临床病原学检查详解

（优选）临床病原学检查课件当前第1页\共有48页\编于星期二\22点[目的要求]掌握：感染性疾病的诊断和治疗原则熟悉：感染性疾病病原学实验诊断及抗生素治疗的主要实验室监测方法了解：病原学诊断的重要性，现代感染的类型和病原微生物的变迁当前第2页\共有48页\编于星期二\22点病原体检查的作用

1.感染性疾病的明确诊断2.通过药敏试验指导临床合理用药3.病原体监控和耐药性监控当前第3页\共有48页\编于星期二\22点

第一节标本采集、运送和检查方法当前第4页\共有48页\编于星期二\22点一.标本采集和运送采集标本注意点：1.标本容器必须无菌或清洁容器2.选择最佳时间采集标本，在抗菌药物使用前3.获取标本时，须严格无菌操作4.标本采集后，应尽快送实验室当前第5页\共有48页\编于星期二\22点㈠血液发热初期和高峰期采集抗菌药物治疗前成人每次10-20ml，婴幼儿1-2ml标本不用抗凝剂24小时内，可在不同部位采血3次当前第6页\共有48页\编于星期二\22点㈡尿液无菌采集清洁中段尿导尿或膀胱穿刺获得当前第7页\共有48页\编于星期二\22点㈢粪便取含脓、血或粘液粪便置于清洁容器内排便困难者或婴幼儿可用直肠拭子对传染性腹泻须三次送检当前第8页\共有48页\编于星期二\22点㈣呼吸道标本1.痰：⑴自然咳痰法⑵气管镜采集法2.鼻咽拭标本：同痰标本用清水漱口后采集当前第9页\共有48页\编于星期二\22点㈤脑脊液与其他无菌体液脑脊液标本应立即保温送检胸腹水等体液标本应抽取2-5ml送检当前第10页\共有48页\编于星期二\22点㈥泌尿生殖道标本性传播疾病取尿道口分泌物、阴道宫颈口分泌物生殖道疱疹常穿刺取疱疹液当前第11页\共有48页\编于星期二\22点㈦创伤、组织和脓肿标本开放性脓肿：无菌棉拭采集脓液封闭性脓肿：无菌注射器穿刺抽取当前第12页\共有48页\编于星期二\22点二.病原体检查的基本方法1.临床标本细菌检验一般程序当前第13页\共有48页\编于星期二\22点一般程序

标本直接涂片，染色镜检分离培养增菌培养需氧培养

二氧化碳培养厌氧培养观察菌落形态

单个菌落涂片、染色镜检

血清学鉴定生化鉴定药敏试验

确定致病菌发出报告当前第14页\共有48页\编于星期二\22点2.病原体诊断的基本方法

直接显微镜检测（microscopicexamination）⑴染色标本检查法：革兰染色和抗酸染色⑵不染色标本检查法：悬滴法和压滴法当前第15页\共有48页\编于星期二\22点2.病原体诊断的基本方法病原体分离培养(isolationandculture)和鉴定(identification)培养基选择生长条件：一般大气条件厌氧条件微需氧条件当前第16页\共有48页\编于星期二\22点2.病原体诊断的基本方法鉴定技术：生化鉴定血清学鉴定数码鉴定自动化鉴定当前第17页\共有48页\编于星期二\22点2.病原体诊断的基本方法血清学诊断：查特异性抗体——肥达氏试验病原体特异性抗原检测病原体核酸检测：查特异基因片段DNA/RNA——PCR、DNA探针杂交技术当前第18页\共有48页\编于星期二\22点

第二节细菌耐药性检查当前第19页\共有48页\编于星期二\22点

一.抗微生物药物敏感性试验（AST）

1.定义：对敏感性不能预测的临床分离菌株进行药敏试验，以指导临床选择治疗药物和了解区域或医院内常见病原菌耐药性变迁，有助于临床经验性治疗选药。当前第20页\共有48页\编于星期二\22点一.抗微生物药物敏感性试验（AST）2.常用敏感性试验方法⑴手工试验:①K-B纸片琼脂扩散法结果表示:S-SusceptibleI-IntermediateR-Resistant②稀释法（MIC）③Etest④联合药敏试验当前第21页\共有48页\编于星期二\22点一.抗微生物药物敏感性试验（AST）⑵自动化仪器Vitek，Microscan⑶分子试验PCR直接检测mecA基因⑷补充试验Nitrocefin当前第22页\共有48页\编于星期二\22点一.抗微生物药物敏感性试验（AST）3.药敏试验结果与临床抗生素剂量关系敏感(S)——一般剂量有效，推荐使用该抗生素用于临床治疗中介(I)——大剂量有效，提示药物MIC接近体液或组织可达到药物浓度耐药(R)——大剂量无效,即常规用药剂量不能达到MIC当前第23页\共有48页\编于星期二\22点一.抗微生物药物敏感性试验（AST）4.K-B纸片扩散试验的影响因素琼脂厚度与抑菌圈直径成反比菌液浓度与抑菌圈直径成反比药敏试纸含量–与抑菌圈直径成反比保存温度–20℃，使用前室温平衡

30min后开启湿度-密封容器，硅胶防潮NCCLS标准培养种类(MH),厚度(4mm)

接种量(0.5MF)

选药标准,判读标准,质控标准

当前第24页\共有48页\编于星期二\22点质控参考菌金黄色葡萄球菌ATCC25923大肠埃希菌ATCC25922铜绿假单胞菌ATCC26853当前第25页\共有48页\编于星期二\22点二.耐药机制及耐药性监测试验1.耐药菌株：耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）耐青霉素肺炎链球菌（PRSP）耐万古霉素肠球菌（VRE）质粒介导的超广谱-内酰胺酶（ESBL）多重耐药的铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单胞菌和不动杆菌当前第26页\共有48页\编于星期二\22点二.耐药机制及耐药性监测试验2.耐药机制：⑴药物渗入细菌减少⑵产生灭火酶和钝化酶(-内酰胺酶)⑶细菌抗生素结合蛋白发生改变（PBP）⑷代谢拮抗剂产生当前第27页\共有48页\编于星期二\22点二.耐药机制及耐药性监测试验3.耐药性监测的特殊试验⑴-内酰胺酶检测方法:头孢哨噻吩滤纸片法(nitrocefin)意义:-内酰胺酶检测阳性,即对青霉素、氨卞西林等抗生素耐药当前第28页\共有48页\编于星期二\22点二.耐药机制及耐药性监测试验⑵超广谱-内酰胺酶检测（ESBL）定义：是水解青霉素，一代、二代和三代头孢菌及单酰胺类药物的酶，产生ESBL的细菌对上述抗生素耐药。

ESBL主要存在于大肠杆菌和肺炎克雷伯菌等革兰阴性菌中。当前第29页\共有48页\编于星期二\22点二.耐药机制及耐药性监测试验⑵超广谱-内酰胺酶检测（ESBL）方法：纸片扩散法和稀释法意义：ESBL阳性预示对头孢泊肟、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松和氨曲南等抗菌药物无效。当前第30页\共有48页\编于星期二\22点二.耐药机制及耐药性监测试验⑶琼脂筛选试验（agarscreentest）是以单一药物单一浓度检测细菌耐药性，如耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌检测。当前第31页\共有48页\编于星期二\22点二.耐药机制及耐药性监测试验⑷耐药基因检测如MRSA中mecA基因检测当前第32页\共有48页\编于星期二\22点耐药性统计和分析

WHONET

建立本院、本地区和本国的细菌耐药性监测数据库和网络当前第33页\共有48页\编于星期二\22点

第三节

医院感染检查（NosocomialInfection）当前第34页\共有48页\编于星期二\22点医院感染检查1.定义:病人入院时不存在,也不处于潜伏期，而在医院内发生的感染，包括医院内获得而在出院后发病的感染。当前第35页\共有48页\编于星期二\22点医院感染检查2.医院感染常见病原体（细菌）：革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌（MRSA）、厌氧菌和深部真菌等当前第36页\共有48页\编于星期二\22点医院感染检查3.感染源:外源或内源性病原体外源性：其他住院患者、医务人员、探望者（多为条件致病菌）内源性：患者自身皮肤、口腔、咽部和胃肠道固有的正常菌群等（免疫力低下患者）当前第37页\共有48页\编于星期二\22点医院感染检查4.常见临床类型下呼吸道感染尿路感染手术切口感染胃肠道感染血液感染皮肤和组织感染当前第38页\共有48页\编于星期二\22点医院感染检查5.感染途径：接触传播空气、飞沫传播经注射或输液、输血传播经口传播当前第39页\共有48页\编于星期二\22点医院感染检查6.易感因素：年龄：老年和婴幼儿慢性疾病患者基础疾病或医源性烧伤或创伤产生坏死性组织大量使用抗生素接受侵袭性治疗操作当前第40页\共有48页\编于星期二\22点医院感染检查7.医院感染常见病原菌监测尿液标本病原菌——大肠埃希菌，变形杆菌，肺炎克雷伯氏菌，肠球菌，金黄色葡萄球菌，铜绿色假单胞菌菌落计数>104/ml以上——尿路感染当前第41页\共有48页\编于星期二\22点医院感染检查7.医院感染常见病原菌监测痰（咽拭子）培养病原菌——肺炎链球菌，肺炎克雷伯氏菌，大肠埃希菌，肠球菌，金黄色葡萄球菌，铜绿色假单胞菌等半定量3+~4+为致病菌，1+~2+怀疑为污染菌当前第42页\共有48页\编于星期二\22点医院感染检查7.医院感染常见病原菌监测痰（咽拭子）培养

甲型溶血性链球菌是亚急性细菌性心内膜炎的主要致病菌当前第43页\共有48页\编于星期二\22点医院感染检查7.医院感染常见病原菌监测粪培养病原菌——金黄色葡萄球菌，伤寒及其他沙门氏菌，志贺氏菌属，致病性大肠埃希菌，霍乱弧菌，副溶血性弧菌，弯曲菌，念珠菌等当前第44页\共有48页\编于星期二\22点医院感染检查7.医院感染常见病原菌监测血培养：病原菌：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等单次血培养不易区分污染菌或感染菌。两次培养均为同种皮肤正常菌群可认为感染菌。当前第45页\共有48页\编于星期二\22点医院感染检查8.医院环境监测和消毒灭菌监测空气培养：沉降法