实验植物的组织培养

实验植物的组织培养第1页，课件共27页，创作于2023年2月

我国用花药培养法先后培育出优质高产的经济作物、粮食和蔬菜等新品种，广泛应用于果树和花卉的快速繁殖。借助于组织培养生产人工种子，解决某些作物品种繁殖力差、结子困难或发芽率低等问题。第2页，课件共27页，创作于2023年2月

生产药物、食品添加剂、香料、色素和杀虫剂等。例如：紫杉醇，生物碱、紫草素等。转基因植物的培育植物去病毒第3页，课件共27页，创作于2023年2月实验：菊花的组织培养第4页，课件共27页，创作于2023年2月第5页，课件共27页，创作于2023年2月第6页，课件共27页，创作于2023年2月（用于配置发芽和生根培养基）第7页，课件共27页，创作于2023年2月第8页，课件共27页，创作于2023年2月第9页，课件共27页，创作于2023年2月第10页，课件共27页，创作于2023年2月植物组织培养用的培养基，含有植物生长发育所需要的各种营养物质，这些营养物质同样为细菌等微小的生物提供了适合的营养。在这种培养基上，细菌等微小的生物比植物细胞具有更强的新陈代谢能力，它们比植物细胞生长、繁殖得更快，而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。因此，植物组织培养要想取得成功，必须有效地防止细菌等的污染，保证培养材料、培养基、培养用具完全无菌。为了达到这一要求，就要在植物组织培养过程中进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作。第11页，课件共27页，创作于2023年2月实验材料用具培养瓶、镊子、超净台、灭菌锅、封口膜和橡皮圈、有棉球的广口瓶、酒精灯、三角漏斗、培养皿MS培养基萘乙酸、苄基腺嘌呤发芽培养基生根培养基第12页，课件共27页，创作于2023年2月制备MS固体培养基外植体消毒

接种

生芽定植五、实验过程

移栽锻炼

生根注意：对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。第13页，课件共27页，创作于2023年2月（一）制备MS固体培养基1、配制母液

按照MS培养基成分表,分别配制培养基的母液。

(1)大量元素母液(10倍液)

分别称取10倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约800ml热的（60-80℃）蒸馏水中。（一种成分完全溶解后再加入下一种，最后加水，定容至1000ml后装入试剂瓶中，冰箱内贮存备用）。(2)微量元素母液(100倍液)(3)铁盐母液（100倍液）(4)有机成分母液(100倍数)(5)生长素母液(6)细胞分裂素母液注意:配制培养基时，一定要注意调节pH。第14页，课件共27页，创作于2023年2月MS培养基配制方法返回第15页，课件共27页，创作于2023年2月你能说出各种营养物质的作用吗？同微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？问题思考微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。

微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。第16页，课件共27页，创作于2023年2月

（1）把装好的培养基的三角瓶放入高压灭菌锅中，盖好锅盖。

（2）设置灭菌温度参数为121℃，20min，开始灭菌。

2、灭菌无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键．

第17页，课件共27页，创作于2023年2月（二）外植体（离体组织）消毒

注意：对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。

1、70﹪酒精中浸泡10min，无菌水冲洗2、5%次氯酸钠溶液中浸泡，无菌水冲洗3、用另一5%次氯酸钠溶液浸泡5min，无菌水冲洗4、超净台中用无菌水多次冲洗第18页，课件共27页，创作于2023年2月（三）切段后接种

1、先用肥皂洗手，穿上工作服，戴上口罩和工作帽。2、放入培养瓶和灭菌后的接种用具(镊子、解剖刀、接种针)，把镊子、解剖刀、接种针插入内盛70%酒精的广口瓶中。第19页，课件共27页，创作于2023年2月

3、在酒精灯火焰旁，打开三角瓶，把花茎用无菌解剖刀切成几段，每段至少有一张叶片

4、切段插入培养基，诱导愈伤组织，盖上封口膜。

5、愈伤组织插入生芽培养基，盖上封口膜。6、用记号笔在瓶壁上写明培养材料、培养基代号、接种日期。注意事项

全部接种操作都是在无菌条件下进行的，所以要特别认真仔细，以防杂菌污染。第20页，课件共27页，创作于2023年2月（四）培养接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养。培养期间应定期消毒，温度控制在１８～２5℃，并且每日照光１4.5小时。观察记录生长情况，并照相存档。2-3周后将生长健壮的丛状苗在无菌条件下一个个转入生根培养基中，在上述条件下继续培养第21页，课件共27页，创作于2023年2月（五）移栽（六）栽培生根后，将苗移至消毒的草炭土或蛭石中，用玻璃罩或塑料布保持80%以上湿度，2-3天后打开玻璃罩低湿度锻炼转移至土中培养（定植）第22页，课件共27页，创作于2023年2月此时的组织或细胞为离体的，即细胞所生活的环境为液体有机物营养环境，而不是能体现其整个植物体的光能自养。在培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的形成，就具有了自养的能力，是由细胞到一个个体的演变过程。1、高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？2、培养过程中为什么需要进行光照?思考？第23页，课件共27页，创作于2023年2月1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧）4、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。3、在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？第24页，课件共27页，创作于2023年2月结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格第25页，课件共27页，创作于2023年2月六、结果分析与评价

（一）对接种操作中污染情况的分析

接种3～4d后，在接种操作中被杂菌污染的培养物会表现出被污染的现象。请学生适时统计污染率，分析接种操作是否符合无菌要求。第26页，课件共27页，创作于2023年2月（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化观察实验结果，看看是否培养出了愈伤组织，记录多长