leica las x宽场版中文使用说明

X. 简 加密 启动LAS 调用全文检 使用进行检 用户界面的一般结 光路设 Image菜 EM z-菜 WideFocus图像栈设 时间序列采 多位点采 拼图模式采 拼图模式图像

配 开启系 打开软 找到标本焦平 头分辨 模 图像优 颜色设置 通道添 三维图像栈......................... LASX的基LASＸ整个过程中

和高级荧光应用软件LASＸ的请参考LASX的onlinehelp的结构和使用。应的插图是图1的2。第20页。注意注意不当操作会导致显微镜和附件对于由用途和不按照操作说明使用造成的损坏及风险，制造商LASLASX(高级荧光应用软件完整的系统将图像的技术完合性无效。

!注意!注意已包括）来。启动LAS!注意图 LASX图LASX系统开始运行。

调用onlinehelp的方法有三点击功能区图标CTRLOnlinehelp会直接打开相对应功能的 Index索引输入您想要查询内容的，系统会自动搜索与该在系统给出的列表中选取感条目，双击或选择条目再点击Disy，得到Search搜索输入术语或词句，点击LISTTOPICS，出现与相关的层AboutUser框,onlinehelp的显

PinholeANDPinholeORPinholeNEARPinholeNOT但不含LASXFileHelpLeicaAF6000FRETSELiveData

功能界面（箭形图标）:建立在步骤的顺序安排与图像和数据处ConfigurationAcquire图像Tabarea选项卡区域Experiments:以 显示当前和打开的。Setup:当前实验的硬件设置Acquisition:图像时的参Experiments:以 显示当前和打开的。Tools:当前操作步骤里面所Experiments:以 显示当前和打开的。Tools:当前操作步骤里面所Graphs图表:对感区Statistics统计:对感区

Workingarea工作区:该区域在Viewerwindow查看窗口:显示采点击Acquire箭形图标后再点击mode菜单中进行设置了：Fig.2:acquisitionmode模xy

Scan）和多点采图模式（Markand

图 光路设双击，从LUT(色彩查找表Fig4耦合有两个短滤块滑板的外置1

LASX能够同时控制多达四个外置荧光转轮(见图4)。图 FFIM的调5档：10050%,25%,*在LASX光路设置菜单中选择需要的6需要选择Usesequencerboard选项制下进行，Sequencercancontrolthewholesequence从红色变为绿色。其他通道可以通过点击"+"按钮来创FCr1为例）。图 示例：三个荧光通道实验的设

您可以自由定义多达8个通道。且可所有通道的组合包括参数都可以通过Load/SaveSettings菜单来保存并Image菜单用来设置头相关参数图 Image菜 Binning2x2就是4个像素(x方向2个像素*y方向2个像素)。图会选择Binning2或无Binning。Exposure时间滑块可以对每个通道的时间分别设置。为了能在Gain设置头的电子增益

Intensity为照明光路的光强设置。点击激活动态直方图。动态LASX中使用了高速控制箱，前提是:头必须是高速控制箱支当在高速模式下使用外置荧光滤块转轮，FFIM光强设置可以不同。Usesequencerboard选上(9)下进行，Sequencercancontrolthewholesequence从红色变为绿色。图 ExperimentSettings实验设ExperimentSettings框处于*

做多种荧光(FCrs)成像实验需要所有荧光使用相同的时间时。选择（SameExposureforprobes光时间）就可以防止不设置了不同的时间。任意荧光通道的的荧光通道，确保了相同的图10 当前通道图像，而直接点击CaptureImage会依次对每个定义的Shuttercontrolofsequencer*中选!注意EM通过Image菜单栏中的GainEMGain滑块来调节EMCCD的采图条件。图 EMCCD的Image菜单(=借助于定序器进如果使用了的外置荧光滤块转轮*

点击则Z-stack菜单被激活，图 定义z-z-PositionSuperZGalvoFocus*(不者PiezoFocus*(在ｚ轴方向移动物z-WideFocus(显微镜z轴驱动)或者FineFocus(SuperZGalvoFocusPiezoFocus)（如果系置层切结束位置点击End。Focus按钮可以用来一个中间焦注意图像栈的总高度在z-菜单的下半部用点击SystemOptimized系统会根据z-stepsize来设置层切步进或层数来*SuperZGalvoPiezoFocus

通过FineFocus来进行图像栈的设置，WideFocus(5.3.1)差不多。只是FineFocus仅通过鼠标而不是显微镜的z-drive或SmartMove动z-菜单中黄褐域到想要的位置。图 直至点击stop来终止。Intervl的时间间隔大于Minimize值）。HighSpeed*，则整个时所有通道必须使用一样的Gain和当需要z-stack时Fine如果能够满足这些要求，HighSpeed一个绿域显示高速控制箱控制整

14"Sequencercancontrolthewhole每张图像之后，相关联的图像数据要从头传递到电脑内存中。这头类型，binning,分辨率，ROI1制动器移到下一张图像需要的位置。大部分情况下，头传递时间*仅在系统配有高速控制箱的情况下**SuperZGalvoPiezo外置荧光滤块转轮(相邻位置滤块转换时间为27ms)SuperZ1μm40Piezo(1μm3LeicaAMTIRFLeicaEL6000快速光闸(6。后期放大Binning和头

箱控制(图14)。比如:z-stack实验，状态区可以优化图像所花时间。的载物台x,y,z坐标保存下来。统依次到达每个位点并图像。15Markand目镜图像=头图AndoriXonDFC365DFC450DFC310调。(参见第七章"初次实验"图像预来定义。典型的就是感区域的右

与MarkandFind多位点采图的菜单16Tile按钮，打开Stage设置)菜单中选择CustomTileScanMergeSettings(自定义拼图扫描合并图 Stageconfiguration载物台设之后您很快就可以掌握图像的方红固绿复合复染）为例来演示。一个快速的xyzλ扫描，双像。FineFocus(Piezo或SuperZ)*用来LASXonlinehelp注意在该实验中使用的是40x或63xHCXPLAPO63x/1.30GLYC B/G/R；HP；滤块"K"*

在开始菜单中选择LASX来打开LASX软件。图 LASX载物台初始图 LASX用户界TL-BF(明场)图 Contrastmethod反差方Setup可用就选择40x63x物镜：图 物镜选图22头设在SetDigitization(23.1)中选择数位值12bits(使用级联头16bits)X关掉

图23头设Acquisition24:Acquire25:AcquisitionAcquisitionMode中除了x,y按钮外还选择z按钮。x和y的图26模式

使用EL6000时波长是通过内置荧光（IFWContrastMethodFLUO(27.1)。EFWLightPathSettings菜单中选择需要的滤块(27.4)激活对应。在激发滤色片中选择激发滤色片G图 光路设置菜

图 Image图 Image块转轮透光率设为100%）。图 调节100%,50%,25%,12.5%,!注意在Image菜单中设置参数

图 Image图 Live或Stop按看到活图了(见图33)。图 图像预注释通过SmartMove*将标本移到您感*

中的滑块来调节时间对图像本时间在100ms到200ms。观察图 Image菜!注意减少时间可以保护标本图 Live或Stop按注释精/快绿(Safranin/FastGreen)两种。(FCr1和FCr2)。

中定义为GFP)：36FCr1(38.1)点击鼠标右键图 保存设39另一个荧光。图 添加荧光通

ContrastMethod中选择FLUO。Image菜单中选RIFW或选择滤块转轮的位置为R(EFW)骤6.6图像优化中已讲述。图 设置颜色和名