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文档简介

分子生物学诊断技术进展张正北京大学人民医院1主要内容:分子生物学诊断技术在病原学检测中的应用简单介绍实验原理以PCR、荧光实时定量PCR、NASBA为例分子诊断技术在以下病原研究的应用进展乙型肝炎丙型肝炎结核分枝杆菌2病原学检测常用的实验室技术细胞培养与鉴定(“金标准”)、动物实验血清学、免疫学诊断技术电镜技术分子生物学诊断技术3分犯子躺生识物制学军诊信断穴技拴术啦方语法暮简揭介1、主体技术具体方法举例循环扩增PCR(聚合酶链反应)Real-timePCR,RT-PCR,巢式PCR,复合PCRPCR-ELISA,微孔板杂交,荧光探针标记法LCR(连接酶链反应)恒温NASBA(依赖核酸序列的扩增,主要用于RNA)SDA(链置换扩增术)CPT(环状探针技术)bDNA(枝链核酸信号放大系统)杂交捕获(如:检测HPV-DNA的试剂盒)4分但子挤诊拣断体技淡术圆方伪法句简锋介2荣、肠多鲁标辅靶司同恩时号检的测多拐重既P付C藏R毛楼细螺管弊电慎泳以公测兆序城分蛇析昂为杜基朽础贝的夸检您测族技笨术5分矮子权诊爬断驱技猛术含方州法字简敬介3芳、摔核碌酸述杂侍交D想N汽A登荧李光娇原界位肝杂陈交虏(玻F凯I被S你H血)将听标配记茂的勇探尺针点直欲接蝴原秤位庭杂溪交川到醉染晋色仿体电或豪D蚕N眨A容纤膏维洒切工片畅上午,朗再借用吧与酷荧答光吊素惩分撕子抱偶义联逝的鉴单慨克禾隆享抗妈体寻与朝探欧针匹分链子透特典异正性肠结姨合疲来早检谋测波D第N逗A餐序音列饲在缘瑞染胃色什体量或版D号N幻玉A胶纤捞维哥上运的令定品位目。线货性炮探娇针史分纤析听法含(铸L疗i巩P档A蛙)杂跌交飘保尊护溉分孕析薪法叨(欧H仿P亚A链)4嫩、别质伸谱利俱用垦色睁、爹质武谱集结盖合东P闻C岸R敢技胡术6分蚂子谎诊辱断倘的肃功晋能兴及喇扩育展病圆原阁的科诊堪断外和果鉴蒜别俩诊鞋断病客原扫分输型病擦毒册载算量策监仔测指-宫-践-馅个其体忆化察治后疗或的灾依梯据疗高效槐及摄预篇后吐标假志其活他港:揭病邀原危感楼染漫中碍发瞒生阻、雁发钓展响各铲阶泽段7分申子耳诊聋断翻的主功屯能史及云扩夸展疾灯病晴分坦型观及犬意颜义例锄如横:类H孔P且V锡(黄3斩0苗/敢1浴0糊0之)高集危六-英-伸-径1峰6芝,训1誓8爱,搏3梳1扰,瓜4追5低暮危掉-榆-患-欧6筒,泳1沙18分拾子误诊育断兵的核功则能抵及扯扩兄展病圣毒妻载镜量状与忠治芳疗例抖1但.-驻-般-眨北呆京屿地追坛宣医妄院沙谢璃尧特提愚供9分仰子再诊踢断庭的估功岛能抗及笨扩区展病值毒心载袋量许与醋治碎疗例作2按.芦H潜B师V惹-圈-糊-练干焰扰忧素H校B贪V刚<书1声0射0座p帽g捉/喘m父L虹1应1山/块3养0内阴辜转H共B仍V取>龙1楚0灯0洞p蓬g兽/等m冰L免1脆/动3岗0可阴逐转(贿H击B具e吼A棍g直H责B世e喷A运b咱)1可0分只子屋诊英断队的劫功安能亩及反扩恢展病位毒寇载蛾量咏与告治蚕疗例道3必.完H娃I演V锐病题毒喝载最量宗与揪传叹播1嘱5榆1秤2灯7浓人淡流富行哀病柄学抵调嫩查蜻4垒1柱5网对芹伴素侣3材0的个续月叹H深I帜V屈阳角转班2披2表%导(债9属0验/休4尾1君5杠)5阻1奏人眠R诊N竹A艰<昏1津5乱0膜0让c掉o证p似i颤e弦s枕/话m钱L伸全翠阴1脏1分漆子币诊扁断埋的稀功联能偷及冻扩巾展病秃毒冒载捆量颤与钻治是疗例房诚4灶.赶血遍浆佩E掩B悲V何载默量师与滔鼻赴咽奸癌灭复冬发1掘5址个痛二罪年雅持落续竟缓狼解苗:旱0震c页o东p煎y马/命m姥L1咸0今个响复昨发途:吹3辈2赵2战5切0贷c舒o颂p怒i无e变s坛/脉m字L1刘7恩个察随萄访尿:物临戴床戏恶玻化贤前膨半掩年必病哀毒撤载叠量野升岁高1没2耐特药燃病辨原坊的趣分彻子圈诊拣断W谊H切O萍:抽人爷类贸死弓亡亮1勾/救3尼是孔长怒期似用榜药怕的存毒壁副咏作哀用H撞B霸V仇的楼Y忌M瓦D午D锹变箭异H却I毅V芝耐杜药1需3血扮制客品红筛碎查3喝0普0押余同万齐的西血回清壤阴工性忌样脆品贸,表分暴子支生怪物求学航复袜测惭:H明B售V乐:隔4色7H僚C项V次:兰1距0H肾I践V肃-尊1轿:僚2-夏2取0泉0脑1崖年圣剑洽桥凤资坐料H童I载V答-戚1闷血孝清访阴摇性赵而盗R乌N资A授阳签性朝0取.吵2竟-六6规.呀6豪%-卵A具m另.美J坊.胞C韵h炮i亿n漏A童t吃h倡o碑l铲.巴2蹲0牵0势01命4在扔基仇础狡研背究袍领倚域耳中理的精应软用则;遗画传企病炮的犹基抵因沃诊华断残和慕产奋前厕基沃因腔诊榜断耽:如怨血注友帅病痛、火地陆中籍海烈贫耳血巨等肿详瘤考基沿因恰和草肿急瘤帖标庄志存物功表汉达乎(炒m券R明N黎A的)鱼的序检原测肯;骨返髓演移太植亡、摊器酱官隔移流植察供感体音配浑型笛选运择聚;法听医绍学枯、斯动怀植清物郑学减、涛古充人煤类查学宫、品古提生乌物子学娇;与裹疾端病掠相崇关冒的疏各绑种摔蛋梁白反(左细层胞忠因驱子输、劝酶芬、责激兼素煮、震受伙体舞)税的捕基起因扎表调达乌的寄检栽测扒;药狐物击基绿因秆组适学颗、蜘耐笋药昆基抓因袍的甚检枕测涂,哪等以等分局子嘴生飞物迈学传技润术涌在界其栋它钢领辰域爸的端应捡用1再5简船单棵介笋绍阀实守验恋原株理P锁C器R(革P康o毒l山y开m饼e抵r房诚a畜s途e程C怖h俘a姿i话n绍R巾e廊a辜c亮t贪i锋o说n沸,距聚欢合饼酶罢链白反锡应豆)荧净光拳实奸时垫定迅量拐P疲C酿R匀(弟r杆e颜a丛l等t下i昨m捎e浇P义C昼R众)N忘A盟S弃B返A阅(遥依捷赖砍核商酸足序时列裂的状扩洒增凉)1地6P阔C潜R偶原锄理驻:实秋质丛就昆是体四外榴基公因侄复伙制佣技廊术Mg2+dCTPdGTPdUTPdATPTaqDNA聚合酶AmpErasePrimer靶序列加朽热浑变头性妹9附5°信C靶剃序炎列也引教物缎退震火产5你5°处C引涝物暂延速伸旗7霸2°C1豆7P消C础R叨循傅环第轨一搅步敌–沟加咳热誉变嗓性靶范序这列靶堡序骑列从泰外营周膜血猎白恒细秃胞料或拍绒尝毛估、疲羊乱水两细集胞棋提滨取爆的寒D追N岭A案约饱1刃u腊g测,码在席含捎有图适榴当佣缓蜂冲悬液帆、今引光物工、晌d断N命T款P脆s陕(运d挡A用T株P翠、破d保C经T显P刺、汇d搭G各T难P礼及奸d阵T倘T业P瞒)娃等躁的婚反垦应失混搂合唐物溪中府,主在巩9桌4水℃颜下短热乳变城性隆1萄-凝4碎分罚钟厨,举使啊之爸解鉴为轻单新链炎。1利8P葱C腐R织循前环第戚二迫步杯–泛引顿物筝与陪靶椅序捎列眼退刚火靶志序方列靶润序钓列P芒r河i镇m昆e醉r去1P维r红i阁m辨e纳r死2B除i达o搁t碎i包nB何i具o撞t珍i绍n5孤’3书’5魔’5机’3茶’5输’3弟’3哀’引穷物街与统解奥为比单灾链牺的僚D块N伟A献上墨互达补过序注列款杂呼交塑在篇一合起裕,湾称呀之缩慧为述退乡丰火升。辣5虑5春℃进左羽右1章9P纯C君R蛮循报环第呈三蚀步乞-支引四物征延遣伸靶找序株列靶葛序钳列P砌r跳i突m逆e貌r着1P傅r浑i盈m价e榴r注2B很i债o矛t授i浴nB级i总o但t雷i朽n5拜’3采’5额’5哀’3融’5则’3句’3斑’T月a睛qD讲N尼AP粉o医l录y界m冲e蹄r凳a陵s矮e在疏D嘉N杨A项聚计合注酶剩催投化化作源用合下勇,阶以院d捎N桶T气P血s尽为蝇原观料汪(订底升物涛)焦,孕从符引乡丰物六的乎3沙’逝端俭A损开泰始蜜,浓沿愈着返5灭’赢→颗3终’鞠的溜方嫩向卷,洞合普成禽每爽条敏模吗板洲的耕互蒜补异链逼,医此社称印引她物辫延锈伸锡。澡7票2凝℃千左谋右2患0第花1术个捎P锄C羡R陕循滔环裁完励成设后靶赶序喂列靶春序爪列B学i皇o泰t务i奥nB峡i你o躬t体i庭n2袋13比0静次阀循野环退后升靶货序赔列能扩探增兄的咱数迹量N凉o选.莲o定f托N芽o滩.滚A葬m咬p第l秧i滔c高o跪n铅C赔y啊c硬l黑e禽s邀C渠o虫p绒i困e迟s递o贪f两T营a筝r槽g塑e挺t1甲22盼43葬84花1掀65捕3商26狐6址42宜0旅1杀,截0蕉4悟8踩,搏5扔7枯63露0狐1弓,浇0征7恭3触,捕7控4衡1烘,售8润2惑41院c蔬y邻c翠l势e基=跨2爆A豪m什p雨l浊i抛c义o乎n2湾c尸y佛c唯l伐e技=峡4假A般m娃p右l津i航c羽o抚n3贪c废y忌c蓝l沿e危=避8患A嫩m事p坚l边i叨c叶o眯n4眯c甜y陪c蔑l进e榆=谨1蛮6迅A纯m滋p食l胸i届c痒o天n5背c讨y备c抹l宝e浓=搞3供2边A因m多p急l值i铺c雁o幻玉n6偷c彩y压c辛l忘e通=吹6贡4槽A据m没p挺l松i杜c匪o稼n7译c断y荣c绝l位e怎=渴1筑2桨8它A成m短p威l革i钱c桨o储n2贫25’3’RQ探搞针茧完奋整耳时贡,遇报狗告美基央团跌发听射稼的鸣荧碌光捞信册号欢被油淬狗灭朱基深团付吸梦收厚,所引以茶检提测谜不错到轰荧当光挤,感此进种耗现脆象妥称君为荧辽光铃共链振贞能英量答转划移桶。荧着光潜P扔C苗R慕原怒理窄–T荷a雹q拢M遥a劳nT供M技贩术λ2愤35’3’5’3’5’3’RQE棚x乌t勇e夕n庸s垃i它o盆n龄S评t胃e丙p5’3’1尊.贴S内t她r胜a稳n孔d纱D钥i腥s坛p昂l寨a险c棵e岭m障e载n尚tTaq3’QR5’5’3’3’QTaqR5’2懂.熊C溪l耽e府a欺v恨a蜘g袄e3飘.对P怨o镜l弊y毛m态e派r冻i刷z恶a忘t候i嗽o库nC耐o键m遗p倚l鼠e羽t床e5’3’QTaqR3’5’4聋.告D世e聪t炒e横c宫t揭i幅o扬n5’3’3’QTaqR5’lR荧阵光检P郊C膏R刻原袍理转–T职a坦q爹M糕a径nT炮M技拼术2匪4定倾量渴P缓C蒙R祸测虾定荐的右是识扩监增妇的当指柿数艰扩违增冤期睛;定怎性哗P策C题R剂测和定俗的穿是蝇扩仆增方的抹终室点辆(捕平岗台付期嚼)定冰量昼P木C辣R捆与建定献性尊P彩C锋R蠢测吩定浙的链区钢别2药5市脊场爬上手常睬见填的历实掉时馋荧弱光对P优C阵R乳仪罗氏LightcyclerMJopticon2伯乐icyclerABI7000杭州博日(原大和)linegene2谁6临粪床深标词本核与酸划提卵取武技劣术N抹A阶S章B起A策扩陕增E丈C漂L锁-核化掏学夺发节光误标争记荡检债测N宪A浅S榴B堂A疲扩愉增探+玩分何子貌灯戴塔再检宏测扩填增客过蜂程首中光“估分惜子篮灯固塔顶”献即辨时枕同桥相若检党测方悲法污1康-泻N烤u良c造l想i拨S活e型n密s掠E窃C久L方殖法晕2袖-嫁N亏u歪c概l谅i拍S下e改n集s毒E鸣a秃s双y皇Q加努入夏裂畜解洪缓印冲缸液朽和当内塞置骄标味准N尸A灭S倍B耀A测铜定及原穗理2普7N照A侦S阿B玩A扩鸦增兔原丛理引易物苦1逆侄转夸录笑酶R凝N衰a摸s速e择H引竿物学2逆茅转搂录僵酶T停7趴R庙N谦A控聚作合炭酶引向物筑2逆有转销录扮酶逆榜转挥录舱酶R赔N坝a律s铁e侦H引饮物供1线符性讲循头环扩寸增搜循协环2赤8N笑A遥S灯B忘A和P斑C嘴R的连不店同N忧A假S她B巾A扩坛增乒目较标睁为策R尊N揭A同如温绑扩掠增连润续敲扩纠增扩篮增宫物狱为掌单害链文R饱N跌A引绢物河次盈序显不材包愈含简於涝最陶终婆产疼物筐中P深C婚R扩艰增华目逃标帆为称D渴N斗A温烈度伞循踏环轰扩芹增循零环招扩烧增扩帽增仁物纺为糟双抗链多D简N看A引磁物贴次莫序轻包咬含造於续最得终堆产排物瘦中2僵9乙竟型统肝芒炎塔检验测尝标津志尤物松:H喊B拳s潮A昼g唱,豪抗日-陆H杯B撕s态,H双B举e此A屋g捕,徐抗岁-择H执b累e愿,抗寻H浆B着c桂(首I下g服G薄,维I导g郊M期)锤,H劳B匆V语-暴D菊N采AD乐a轻n估e夺颗沉粒叹(肯完剖整精的孔病衣毒议)犯形嗓态乙陪型怪肝保炎游的设分漏子及诊异断3倡0乙壁型泳肝刷炎轻的狠分焰子难诊芦断1冤.抹重户要起性全艘球跟2忍0罗亿毯人泪感脚染慢缸性丸3现.用5乖亿意人中冲国适、岔东躁南诊亚绩、稀非归洲痕5扭0覆%结肝秒硬近化忆,侨7做0谜-司9浙0棍%漆肝殃癌7段-桶3保0析%励携不带探者棒感滚染械变夫异竟体3除12慕.傅H宏B贺V响基冷因两型屋与够血乞清由型位关马系谋及回流馒行慌病非学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