输血科AB0血型鉴定：盐水介质凝集试验

输血科ABO/Rh血型鉴定盐水介质凝集试验操作规程1.目的规范AB0血型鉴定操作，保证临床用血的安全性和有效性。2.职责输血科工作人员负责AB0/Rh血型鉴定3.适用范围适用于输血科AB0/Rh血型鉴定标本4.实验原理根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及0型4种。利用红细胞凝集反应，通过正反定型准确鉴定ABO血型。正定型：是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应A抗原或／和B抗原；反定型：是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或和抗B。5.所需材料与设备5.1材料抗-A、抗-B、抗-D试剂；A、B、0型反定型红细胞；生理盐水；试管；5.2标本EDTA-K2抗凝血3ml5.3设备普通离心机；显微镜；6.操作步骤6.1将标本离心，分离血浆与红细胞，吸取红细胞制成3%悬液。6.2正定型：取试管3支，分别标注抗-A、抗-B、抗-D，用滴管分别加抗-A、抗-B、抗-D试剂各2滴于试管底部，再以滴管分别加入3%红细胞悬液于3支试管中，混匀。6.3反定型：另取试管3支，分别标注A、B、0细胞，用滴管分别加受检者血清各2滴于试管底部，再以滴管分别加入A、B、0型反定型红细胞，于3支试管中，混匀。6.4离心1500g*15s6.5轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞悬浮起来，先以肉眼观察有无凝集或溶血现象，如肉眼观察未见凝集现象，将反应物倒于玻片上，用显微镜观察。6.6ABO血型结果判定：见表一6.7Rh血型结果判定：红细胞与抗-D试剂凝集为抗-D阳性；无凝集为抗-D阴性。6.8凝集强度判定：4＋：红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；3＋：红细胞凝集成数小块，背景尚清晰；2＋：红细胞凝集分散成许多小块，背景可见游离红细胞；1＋：肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有许多游离红细胞；－：镜下未见凝集，红细胞均匀分布；混合外观凝集：指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍然分散分布。表一、ABO血型结果判定受检者红细胞+标准血清(正定)受检者血清+标准红细胞（反定）受检者血型抗A抗B抗A+BAcBcOc＋－＋＋－－A－＋＋－＋－B－－－＋＋－O＋＋＋－－－AB7.注意事项7.1单克隆抗体试剂和试剂红细胞（谱细胞除外）每天使用前必须与相应的红细胞和血清做阳性阴性对照，以检测其活性。7.2观察结果时既要看有无凝集或溶血现象，更要注意凝集强度，有助于A、B亚型、类B、Cis(顺式)AB的发现。7.3ＡＢＯ定型的正定型、反定型，其两种定型结果可互相验证和补充，使血型鉴定结果更为准确。

7.4在正反定型结果出现不一致时，需进一步鉴定。7.5正反定型不一致的原因：7.5.1标准血清效价太低、亲和力不强。容易将A、B、型误定为O型，AB型误定为A或B型。7.5.2RBC悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。7.5.3受检红细胞上抗原位点过少，如亚型；或抗原性减弱，见于白血病或恶性肿瘤，以及类B或cisAB等7.5.4受检血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验室温度过高，引起RBC呈缗钱状排列。7.5.5受检者血清中缺乏应有的抗A及/或抗B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。7.5.6各种原因引起的RBC溶解，误判为不凝集。部分溶血时可溶性血型物质中和了相应的抗体。7.5.7由细菌污染或遗传因素引起多凝聚或全凝聚，往往是正反定型不符的原因。7.5.8血清中有ABO血型以外的抗体，如自身抗体，常引起干扰。7.5.9老年人血清中抗体水平大幅度下降。7.5.10新生儿尚未形成ABO同种抗体，故三个月内的新生儿只做正定型。7.5.11获得性类B由于G-杆菌的作用，红细胞可获得类B活性7.5.12近期曾输过异型血，使患者血标本成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝集”。7.5.13嵌合体血型体内有两群红细胞，定型时显示“混合外观凝集”。7.5.14药物等因素药物、右旋糖酐及静脉注射某些造影剂凝集而类似凝集。7.6如无法找到正反定型不一致的原因，患者又需要紧急输血，则应该给患者输注Rh（D）同型的O型红细胞，同时请市血液中心协助鉴定。7.7如含有冷凝集素的患者血清，可采用37℃生理盐水洗涤3次，如果仍旧2弱凝集，再用42℃或45℃生理盐水洗涤1次，再进