实验a淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测

实验6a-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测第二部分

酶的应用实验目的:1.制备固定化a-淀粉酶2.进行淀粉水解的测定1、固定化酶技术。即将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。2、固定化酶技术的优点：（1）使酶既能与反应物接触，又能与产物分离；（2）固定在载体上的酶可以被反复利用。（一）固定化酶3、固定化酶的性质：（1）稳定性增加，热稳定性、对蛋白酶的抵抗能力、对各种试剂的稳定性都不同程度增加。（2）PH活性曲线和最适PH的变化，最适PH可能向酸性或碱性移动。（3）底物专一性变化，如蛋白酶对酪蛋白等大分子底物的催化活性降低，但对小分子底物催化活性差别不大。共价偶连法3.固定化酶方法吸附法交联法包埋法实验原理：本实验是用吸附法将a-淀粉酶固定在石英砂上，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色表明水解产物糊精生成淀粉α-淀粉酶糊精β淀粉酶葡萄糖糖化淀粉酶麦芽糖这里使用的是枯草杆菌的a-淀粉酶，其作用的最适温度为:50~75℃；最适PH为5.5~7.5遇碘显蓝色遇碘显红色遇碘不显色（二）实验材料:1.a-淀粉酶的固定化:在烧杯中将5mga-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中.由于酶不纯,可能有些不溶物.再加入5g石英砂,不时搅拌,30min后装入1支下端接有气门心并用夹子封住的注射器中(石英砂体积约4ml).用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶,流速为1ml/min.反应柱固定化酶气门心夹子5ml注射器2.可溶性淀粉溶液:取50mg可溶性淀粉溶于100ml热水中,搅拌均匀.3.5mmol/LKI-I2溶液：称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml完全溶解后装入滴瓶中步骤:1.将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上,用滴管滴加淀粉溶液,使淀粉溶液以0.3ml/min的流速过柱.在流出5ml后接收0.5ml流出液,加入1~2滴KI-I2溶液,观察颜色.用水稀释1倍后再观察颜色.反应柱固定化酶气门心夹子5ml注射器淀粉2.实验后,用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱,放置在4℃冰箱中,几天后再重复上述实验,看是否有相同的结果.课后思考1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶?2.耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途?可在试管中加入1ml可溶性淀粉，再加几滴淀粉酶柱流出液，保温几分钟后用碘液检验。如仍显蓝色，则流出液中没有淀粉酶了。可以在高温下使加速淀粉水解，而且酶不会因高温而失活，所以可在一些需要高温加热同时又要水解淀粉的反应中使用。3.如何测定木瓜蛋白酶亲和柱水解蛋白质？蛋白质被蛋白酶水解后肽键减少，用双缩脲试剂测定因肽键减少而发生的颜色变化，即可了解酶的水解作用1、研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的。如将从大肠杆菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制剂，可以用来降解残留在土壤中的有机磷农药，与用微生物降解相比，其作用不需要适宜的（）A、温度B、PHC、水分D、营养D随堂巩固2、目前，日用化工厂大量生产的酶制剂，其中的酶大都来自A、化学合成B、动物体内C、植物体内D、微生物体内D3.酶的固定方法不包括()。A.将酶吸附在固体表面上B．将酶相互连接起来C．将酶包埋在细微网格里D．将酶制成固体酶制剂，如加酶洗衣粉中的酶D4.关于固定化酶的叙述不正确的是()