香樟籽乙醇提取物成分及抑菌活性探讨

毕业论文PPT格式建议如下：一、研究目的二、技术路线三、研究材料四、研究方法五、研究结果六、主要结论七、创新点及今后努力方向八、致谢香樟籽乙醇提取物成分及其抑菌活性研究

ChemicalcompositionandAntibacterialactivityoftheEthanolextractsofCinnamomumcamphoraseed

系所：生物科学系专业：生物科学学号：05124006

作者姓名：杨顺指导老师：余海忠一、研究目的随着社会的发展和我国综合国力的提高,人们对生活质量的要求日益提高,对生态农业、绿色食品、持续农业、生物多样性保护及环境保护的呼声越来越高。为了与我国可持续发展策略相适应,研制开发的新农药必须具有安全性高、残留低、无公害、生物活性高、选择性高、使用费用低等特性。植物性农药由于其原材料取自于天然植物,自然界有其顺畅的降解途径,具有无残留、无公害、不易产生抗药性等优点,可广泛用于农作物病虫害防治。

香樟树系樟树属的常绿乔木植物,是我国亚热带绿阔叶林的主要树种之一,具有驱虫、防腐耐蛀的功能,樟树籽可提取色素、香料或樟油等物质制成植物农药，樟树籽为可再生资源,其应用前景广阔。我国很早就将樟树籽作为药物用于治病,并认为樟树籽有驱风散寒、行气止痛之功效，主要含有癸酸(C10)的樟树籽脂肪油已被试制成碳酸甘油脂,用于治疗脂肪代谢紊乱病症,并能降血脂及胆固醇。那么，这种对人体起作用的香樟籽,它的乙醇提取物对绿色木霉，酵母菌，黑曲霉，木质层孔菌，枯草芽孢杆菌等微生物会不会有抑制作用呢？其作用方式又如何？因此，本研究拟就,香樟籽乙醇提取物成分和抑菌活性展开探讨。在实验中以香樟籽提取物为抑菌剂，对上述微生物生长及孢子萌发的影响进行试验，以研究其抑菌作用。香樟树籽二、技术路线

三、实验材料1、供试植物香樟籽（Cinnamomumcamphoraseeds）采自湖北襄樊学院校内。2、供试微生物真菌：绿色木霉Trichodermaviride啤酒酵母Saccharomycescerevisiae黑曲霉Aspergillusniger木质层孔菌Fomesligneus细菌：枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis以上五个菌株由襄樊学院化学工程与食品科学院廖雪义老师提供，实验室置冰箱中待用。1、香樟籽的粗提方法本实验利用醇浸法提取，具体步骤如下：（1）将采摘的紫色香樟籽盛在白瓷盘，置于鼓风干燥箱中烘烤（50℃），使其干燥。然后用微型植物粉碎机粉碎（或用研钵研碎），得到粉末。（2）将上述粉末分装到250ml磨口三角瓶中（0.25倍体积），然后加无水乙醇浸泡，间隔24h收集初提液，并在原瓶中加新的无水乙醇浸泡，收集所有初提液，并抽滤得过滤液。（3）用旋转蒸发仪减压浓缩上述过滤液,得膏状物。四、实验方法2、气相色谱及质谱条件

香樟籽无水乙醇提取物组分的测定在襄樊市产品质量监督检验所进行，所用仪器为气相色谱质谱联用仪。气相色谱条件：DB-5ms弹性石英毛细管色谱柱(0.25mm×30m，0.25μm)。升温程序：初始温度600C保持10min，以10C·min-1至800C，保持15min，以20C·min-1至2000C，以200C·min-1至2200C，保持5min。载气为氦气，流速0.8ml·min-1；进样口温度2200C。质谱条件：离子源为EI，电离电压70eV，离子源温度2000C，溶剂延迟时间，7min，质谱扫描范围m/z40～400；扫描周期0.5S。3、生长速率测定法

1）从试管中挑取原种接种与液体培养基中，在250C，光照条件下摇床培养。培养时间，不同的菌培养时间不同，以锥形瓶中有浑浊为宜（细小颗粒悬浮）。

2）固体培养基融化后倒平板，待培养基凝固后吸取1ml菌液涂布，然后在250C，光照培养箱中培养。倒平板时，倒一半即可，摇均形成一薄层，以利于打菌饼。

3）取45ml土豆滤液于100ml锥形瓶中，加入0.9g琼脂粉。同样做15瓶；取75ml土豆滤液于100ml锥形瓶中，加入1.5g琼脂粉。同样做3瓶。然后于1210C灭菌30min。

4）PDA固体培养基加热融化后，在恒温水浴锅中降温至500C左右。用10ml量筒（也可用移液枪）量取5ml香樟籽无水乙醇提取液，倒入装有45mlPDA培养基的锥形瓶中；用10ml量筒量取8.33ml对照液，倒入装有75mlPDA培养基的锥形瓶中，即比例为9：1。倒平板时，倒一半即可，摇均形成一薄层，以利于能平均倒3份平板。注：倒平板时，应在无菌环境中操作，但实验在酒精灯旁进行时，由于对照液（如乙醇）易挥发燃烧，靠的太近会烧着。

5）在酒精灯旁进行，打孔器沾酒精后烧着灭菌，待降温至室温后再打菌饼。

6）接种环灭菌后挑取菌块于倒平板的培养皿中，每皿2块，菌饼反向置于培养基上，光照培养箱培养。各菌培养条件见表1。7）观测时应在同一地方，同一人，同一把米尺测量，以尽量减少误差。

72h后观测；8）重复以上步骤，对五种供试菌种分别定时进行测定。

9）生长抑制率的计算方法：4、孢子萌发法

本实验采用悬浮液测定法，具体步骤如下：

1）取17ml土豆滤液于100ml锥形瓶中，每种香樟籽无水乙醇提取液做6瓶，然后于1210C灭菌30min。

2）用无菌生理盐水冲洗长满孢子的培养基，将孢子冲进锥形瓶中，用纱布滤去杂质。在每个装有液体培养基的锥形瓶中加入1ml孢子悬浮液，其中5瓶再加入2ml香樟籽无水乙醇提取液，另1瓶加对照液2ml，达到9：1比例，然后在摇床中培养。培养温度比表1中的最高温度高10C（孢子培养比病原菌温度高有利于萌发）。

3）孢子萌发(以孢子芽管长度大于孢子短半径者为萌发)后，用无菌水稀释到适当浓度(以10×10低倍镜下,每个视野30～40个孢子为宜)[7]，加到血细胞计数板上，在10*10倍显微镜下观测。

4）孢子抑制率的计算方法：1、香樟籽无水乙醇提取物组分

在前述色谱条件下分析，经计算机检索(质谱数据库NIST147,NIST27)及人工解析质谱并与标准图核对，用峰面积归一化法定量测出它们的相对含量，结果见表2。五、实验结果2、香樟籽无水乙醇提取物对供试菌菌丝生长的抑制活性

由表3可知，在5种供试菌中，香樟籽无水乙醇提取液在浓度为0.016g/ml时对黑曲霉的抑制率最高，为49.42%，对木质层孔菌的抑制率最小为7.14%；在浓度为0.008g/ml时对黑曲霉的抑制率最高，为4.65%，对啤酒酵母，木质层孔菌，枯草杆菌的抑制率最小，都为0；且对5种供试菌的抑制作用都随提取液浓度的升高而增强。培养72h后的黑曲霉（药液浓度0.008g/ml）菌饼接入到含不同浓度药液的培养基中培养3、香樟籽无水乙醇提取物对供试菌孢子萌发的抑制活性由表4可知，在5种供试菌孢子中，香樟籽无水乙醇提取液在浓度为0.016g/ml时对黑曲霉孢子的抑制率最高，为60.00%，对木质层孔菌孢子的抑制率最小为12.00%；在浓度为0.008g/ml时，对绿色木霉孢子的抑制率最高，为12.50%，对啤酒酵母孢子的抑制率最小，为0；且对5种供试菌孢子的抑制作用都随提取液浓度的升高而增强。六、主要结论采用气相色谱质谱联用仪分析香樟籽无水乙醇提取物的主要组分为：癸酸(18.44%)、月桂酸(14.87%)、肉豆蔻酸(10.88%)、2-莰酮(10.46%)、a-松油醇(8.69%)、黄樟油素(8.51%)、辛酸(7.90%)、β-蒎烯(3.57%)、柠檬烯(2.52%)、莰烯(2.48%)等37种化合物。(2)以提取物对供试菌菌丝生长的抑制率为考察指标，在5种供试菌中，香樟籽无水乙醇提取液在浓度为0.016g/ml时对黑曲霉的抑制率最高，为49.42%，对木质层孔菌的抑制率最小为7.14%；在浓度为0.008g/ml时对黑曲霉的抑制率最高，为4.65%，对啤酒酵母，木质层孔菌，枯草杆菌的抑制率最小，都为0；且对5种供试菌的抑制作用都随提取液浓度的升高而增强。(3)以孢子萌发抑制率为考察指标，在5种供试菌孢子中，香樟籽无水乙醇提取液在浓度为0.016g/ml时对黑曲霉孢子的抑制率最高，为60.00%，对木质层孔菌孢子的抑制率最小为12.00%；在浓度为0.008g/ml时，对绿色木霉孢子的抑制率最高，为12.50%，对啤酒酵母孢子的抑制率最小，为0；且对5种供试菌孢子的抑制作用都随提取液浓度的升高而增强。七、创新之处（1）香樟树具有速生性、观赏性、长寿性等特性,故种植极为普遍.自然落下香樟籽,数量很大，已经成为城市环境整治的一大负担。本实验的研究目的是科学地利用这些“废物”，对城市环境的保护和经济发展将会有重要的意义。（2）目前，香樟籽极少数被采集入药，对其研究主要集中在油脂产品的开发上，但对其活性物质参与农业用药剂这方面的研究为数不多，鲜见报道。因此，本实验拟通过对香樟籽活性物质对供试真菌和细菌控制展开深入研究，以期发现一种新型天然抗菌剂，为保护环境、维护生态平衡、恢复和改善人类生存环境提供技术支持和保障。需改进的地方（1）醇浸法对香樟籽活性成分的提取有较高的产量,但处理过程比较麻烦、复杂,且所需溶剂数量较多，故需要对此提取方式进行优化。另外，也可以采用水蒸汽蒸馏法进行提取，方法简便。（2）本实验只局限于小试范围,建议在中试时对提取的加工工艺、设备技术等方面作进一步的研究。（3）应该多选几种代表性的细菌做抑制实验，使研究结果更准确。同时需要测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度（MBC），为最佳用药量提供一定依据。八、致谢

本文是在余海忠老师悉心指导下完的，从论文选题、实验设计到实验材料的采集、实验的实施、论文的撰写，导师都倾注大量的心血，导师学术上严谨的治学态度，对实验操作的严格要求以及对科学真理的执着追求的精神，一直鞭策着我努力奋进，并将使我受益终身，在此向导师表示由衷的感谢！在论文期间襄樊学院化学工程与食品科学院张火云、廖雪义、肖作安等老师都给予我热情的指导，并帮我解决实验过程中遇到的困难；另外在实验过程中还得到本实验室刘远琳等同学的热情支持和帮助以及班上同学吴飞鸽、邱川、胡光文给予的帮助，在此一并向他们表示衷心的感谢！感谢化学工程与食品科学院各位领导、老师在大学四年里对我的谆谆教导、关心支持！《化妆品术语》起草情况汇报中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所一、标准的立项和下达时间2006年卫生部政法司要求各标委会都要建立自己的术语标准。1ONE二、标准经费标准研制经费：3.8万三、标准的立项意义术语标准有利于行业间技术交流、提高标准一致性、消除贸易误差，作为标准体系中的基础标准，术语标准在各个领域的标准体系中均起着重要的作用。随着我国化妆品卫生标准体系建设逐步加快，所涉及的术语和定义的数量也在迅速增长，在此情形下，化妆品术语标准的制定就显得尤为重要。四、标准的制订原则1.合法性遵守《化妆品卫生监督条例》、《化妆品卫生监督条例实施细则》中关于化妆品的定义。2.协调性直接引用或修改采用的方式，与相关标准中的术语和定义相协调。3.科学性对于没有国标或定义不统一的术语，在定义时体现科学性的原则。4.实用性在标准体系中出现频率较高，与行业联系较紧密的术语优先选用。五、标准的起草经过

第一阶段：资料搜集

搜集国内外相关法规、标准、文献并对国外文献如美国21CFR进行翻译。第二阶段：2007年末形成初稿

初稿内容包括一般术语、卫生化学术语、毒理学术语、微生物术语、产品术语、人体安全和功效评价术语，常用英文成份术语等７部分。第三阶段：专家统稿1.2007年12月第一次专家统稿会（修订情况：1.在结构上增加原料功能术语、相关国际组织和科研机构等内容；2.在内容上增加一般术语、产品术语的种类，将化妆品行业的新产品类别纳入本标准；3.对于毒理学、卫生化学、微生物学术语进行修改；4.删除与化妆品联系不紧密、无存在必要的常用英文成分术语。2.2009年1月第二次专家统稿会会议意见：1.修改能引用国家标准的尽量引用国家标准；对存在歧义的个别用词进行修改。2.删除由于本标准中的“产品术语”一章和香化协会所制定的某个标准存在重复，因此删除“产品术语”一章的内容；对“原料功能术语”的内容进行梳理，删除了20余条内容。3.增加专家建议增加“化妆品限用物质”等若干项术语。第四阶段：征求意见2009年2月面向全国公开征求意见。第五阶段：征求意见的处理与形成送审稿。在征求意见的处理阶段再次征求了相关专家的意见。六、标准的内容依据1.《化妆品卫生监督条例》、《化妆品卫生监督条例实施细则》;2.《化妆品卫生规范》;3.美国21CFR；4.相关领域国家标准如：GB5296.3-2008消费品使用说明化妆品通用标签，GB/T14666-2003分析化学术语等；5.国内外化妆品的相关文献，如《化妆品监督管理及安全性评价》等。七、标准的结构和主要内容（一）结构：1.范围2.一般术语3.毒理学试验方法术语4.卫生化学检验方法术语5.微生物检验方法术语6.人体安全性和功效性评价术语7.常用原料术语8.缩写9.中英文索引（二）主要内容：1).一般术语39条涉及化妆品的基本定义、化妆品生产和监督管理中出现频率较高的术语。2).毒理学试验方法术语40条收录了《化妆品卫生规范》中涉及的术语，以及在毒理学领