临床血液学检验技术-第七章-第一节-血管壁和血管内皮细胞的检验-课件

第一章造血及造血调控第一节造血器官与造血微环境临床血液学检验技术第七章血栓与止血疾病检验技术第一节血管壁和血管内皮细胞的检验第一节血管壁和血管内皮细胞的检验一、出血时间检测

二、血管性血友病因子检测三、血浆内皮素-1检测四、血浆血栓调节蛋白检测五、血浆6-酮-前列腺素F1α和去甲基6-酮-前列腺素F1α

检测

目录重点提示血管壁和血管内皮细胞检验方法vWF的检测及其诊断血管性血友病的意义PT、APTT、TT检测的临床意义血栓弹力图仪的原理、主要检测参数及临床意义第一节血管壁和血管内皮细胞的检验一、出血时间检测【实验原理】出血时间（bleedingtime,BT）是指皮肤受特定条件的外伤后，出血自行停止所需的时间。

第一节血管壁和血管内皮细胞的检验【参考区间】模板法：6.9±2.1分钟【临床意义】

1.BT延长见于血管壁和血小板的初期止血缺陷。2.BT缩短见于某些严重的血栓前状态和血栓性疾病。第一节血管壁和血管内皮细胞的检验一、出血时间检测【应用评价】⒈BT是筛查血管与血小板相互作用有无异常较为敏感的试验。⒉BT实验操作较为复杂、皮肤切口稍大，临床开展受到一定限制，一般不作为常规筛查试验。⒊试验前一周应停用抗血小板药物。第一节血管壁和血管内皮细胞的检验一、出血时间检测二、血管性血友病因子

血管性血友病因子（vonWillebrandfactor,vWF）是一种多聚体大分子蛋白，具有与胶原、肝素、FⅧ轻链、血小板膜糖蛋白GPIb及GPⅡb-Ⅲa、瑞斯托霉素等结合的多个功能区。vWF的分析包括含量、活性、功能、多聚体等多项检测。

第一节血管壁和血管内皮细胞的检验（一）血浆vWF抗原（vWF：Ag）含量（二）血浆vWF活性（vWF：activity，vWF：A）（三）vWF的功能分析（四）vWF多聚体分析（五）基因诊断

第一节血管壁和血管内皮细胞的检验二、血管性血友病因子

（一）血浆vWF抗原（vWF：Ag）含量【实验原理】胶乳颗粒增强的免疫比浊法。在待测血浆中加入包被有抗vWF：Ag单克隆抗体的胶乳颗粒，后者与vWF：Ag结合后发生凝集反应，胶乳颗粒凝集的强度与血浆中的vWF：Ag含量成比例关系，通过全自动凝血分析仪可以快速测定血浆vWF：Ag的含量，结果以对照血浆的百分比表示。第一节血管壁和血管内皮细胞的检验二、血管性血友病因子

（二）血浆vWF活性（vWF：activity，vWF：A）

【实验原理】用抗vWF的血小板结合位点的单克隆抗体包被的胶乳颗粒与待测血浆中的vWF反应，胶乳颗粒发生凝集的程度与vWF活性成比例关系。第一节血管壁和血管内皮细胞的检验二、血管性血友病因子

（三）vWF的功能分析

1.血浆vWF瑞斯托霉素辅因子检测：比浊法。

2.瑞斯托霉素诱导的血小板凝集试验：血小板聚集仪法。

3.vWF的胶原结合能力：ELISA定量检测与胶原结合的vWF。

4.vWF的FⅧ结合能力：用抗vWF的单克隆抗体包被酶标反应板，加入去除FⅧ的待测血浆，形成抗vWF-vWF的复合物，再加入一定浓度的重组FⅧ，然后通过ELISA定量vWF结合的FⅧ量，结果以对照血浆的百分比表示。第一节血管壁和血管内皮细胞的检验二、血管性血友病因子

（四）vWF多聚体分析【实验原理】用SDS琼脂糖凝胶电泳检测vWF的功能多聚体，然后通过放射自显影或Westernblotting鉴定和分析各种多聚体区带。（五）基因诊断【实验原理】常用PCR和突变分析检测vWF的基因缺陷。第一节血管壁和血管内皮细胞的检验二、血管性血友病因子

【参考区间】（1）血浆vWF:Ag(血凝分析仪检测)：41.1%～125.9%(O型)；61.3%～157.8%(A+B+AB型)（2）血浆vWF:A(血凝分析仪检测)：38.0%～125.2%(O型)；49.2%～169.7%(A+B+AB型)（3）血浆vWF:Rc:70%～150%；

vWF:CBc:;vWF:FⅧBC：RIPA：0.5g/L，Ris＜20%；1.5g/LRis＞60%第一节血管壁和血管内皮细胞的检验二、血管性血友病因子

【临床意义】（1）遗传性或获得性血管性血友病（vWD）（2）血栓性疾病（3）急性时相反应第一节血管壁和血管内皮细胞的检验二、血管性血友病因子

【应用评价】（1）在vWF检测中，vWF：Ag的定量最常用（2）vWF：RC和RIPA是最常用的vWF功能试验，vWF多聚体分析是诊断vWD最为特异的试验

三、血浆内皮素-1

【实验原理】ELISA双抗体夹心法测定含量

【参考区间】

血浆ET-1＜5ng/L(ELISA法)第一节血管壁和血管内皮细胞的检验【临床意义】增高：心绞痛、心肌梗死、缺血性脑血管病、原发性高血压病、高脂蛋白血症、肾功能衰竭、肺动脉高压休克及DIC等。【应用评价】可作为反应血管内皮损伤程度的一项指标，用于心血管病患者的疗效判断、预后估计等。第一节血管壁和血管内皮细胞的检验

三、血浆内皮素-1

四、血浆血栓调节蛋白（thrombomodulin，TM）

（一）血浆血栓调节蛋白抗原含量（TM：Ag）测定

【实验原理】ELISA法或放射免疫分析法（RIA）【参考区间】血浆TM:Ag20～35µg（RIA）第一节血管壁和血管内皮细胞的检验（二）血浆TM活性测定【实验原理】通过自动凝血分析仪动态监测吸光度的变化量可测定TM的活性。【参考区间】血浆TM:A68%～120%【临床意义】升高与损伤程度相关；减低见于TM缺乏症,患者血栓性疾病发病率高。。【应用评价】可作为血管内皮损伤的最佳标志物之一。第一节血管壁和血管内皮细胞的检验四、血浆血栓调节蛋白（thrombomodulin，TM）

五、血浆6-酮-前列腺素F1α和去甲基6-酮-前列腺素F1α

【实验原理】ELISA竞争法

【参考区间】

1.血浆6-keto-PGF1α：10.6～35.2ng/L2.血浆DM-6-keto-PGF1α：10.9～43.3ng/L3.尿液DM-6-keto-PGF1α：128～172ng/mg(尿肌酐)第一节血管壁和血管内皮细胞的检验【临床意义】减低见于先天性花生四烯酸代谢缺陷或口服阿司匹林、血栓