动物实验的基本方法

动物实验的基本方法第1页/共67页遵循动物保护、保证动物福利的原则不造成动物的应激反应和伤害不造成动物实验人员自身的伤害确保实验结果的准确可靠第2页/共67页一.实验动物的抓取和固定第3页/共67页大、小鼠的抓取和固定√

抓取方法√

固定方法:徒手固定;固定板固定;固定架固定;简易固定Placing

a

mouse

on

a

cage

lid

and

grasping

theloose

skin

behind

the

ears

by

the

thumb

andforefinger第4页/共67页Push

the

mouse

into

the

restrainer第5页/共67页Leave

the

tail

of

the

mouse

outside

the

cover

ofthe

restrainer第6页/共67页Let

the

rat

relaxes

on

the

top

of

the

lid.第7页/共67页Stretch

the

body

of

the

rat

by

pulling

up

it’stail

and

then

cover

the

rat

with

a

towel

byyour

left

hand第8页/共67页Fold

the

skirts

of

towel

under

the

rat

from

alldirections第9页/共67页Grasp

up

the

left

hindlimb

of

the

rat

toexpose

the

abdomen第10页/共67页第11页/共67页•豚鼠的抓取与固定√抓取方法√固定方法徒手固定固定板固定抓豚鼠时，一般不要抓腰腹部位，否则易造成肝破裂而引起死亡第12页/共67页•家兔的抓取与固定√抓取方法√固定方法徒手固定;盒式固定;台式固定第13页/共67页•犬的抓取与固定√抓取方法√固定方法慢性试验中犬的固定方法急性试验中犬的固定方法:头部的固定;四肢固定第14页/共67页二、性别鉴定第15页/共67页一般情况下，哺乳类动物性别依据动物的肛门与外生殖器之间的距离加以区分。雄性要比雌性的距离更长。Sexing

mice

-

The

distance

between

the

anal

and

genital

orifices

is

greater

in

the

male

(left)

compared

to

the

female

(right).第16页/共67页Sexing

Rat-

the

distance

between

the

anal

andgenital

orifices

is

greater

in

the

male

(left)compared

to

the

female

(right)第17页/共67页Slight

pressure

isapplied

to

theexternal

genitalito

expose

thevulva

of

a

femalebunny第18页/共67页Slight

pressure

isapplied

to

theexternal

genitaliato

expose

thepenis

of

a

malebunnyA

female

rabbit第19页/共67页A

male

rabbit三.动物的编号、标记及去毛方法第20页/共67页动物的编号与标记：√常用的标记液：①3%~5%苦味酸溶液（黄色）②0.5%中性红或碱性品红溶液（红色）③2%硝酸银溶液（咖啡色，涂后需光照10分钟）④煤焦油酒精溶液（黑色）√编号原则：先左后右，从前到后。左前肢记为1号，左侧腹部为2号，左后肢3号，头顶部为4号，腰背部5号，尾基部6号，右前肢7号，右侧腹部8号，右后肢9号。编号超过10时，可使用两种不同颜色的溶液，把一种颜色作为个位数，另一种为十位数。第21页/共67页穿耳孔法用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定号码的方法，原则是：左耳代表十位，右耳代表个位。实验动物：兔、犬、猪标牌法一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上实验动物：犬、猴烙印法剪毛法第22页/共67页•实验动物被毛的去除方法剪毛法拔毛法剃毛法脱毛法常用的化学药品：硫化钡（BaS）、硫化钠（NaS）、硫化钙（CaS）第23页/共67页四.动物的麻醉方法第24页/共67页√常用的麻醉剂挥发性麻醉剂:乙醚、氯仿等非挥发性麻醉剂：苯巴比妥钠、戊巴比妥钠、硫喷妥钠等巴比妥类的衍生物，盐酸氯胺酮、水合氯醛等中药麻醉剂：洋金花、东莨菪碱等√动物的麻醉方法全身麻醉①吸入法:②腹腔和静脉给药麻醉法局部麻醉:盐酸普鲁卡因、盐酸可卡因第25页/共67页常用麻醉药的剂量及注射途径种类戊巴比妥硫贲妥钠盐酸氯胺酮水合氯醛乌拉坦mg/kg途径mg/kg途径mg/kg途径mg/kg途径mg/kg小鼠3550IVIP2550I.V.IP22-44IM400IP--大鼠2550IVIP2040IVIP22-44IM300IP0.75IP豚鼠3040IVIP2055IVIP22-44IM200-300IP1.5IP家兔3040IVIP20IV22-441.0IVIP狗30IV25IV125IV1.0IV猪<45kg>45kg30-2015IVIV10-95IVIV10-1510-15IMIM第26页/共67页√麻醉注意事项:①静脉注射必须缓慢，同时观察肌肉紧张性、角膜反射和对皮肤夹捏的反应，当这些活动明显减弱或消失时，停止注射。②麻醉时要注意保温。保温方法有：实验桌内装灯，电褥，台灯照射等③作慢性实验时，在寒冷季节，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平。④注意保持动物的呼吸道的通畅.第27页/共67页五.动物的给药途径和方法第28页/共67页实验动物的给药方法主要分为注射法和投入法两种，注射法又分为：皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、脑膜下注射、脑内注射、胸腔内注射、腰椎内注射、静脉注射、关节腔注射和心内注射等方法，投入法可分为：鼻腔内投入、胃腔内投入、肠管内投入、气管内投入以及经口腔投入。1、小鼠的给药途径和方法第29页/共67页√灌胃（i.g）:动物要固定好；头颈部保持平展；要沿着口角进针，再顺着食管方向插入胃内；决

不可进针不顺就硬向里插。√皮下注射（s.c）:常选用颈背部皮肤。√皮内注射（i.d）:观察皮肤血管的通透性变化及观察皮内反应，多用于接种、致敏实验等。雄性第30页/共67页较雌性皮肤紧密，注射难度大。√肌肉注射（i.m）：较少应用√腹腔注射（i.p）:√静脉注射（i.v）：一般采用尾静脉注射。小鼠尾部背腹各有一根动脉，两侧各有一根静脉。2、大鼠的给药途径和方法第31页/共67页√灌胃:左手按徒手固定方式固定大鼠,使大鼠伸开两前肢,手掌握住大鼠背。方法与小鼠相同。√皮下注射：常选在左侧下腹部或后腿皮肤处，方法同小鼠。√皮内注射：常选用背部脊柱两侧的皮肤，方法同小鼠。√肌肉注射：一般选择股二头肌注射，但应避免伤及坐骨神经，否则会导致后肢瘫痪第32页/共67页√腹腔注射：用左手的大拇指、食指和中指从大鼠的前肢和头部后面抓住大鼠，同时用身体抵住大鼠的两后肢使之固定，使腹部向上并伸展，注射方法与小鼠相同。√静脉注射：尾静脉第33页/共67页第34页/共67页3、兔的给药途径和方法√灌胃：确保灌胃管插入胃内；药液推完后将残留在灌胃管内的药物用水冲入胃内，确保给药剂量的准确√皮内注射：背部脊柱两侧的皮肤√皮下注射：背部和腿部皮肤√肌肉注射√腹腔注射√静脉注射：耳缘静脉第35页/共67页Disinfect

of

skin

on

the

top

of

thigh

muscle第36页/共67页Insert

needle

perpendicular

to

the

surface

ofskin

and

inject

the

substance

inside

the

syringe第37页/共67页Disinfect

of

injection

site

by

75%

alcohol

directlyor

75%

alcohol

cotton

ball第38页/共67页Pinch

the

skin

up

and

insert

the

needle

in

forinjection第39页/共67页Keep

the

needle

tip

in

skin

for

a

while

after

injection

prevent

leakage

of

substance

from

the

needle

which

due

to

imbalance

pressure

of

emulsion

inside

the

syringe.第40页/共67页Ear

vein

before

administering

of

tranquilizer第41页/共67页Ear

vein

after

administering

of

tranquilizer第42页/共67页Insert

needle

into

the

ear

vein

with

needle

tipsurface

face

up第43页/共67页六、动物血液的采集方法第44页/共67页1、大小鼠的血液采集方法√眶静脉丛（窦）采血（多次重复）：轻压颈部两侧，眼球充分外突√眶动脉和眶静脉取血（大量采血）：尽量使动物眼周围皮肤往眼后压，眼球突出充血，弯头镊迅速夹去眼球√尾静脉采血：剪尾或切开尾静脉：将尾巴在热水中浸泡数分钟或用酒精/二甲苯反复擦试针刺尾静脉√其它：心脏采血、大血管采血等第45页/共67页第46页/共67页2、兔、豚鼠的血液采集方法第47页/共67页√耳中央动脉采血：兔√耳缘静脉采血：兔√心脏采血：兔、豚鼠√颈动（静）脉采血：√背跖静脉采血：豚鼠Fix

the

position

of

needle

by

your

left

thumband

withdraw

blood

from

the

ear

vein第48页/共67页Press

a

cotton

ball

on

the

top

of

the

injection

sitebefore

pull

out

the

needle.第49页/共67页Apply

clip

on

the

top

of

the

cotton

ball

for

2-3minutes

to

stop

further

bleeding第50页/共67页Apply

same

procedure

as

collecting

blood

from

earvein

for

blood

collection

from

ear

artery第51页/共67页Restrain

the

anesthetized

rabbit

on

the

surgical

table第52页/共67页Remove

the

hair

around

the

neck

area第53页/共67页Make

a

5

cm

opening

on

the

middle

line

of

theneck第54页/共67页Search

the

carotid

artery

with

a

tissue

forceps

and

ahomeostatic

forceps.第55页/共67页Isolate

the

carotid

artery

from

the

vagus

nerveand

other

connective

tissue第56页/共67页Tie

up

the

distal

end

of

the

carotid

artery

bysilk

suture第57页/共67页Clip

the

proximal

end

of

the

carotid

arterywith

a

bulldog

clamp第58页/共67页Insert

a

16

G

intravenous