绍可以通过分段收集流出液，采用相应的物理和化学方法进行检出。常用的检出方法很多，如化学反应法、TLC法及其他方法。任务二色谱分析法原理一、分配系数K在一定温度下，组分在流动相和固定相之间所达到的平衡叫分配平衡，达分配平衡时组分在固定相(s)与流动相(m)中的浓度(c)之比称为分配系数：K随温度变化而变化，与固定相、流动相的体积无关，在不同分离机制的色谱中K都可用上式表示，但名称有所不同。K在吸附色谱中称为吸附系数；在离子交换色谱中称为选择性系数；在凝胶色谱中称为渗透系数。其物理意义都表示在平衡状态下组分在固定相和流动相中的浓度之比，也叫平衡常数。色谱过程中不同组分虽然开始时处于同一起跑线上，但由于K不同，它们在柱中前进的速率就不同，K大的组分前进的速率慢，保留时间长。色谱分析法分类色谱分析法有多种不同的分类方法，通常按照以下三种标准分类。1.按流动相和固定相的状态分类按流动相的物理状态的不同，色谱分析法可分为气体作流动相的气相色谱法(GC)和液体作流动相的液相色谱法(LC)。GC根据固定相物理状态的不同又可分为气—固色谱法(GSC)和气—液色谱法(GLC)；LC也可分为液—固色谱法(LSC)和液—液色谱法(LLC)。此外还有超临界流体作色谱流动相的超临界流体色谱法(SFC)。2.按固定相外形分类按固定相外形可分为柱色谱法、平板色谱法等。柱色谱法是将色谱填料装填在色谱柱管内作固定相的色谱方法，色谱分离过程在色谱柱中进行。根据色谱柱的尺寸、结构和制作方法的不同，可分为填充柱色谱法、毛细管柱色谱法及微填充柱色谱法等。气相色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法及超临界流体色谱法等都属于柱色谱法。平板色谱法是固定相呈平板状的色谱，称为平板色谱，它又可分为用吸附水分的滤纸作固定相的纸色谱法、将固定相涂在玻璃板或铝箔板等上的薄层色谱法以及将高分子固定相制成薄膜的薄膜色谱法等。平板色谱法属液相色谱范畴。3.按色谱过程的分离原理分类按色谱过程的分离机制可分为吸附色谱法：利用吸附剂表面对被分离的各组分吸附能力不同进行分离；分配色谱法：利用不同组分在两相分配系数或溶解度不同进行分离；离子交换色谱法：利用不同组分对离子交换剂亲和力不同进行分离；凝胶色谱法：利用凝胶对分子的大小和形状不同的组分所产生的阻碍作用不同而进行分离的色谱法等。任务二色谱分析法原理二、常用的液相色谱法吸附柱色谱法:吸附剂01三个基本要求02有较大的表面积，有足够的吸附能力，但对不同物质其吸附能力又不一样03与洗脱剂、溶剂及样品不起化学反应，并在所用溶剂和洗脱剂中不溶解粒度均匀，粒度要细任务二色谱分析法原理二、常用的液相色谱法吸附柱色谱法:吸附剂活性炭、淀粉、菊糖、蔗糖、乳糖、聚酰胺以及纤维素等有机吸附剂氧化铝、硅胶、氧化镁、硫酸钙、碳酸钙、磷酸钙、滑石粉、硅藻土等。无机吸附剂（1）硅胶：硅胶为首选吸附剂，呈微酸性，用于分离酸性和中性物质，如有机酸、氨基酸、甾体等。（2）氧化铝：氧化铝有碱性、中性和酸性三种，以中性氧化铝使用最多。碱性氧化铝适用于碱性和中性化合物的分离；中性氧化铝适用于分离生物碱、甾体、苷类、醛、酮、醌、酯和内酯等化合物。凡是酸性、碱性氧化铝可分离的物质都可用中性氧化铝分离；酸性氧化铝适用于分离酸性化合物，如酸性色素、氨基酸及对酸稳定的中性物质。任务二色谱分析法原理二、常用的液相色谱法吸附柱色谱法:洗脱剂的选择被分离组分的极性与被吸附力的关系烷烃系非极性化合物，一般不被吸附或吸附得很不牢固吸附剂的活性与被分离组分极性的关系分离极性大的组分，宜选用吸附性能小的吸附剂；分离极性小的组分，一般选择吸附性能大的吸附剂。洗脱剂的极性与被分离组分极性的关系一般按照极性物质易溶于极性溶剂，非极性物质易溶于非极性溶剂的相似相溶原则来选择洗脱剂任务二色谱分析法原理二、常用的液相色谱法分配色谱法载体在分配色谱法中载体只起负载固定相的作用。要求它惰性、能吸留较大量的固定相液体。载体必须纯净，颗粒大小均匀，大多数的商品载体在使用之前需要精制，过筛。常用的载体有硅胶、硅藻土、纤维素，此外还有淀粉、有机载体（如微孔聚乙烯粉）等。固定液及其选择分配色谱根据固定相和流动相的相对极性，可以分为两类：①固定相的极性大于流动相，即以强极性溶剂作为固定液，以弱极性的有机溶剂作为流动相，称为正相分配色谱；②固定液极性较小，而流动相则极性较大，称为反相分配色谱。流动相及其选择固定相与流动相的选择，要根据被分离物中各组分在两相中的溶解度之比即分配系数而定。可先使用对各组分溶解度大的溶剂为流动相，再根据分离情况改变流动相的组成，即在流动相中加入一些别的溶剂，以改变各组分被分离的情况与洗脱速率。任务二色谱分析法原理二、常用的液相色谱法离子交换色谱法吸收光谱又称吸收曲线，是以波长（nm）为横坐标，吸光度A或透光率T为纵坐标所绘制的曲线，如图4-4所示。在吸收曲线上，吸收峰对应的波长称为最大吸收波长（λmax）；吸收谷对应的波长称为最小吸收波长（λmin）。有共轭基团的物质在UV-Vis区才能产生吸收，但吸收曲线并不反映物质非共轭部分的结构。因此，在同一条件下，吸收曲线不同的肯定为不同物质，但结构相近的物质可能有相同的吸收曲线。任务二色谱分析法原理二、常用的液相色谱法离子交换色谱法：阳离子交换树脂如果在树脂骨架上引入的是酸性基团[如磺酸基(-SO3H)、羧基(-COOH)、酚羟基(OH)等]，其上的氢可以和溶液中阳离子发生交换，故称为阳离子交换树脂。阳离子交换反应为：反应式中，M+为金属离子，当样品溶液加入色谱柱中，溶液中阳离子便和氢离子交换，阳离子被树脂吸附，氢离子进入溶液。由于交换反应是可逆过程，已经交换的树脂，如果以适当浓度的酸溶液处理，反应逆向进行，阳离子就被洗脱下来，树脂又恢复原状。这一过程称为洗脱或树脂的再生。再生后树脂可继续使用。任务二色谱分析法原理二、常用的液相色谱法离子交换色谱法：阴离子交换树脂如果在树脂骨架上引入的是碱性基团（如季铵基(-N(CH3)3+)、伯胺基(-NH2)、仲胺基(-NHCH3)等），其上的OH-可以和溶液中的阴离子发生交换反应，故称为阴离子交换树脂。阴离子交换反应为：任务二色谱分析法原理二、常用的液相色谱法离子交换色谱法：离子交换树脂的性能指离子交换树脂中交联剂(二乙烯苯)的含量，常以质量百分比表示。交联度指在实验条件下，每克干树脂真正参加交换的基团数。交换容量任务二色谱分析法原理二、常用的液相色谱法空间排阻色谱法空间排阻色谱法又称凝胶色谱法，主要用于蛋白质及其他大分子物质的分离而大分子则完全不能进入孔穴中，而只能沿凝胶颗粒之间的空隙随流动相向下流动。小分子可以完全渗透进入凝胶内部孔穴中而被滞留中等分子可以部分进入较大的一些孔穴中任务二色谱分析法原理二、常用的液相色谱法几种柱色谱法归纳任务三功劳木小檗碱含量测定一、仪器与试剂准备【仪器】UV-9100型紫外—可见分光光度计，索氏提取器，研钵、50ml容量瓶，25ml容量瓶，色谱柱（Φ9mm），50ml烧杯【试剂】市售中药功劳木，无水乙醇，盐酸—甲醇(1∶100)溶液，中性氧化铝，0.05mol/L硫酸溶液二、液相色谱法制备功劳木小檗碱提取液取市售中药功劳木约5g，用研钵研成粉末，过三号筛后取粉末约1.3g，精密称定，置索氏提取器中，用盐酸—甲醇(1∶100)适量，加热回流提取，至提取液无色为止，将提取液（必要时浓缩）转移至50ml容量瓶中，用盐酸—甲醇(1∶100)少量洗涤容器，洗液并入提取液中，并加至刻度，备用。根据上述液相柱色谱法，称取中性氧化铝5g湿法装柱，用乙醇30ml预洗。从上述50ml容量瓶中的提取液中精密量取5ml,加于氧化铝柱上,用乙醇25ml分次洗脱，收集洗脱液，置50ml容量瓶中，加乙醇至刻度，精密量取3ml,置25ml容量瓶中，加0.05mol/L硫酸溶液至刻度，摇匀，备用。任务三功劳木小檗碱含量测定三、功劳木小檗碱含量测定依照项目四介绍的分光光度法，在345nm的波长处测定吸收度A，盐酸小檗碱（C2OH17NO4·HCl）的百分吸收系数（E1%1cm）为728，按下式计算功劳木小檗碱含量：A为测得的吸光度，E1%1cm为盐酸小檗碱的百分吸收系数（728），l为吸收池厚度，V为提取液体积（50ml），F为稀释因子25/3×50/5，m为功劳木粉末质量。任务三功劳木小檗碱含量测定项目八银黄口服液质量定性鉴别01任务一薄层色谱装置介绍02任务二薄层色谱法原理03任务三银黄口服液质量定性鉴别04任务四检测报告学会薄层色谱法的基本操作方法，包括制板、点样、展开、斑点定位及定性定量检测等操作。能力目标知识目标掌握薄层色谱法的原理，熟悉薄层色谱实验条件的选择，了解运用薄层色谱对银黄口服液质量定性鉴别的方法和注意事项等。任务一薄层色谱装置介绍一、薄层色谱装置薄层色谱法也叫薄层层析法，在中国药典中常用作药物的定性鉴别。这种方法是将细粉状的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料板或铝箔上，形成一均匀薄层，经点样、展开、显色后，与适宜的对照物质在同一薄层板上所得的色谱斑点做比较，用于进行定性鉴别或含量测定的方法。常用的设备包括层析缸和层析板，如图所示。生存者现状二、薄层色谱操作方法熟悉薄层色谱法操作方法，填写操作记录表任务一薄层色谱装置介绍药物检测过程中，学生（或质管部QC检验人员）必须按照规范的薄层色谱操作方法进行操作，填写操作规程表。04020103制板点样展开斑点定位二、薄层色谱操作方法薄层色谱操作方法任务一薄层色谱装置介绍二、薄层色谱操作方法薄层色谱操作方法任务一薄层色谱装置介绍1.制板薄层铺板的厚度及均匀性对样品的分离效果和结果重复性影响极大。以硅胶、氧化铝为固定相制备的薄板，一般厚度以250μm为宜，若要分离制备少量的纯物质，薄层厚度应稍大些，常用的为500～750μm，甚至1～2mm。薄层板分为硬板与软板。薄层铺板硬板软板载板匀浆的制备制板手工铺板机械铺板二、薄层色谱操作方法薄层色谱操作方法任务一薄层色谱装置介绍2.点样先用铅笔在距薄层底端1.5～2.5cm处画一横线，点样管吸取样品后，垂直地下端轻微接触薄层板表面的点样线，使斑点呈圆形。每次点样后，原点扩散的直径以不超过2～3mm为宜。若样品浓度较稀，可反复多点几次，每点一次可借助红外线或电吹风使溶剂迅速挥发。点样的体积要尽可能小些，为2～10μl。多个样品在同一薄板的点样线上点样时，它们相互间隔应大于15mm。点样不能距边太近，以避免边缘效应而产生误差。点样时间要短，避免薄板暴露在空气中时间过长而吸水降低活性。二、薄层色谱操作方法薄层色谱操作方法任务一薄层色谱装置介绍3.展开将点好样的薄板与流动相接触，使两相相对运动并带动样品组分迁移的过程称为展开。薄层板的展开需要在密闭的层析缸(也可用层析槽、标本缸或广口瓶等)中进行，如图8-3所示。先将一定量展开剂放在色谱缸中，盖上缸盖，让缸内溶剂蒸气饱和5～10min。再将点好试样的薄层板样点一端朝下放入缸内，盖好缸盖，展开剂因毛细管效应而沿薄层上升，样品中组分随展开剂在薄层中以不同的速度自下而上移动而导致分离。特别要注意控制器皿中展开剂的量，切勿使样点浸入展开剂中。当展开剂前沿上升到样点上方8～10cm时取出薄层板，放平，铅笔标明溶剂前沿位置，冷风吹干溶剂。二、薄层色谱操作方法薄层色谱操作方法任务一薄层色谱装置介绍4.斑点定位斑点定位2光学法1显色剂法①化合物本身是有色物质，在阳光下可直接看出斑点定位。②有些化合物能吸收某种波长的光，发射更长波长的光而显出不同颜色的荧光斑点。通用型显色剂：与物质的反应是可逆的，当碘升华挥发后，斑点便于进一步处理。专用显色剂：是指对某个或某一类化合物显色的试剂。任务二薄层色谱法原理一、薄层色谱分离原理把待分析试样的溶液滴加在薄层板的起始线上（点样）,把薄层板放入层析缸中，底端浸入适当溶剂。薄层板试样原点任务二薄层色谱法原理一、薄层色谱分离原理展开过程中，组分在两相之间发生多次吸附—解吸平衡，吸附牢的组分随展开剂移动慢，吸附弱的组分随展开剂移动快，一段时后，组分被分离，各组分在薄层板上形成不同距离的斑点。前沿原点AB任务二薄层色谱法原理一、薄层色谱分离原理溶剂

前沿起始线ABabcRf值相差越大，分离越好。一般要求分离后组分的Rf值在0.2～0.8之间，各组分的Rf值之差应大于0.05，以防斑点重叠。任务二薄层色谱法原理一、薄层色谱分离原理溶剂

前沿起始线ABabc用相对比移值RS定性时，必须有参考物作对照。参考物可以是样品中某一组分，也可以是外加的对照品。RS值可以大于1。二、吸附剂（固定相）被分离的物质极性强，应选择吸附能力弱的吸附剂；被分离的物质极性弱，则应选择吸附能力强的吸附剂。有机吸附剂(如聚酰胺、纤维素和葡聚糖等)无机吸附剂（如氧化铝、硅胶、硅藻土、磷酸钙、磷酸镁和硅酸钙镁等)。最常用的吸附剂是氧化铝、硅胶和聚酰胺。任务二薄层色谱法原理三、展开剂（流动相）薄层色谱法中采用单一溶剂或多元混合溶剂作流动相，称为展开剂。与吸附柱色谱法中选择流动相的一般规则相同，展开剂的选用要从被分离试样组分极性、吸附剂活性和展开剂的极性三个因素综合考虑。任务二薄层色谱法原理活泼吸附剂（固定相）展开剂（流动相）极性不活泼被分离物质BB’ACC’非极性非极性极性A’ⅤⅠ三、展开剂（流动相）展开剂成分的选择对于容易分离的化合物，用单一溶剂展开优点：溶剂简单，分离重现性好。对于难分离组分，则选用二元、三元、甚至多元溶剂

Rf太小——加入强极性展开剂

Rf过大——降低展开剂的极性任务二薄层色谱法原理1.占比例较大的溶剂为主要溶剂，可使试样组分溶解并基本分离。占比例较小的溶剂可进一步调整各组分Rf值，改善分离效果。2.分离酸性或碱性组分时，往往在展开剂中加入少量酸或碱，以防这些组分离解，使这些组分的斑点更加集中和清晰，从而提高分离度。3.当展开剂的粘度太大时，可在展开剂中加入粘度小的溶剂，以降低展开剂粘度，从而提高展开速度。任务二薄层色谱法原理四、薄层色谱法的定性、定量分析

定性分析对照法:即在同一块薄层板上分别点上样品和对照品进行展开、定位。如果样品的Rf值与对照品的Rf值相同，即Rs＝1，则可认为该组分与对照品为同一物质。有时为了进一步可靠起见，还应采用多种不同的展开系统进行展开。如果所得到的Rf值与对照品均一致，才可基本认定是同一物质。任务二薄层色谱法原理四、薄层色谱法的定性、定量分析

定量分析斑点洗脱法目视比较法薄层扫描法定量分析方法任务二薄层色谱法原理四、薄层色谱法的定性、定量分析

定量分析：目视比较法将对照品配成浓度已知的系列标准溶液，同样品溶液一起分别点在同一块薄板上展开，显色后，目视比较样品色斑的颜色深度和面积大小与对照品中的哪一个最为接近，即可求出样品含量的近似值。本法的精度为±10％，适合于半定量分析或药物中杂质的限度检查。任务二薄层色谱法原理四、薄层色谱法的定性、定量分析

定量分析：斑点洗脱法将样品液以线状点在薄板的起始线上，展开后，用一块稍窄一点的玻璃板盖着薄板的中间，用以上定位方法定位出薄板两边斑点。拿开玻璃板将待测组分斑点中间条状部分的吸附剂定量取下(如采用刀片刮下或捕集器收集)，用合适的溶剂将待测组分定量洗脱，然后按照比色法或分光光度法测定其含量。任务二薄层色谱法原理四、薄层色谱法的定性、定量分析

定量分析：薄层扫描法薄层扫描法系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于定量分析的分析方法。任务三银黄口服液质量定性鉴别一、仪器与试剂准备聚酰胺薄膜（5cm×7cm），微升毛细管点样器，微升取样器，分析天平，50ml烧杯，1000ml容量瓶，100ml容量瓶，25ml容量瓶，紫外灯，5ml吸量管，