抗原抗体反应 荧光及荧光物质(免疫学检验课件)_第1页
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文档简介

荧光及荧光物质免疫学检验—*—

荧光及荧光物质内容1荧光的概念指某些荧光物质在吸收一定波长激发光的能量后,使原来处于基态的电子跃迁到激发态,当其在极短时间内恢复至基态时发射出波长大于激发光波长的光。01—*—

现有两束光,波长分别是490nm和520nm,它们一束是用于激发荧光物质A的激发光,一束是荧光物质A发出的荧光,到底哪一束是激发光?哪一束是荧光呢?490nm520nm提问—*—

荧光及荧光物质内容2Stokes位移Stokes位移=λ发射光-λ激发光发射光波长与激发光波长之差。02—*—

荧光寿命长?荧光寿命短?寿命长寿命短提问—*—

荧光及荧光物质内容3-1荧光寿命指荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程度时所用的时间。激发光消失,荧光现象消失清晰模糊—*—

荧光及荧光物质内容3-2荧光淬灭荧光物质在某些理化因素(紫外线、高温、苯胺、碘液、硝基苯和酚等)作用下,发射荧光减弱甚至消退的现象。

紫外线高温苯胺碘液硝基苯酚—*—

荧光及荧光物质内容4-1发射光谱固定激发光波长,在不同波长下所记录到的样品所发射的荧光谱图。检测波长:最大发射峰—*—

荧光及荧光物质固定检测发射光波长,用不同波长的激发光激发样品所记录到的荧光谱图。激发波长:最大吸收峰内容4-2激发光谱—*—

荧光及荧光物质内容4-3荧光效率荧光物质分子将吸收的光能转变成荧光的百分率。吸收光的光量子数(激发光强度)荧光效率=发射荧光的光量子数(荧光强度)—*—

荧光色素镧系螯合物:Eu3+等,时间分辨荧光免疫测定荧光底物其它荧光物质荧光色素最大吸收光谱(nm)最大发射光谱(nm)发光颜色异硫氰酸荧光素(FITC)490-495520-530黄绿色四乙基罗丹明(RB200)570595-600橘红色四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)550620橙红色藻红蛋白(PE)488575红色藻红蛋白-德州红(ECD)488620橘红色藻红蛋白-青花苷5(PeCy5)488670红色藻红蛋白-青花苷7(PeCy7)488755深红色别藻青蛋白(APC)633670红色碘化丙啶(PI)488620橙红色内容5荧光物质类型—*—

荧光及荧光物质FITC(异硫氰酸荧光素)TRITC(四甲基异硫氰酸罗丹明)—*

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