无菌检验操作SOP

无菌检验操作SOP编号：SOP-ZL001-00页码：1\4版本号：01修订号：00机密等级：秘密起草人起草日期颁发部门质量管理部审核人审核日期批准人批准日期生效日期分发清单研发部[]质量管理部[]综合管理部[]生产管理部[]市场销售部[]财务部[]目的规定无菌检查薄膜过滤法的具体操作方法，指导操作者按本程序规定步骤使用薄膜过滤法进行无菌检查。适用范围本程序包括薄膜过滤法无菌检查的物品准备、操作前准备、供试品的复溶、稀释、过滤，加培养基培养，结果判定及废弃物处理的全过程。职责3.1．质量管理部：负责本规程的起草。3.2．质量管理部检验人员：负责本规程的操作。3.3．总经理:负责本规程的起草。定义无引用标准《中华人民共和国药典》2015年版四部材料及设备6.1.1.供试品及参考品/标准6.1.1.1.供试品：在生物安全柜将采集的供试品，每瓶抽取50ml,混入另一灭菌的500ml瓶内，每批产品根据批量取样为600～800ml/批；6.1.1.2.阴性对照：0.9%无菌氯化钠溶液，20瓶6.1.2.化学药品及试剂6.1.2.1.硫乙醇酸盐硫体培养基200ml/瓶，1瓶/供试品6.1.2.2.胰酪大豆胨液体培养基100ml/瓶，1瓶/供试品6.1.3.玻璃器皿及辅助用品6.1.3.1.剪刀1把、止血钳1把、不锈钢放置槽一个6.1.3.2.操作服1套/人6.1.3.3.全封闭的配套的一次性培养器/每供试品；6.1.4.设备6.1.4.1.培养箱20℃-25℃，培养箱30℃-35℃。使用参见SXRS-SOP09-1-0-446.1.4.2.集菌仪，参见《全封闭集菌使用与维护程序》SXRS-SOP09-1-0-53。6.1.4.3.生物安全柜，使用前记录型号，编号。6.1.4.4.环境生物安全柜A级，工作室为C级。流程图无内容8.1.准备8.1.1.培养基的配制参见《培养基使用说明》8.1.2.灭菌物品准备，参见《无菌检查物品的准备程序》8.1.3.配制84消毒液，方法参见《1:250的84消毒液配制程序》8.1.4.供试品表面消毒处理，8.2.操作程序8.2.1.操作前的准备8.2.1.1.开启照明灯8.2.1.2.检查洁净室温度、湿度、压差，并作记录。8.2.1.3.将灭菌操作衣放入更衣间，复核并记录无菌操作衣灭菌设备运行流水号。8.2.1.4.消毒后的阴性对照、供试品、75%酒精棉放入缓冲间。8.2.1.5.将有效期内灭菌物品、供试品稀释液放入缓冲间，复核灭菌物品灭菌批号、供试品稀释液批号，并作记录。8.2.1.6将所需培养基摆放在培养盒中放入缓冲间8.2.操作开始8.2.1人员进入培养间，参见《人员进出洁净厂房程序》，供试品、培养基、灭菌物品、75%酒精棉放在生物安全柜下操作台上。8.2.2无菌剪刀逐瓶去除供试品外盖8.2.375%酒精棉擦拭消毒供试品瓶口8.2.4去除全封闭集菌培养器无菌外包装，在培养杯上填写名称、批号、日期。8.2.5集菌培养器培养杯放置集菌仪上。培养杯下口与灭菌的瓶子连接。8.2.6点燃酒精灯。8.2.7在火焰保护下，将集菌培养器上的针头插入供试品瓶中。8.2.8启动电脑集菌仪电源开关，调节集菌仪转速至80转/秒。8.2.9供试品溶液通过集菌仪自动过滤。8.2.10过滤完成后，将供试品瓶中的针头拔出，插入另一瓶供试品中。重复进行下一瓶，至供试品全部过滤完毕，关闭集菌仪电源。8.2.11加入培养基8.2.12将培养杯顶部出气口上的乳胶帽取下，套在培养杯底部的管口上。8.2.13用止血钳夹住3号连接管。8.2.14拔出供试品瓶中的针头，插入硫乙醇酸盐培养基中。8.2.15启动电源开关，将培养基平均加入集菌培养器的1号、2号培养杯中。8.2.16关闭电源，放开3号连接管。8.2.17用止血钳夹住1号、2号连接管。8.2.18拔出硫乙醇酸盐培养基中的针头，插入胰酪大豆胨液体培养基中。8.2.19启动电源开关，将培养基加入3号培养杯。8.2.20关闭电源，放开1号、2号连接管。8.2.21在离杯口10cm处，用塑料夹分别夹住1.2.3号连接管。8.2.22在离杯口11cm处用剪刀剪断连接管。8.2.23将剪断处套在培养杯出气口上。8.2.24在培养杯盒外标示牌上填写供试品名称、批号、时间、试验人，复核人。8.2.25试验完毕，关掉酒精灯8.3培养8.3.1将装有硫乙醇酸盐培养基的1号培养杯放置30-35℃培养箱中培养，于第3、6、9、12天、结果判定日观察培养情况，并在BPR中记录。8.3.2将装有硫乙醇酸盐培养基的2号、装有胰酪大豆胨液体培养基的3号培养杯放置20-25℃培养，于第3、6、9、12天、结果判定日观察培养情况，并记录。8.3.3阴性对照操作方法同8.4清场，填写记录8.5试验结果评估8.5.1培养后14天后判定结果，完成记录。复核人复核、签字，QA签字。8.5.2供试品管及阴性对照管都无菌生长，判供试品符合规定。8.5.3如有培养基长菌，需进行污染菌染色。8.5.4以下任一情况出现，判试验不成立，需重试。8.5.4.1对无菌检查相关设施的微生物监控数据表明其不符合规定。8.5.4.2对无菌检查过程的回顾，揭示了本操作程序是错误的。8.5.4.3阴性对照管有菌生长。8.5.4.4供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证微生物生长是因无菌检查中使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。8.5.4.5重试时，重新取同量供试品，依法重试，如无菌生长，判供试品符合规定，如有菌生长，判供试品不符合规定。8.5.4.6试验结束后将装有培养液的培养杯，高压灭菌后进行处理。8.6填写试验记录，报告结果出现OOS情况，应及时报告主管。注意事项9.1.认真检查及核对供试品批号，防止供试品批号混淆。9.2操作全过程应注意无菌操作，防止因操作造成的假阳性结果，9.3.供试品为新的产