输血前相容性检测阎

输血前相容性检测阎第1页，课件共75页，创作于2023年2月教学目的和要求掌握盐水法、抗人球蛋白法、聚凝胺法的原理、方法及意义。熟悉微柱凝胶法原理、方法。了解酶法、白蛋白介质法、Liss法的原理和方法。

熟悉ABO/Rh血型鉴定方法及影响因素熟悉抗体筛选原理和意义熟悉交叉配血方法及意义了解抗体鉴定原理和意义

第2页，课件共75页，创作于2023年2月血型鉴定抗体筛选及鉴定交叉配血红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术应用第3页，课件共75页，创作于2023年2月

微柱凝胶免疫学技术

聚凝胺试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术第4页，课件共75页，创作于2023年2月盐水介质凝集试验悬浮于盐水介质中的红细胞与相应抗体分子结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集。主要检测IgM类抗体（ABO系统、抗E）。抗A抗B特异性IgG类抗体有时可直接凝集悬浮于盐水中的红细胞，与红细胞表面抗原位点数目和抗原决定簇位置有关。

第5页，课件共75页，创作于2023年2月盐水介质凝集试验方法：玻片法-便于显微镜观察结果

试管法-适用于不同温度、便于洗涤反应温度：4～22℃临床意义：盐水凝集试验阳性，并在37℃也有活性的抗体有意义，这些抗体通常能用其他方法证明。室温有活性，37℃无活性者临床意义不大。

第6页，课件共75页，创作于2023年2月

试验记录4+（++++）：一个大凝集块，背景透明，无游离细胞3+（+++）：数个大凝集块，背景透明，无游离细胞2+（++）：许多小凝集块，背景稍混浊，有游离细胞1+（+）：细小的凝集块，背景浑浊W+（±）：极细小凝集块，要用显微镜观察结果0（-）：无凝集，无溶血，细胞呈游离散在状态PH：部分溶血H：完全溶血第7页，课件共75页，创作于2023年2月第8页，课件共75页，创作于2023年2月Weakreactionsoftendifficulttointerpret.Canalsobedowngradedduetoshakingthecompletedtest.ConventionalTesting.第9页，课件共75页，创作于2023年2月第10页，课件共75页，创作于2023年2月盐水介质凝集试验◆结果分析：阳性-凝集或溶血 阴性-无凝集或溶血 先观察有无溶血、再观察有无凝集◆注意事项：细胞浓度2～5%（严格按说明 书操作）、血清与细胞比例、反应温 度、弱凝集分析

◆优点：简便、快捷、直观。◆缺点：不能发现不完全抗体。第11页，课件共75页，创作于2023年2月

微柱凝胶免疫学技术

聚凝胺试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术第12页，课件共75页，创作于2023年2月抗人球蛋白试验抗球蛋白试验是1945年由Coombs等人建立的，又称Coombs试验。抗球蛋白试验的建立在血型血清学上有着非常重要的意义。分为直接抗球蛋白试验（DAT）和间接抗球蛋白试验（IAT）。第13页，课件共75页，创作于2023年2月抗人球蛋白试验原理IgG类血型抗体（主要是免疫抗体，如Rh血型抗体）分子量小，与红细胞相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，称之为不完全抗体，但在加入抗-IgG后，以其搭桥作用则可出现凝集反应。补体成分在体内被红细胞抗原抗体复合物激活以后，结合在红细胞表面。在体外含补体的多克隆抗体，或抗C3b、抗C3d等单特异性抗体与补体致敏的红细胞反应，使之凝集也称为抗球蛋白试验。第14页，课件共75页，创作于2023年2月抗人球蛋白试剂多特异性抗球蛋白试剂：应含有抗IgG和抗-C3d。单特异性抗球蛋白试剂：抗IgG、抗IgM、抗IgA、抗C3、C4的片段。第15页，课件共75页，创作于2023年2月直接抗人球蛋白试验DAT是用来检测体内红细胞致敏情况，尤其是IgG和C3d包被的红细胞。用于：HDN和自身免疫溶血性贫血的诊断红细胞被药物抗体致敏的检查急性和迟发性溶血性输血反应的检查第16页，课件共75页，创作于2023年2月第17页，课件共75页，创作于2023年2月间接抗人球蛋白试验用于测定在体外能引起红细胞致敏的抗体。用不完全抗体测定红细胞血型，如Rh血型。交叉配血。第18页，课件共75页，创作于2023年2月第19页，课件共75页，创作于2023年2月结果分析-假阳性●用免疫兔或羊制备的抗人球蛋白含有种间抗体。●红细胞在用盐水洗涤时已有凝集。●IAT试验中所用红细胞本身DAT阳性。●不抗凝标本在冷环境里经过一段时间的保存后，自身冷抗体发生作用，激活补体，补体成分结合在红细胞上，用多特异性抗球蛋白试剂会发生假阳性。●离心过度，红细胞压积过紧，不易充分摇散第20页，课件共75页，创作于2023年2月结果分析-假阴性致敏后的红细胞洗涤不充分,残留的球蛋白中和了试剂中的抗球蛋白，造成假阴性。操作过程不连续，时间过长，结合在红细胞上的抗体解离。红细胞、血清和抗人球蛋白试剂保存不当都可能发生活性减弱或丧失。红细胞过多，反应减弱；红细胞过少，看结果不准确，都影响结果。试剂中抗人球蛋白浓度过大，有前带现象。孵育时间和温度不当，会使反应结果减弱或变为假阴性。观察结果时过度摇动试管，摇散细小凝块。第21页，课件共75页，创作于2023年2月注意事项每次试验要设有阴性和阳性对照。阴性结果要加入一滴IgG致敏红细胞实验器材清洁。注意抗原抗体比例、孵育时间、温度等条件。严格按照实验方法操作。排除自身抗体干扰。第22页，课件共75页，创作于2023年2月微柱凝胶免疫学技术

聚凝胺试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术抗人球蛋白试验第23页，课件共75页，创作于2023年2月微柱凝胶试验

原理：微柱凝胶技术是用特定的化学物质做成微型凝胶柱，柱的上端有一个加样反应室。抗原抗体反应后离心，凝胶柱起过筛作用，红细胞凝集块不能通过凝胶的间隙而留在凝胶的上部，未凝集的红细胞通过凝胶的间隙，沉积到底部。

第24页，课件共75页，创作于2023年2月微柱凝胶反应本质：凝集反应红细胞抗原与相应抗体反应出现凝集。根据红细胞在胶质介质中的位置肉眼判断。第25页，课件共75页，创作于2023年2月结果判断标准

结果判定标准第26页，课件共75页，创作于2023年2月微柱凝胶试验注意事项

▲严格按照试剂说明书操作。▲献血者DAT阳性，干扰结果判读。▲患者自身抗体干扰。▲注意加样顺序。▲配制细胞浓度准确。

第27页，课件共75页，创作于2023年2月

微柱凝胶免疫学技术聚凝胺试验酶介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术抗人球蛋白试验盐水介质凝集试验第28页，课件共75页，创作于2023年2月聚凝胺试验原理：聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子基团，能中和红细胞表面的负电荷，并籍助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异性凝集。当红细胞与血清在低离子介质中孵育后，IgG抗体与红细胞上相应的抗原结合，在聚凝胺的作用下发生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能区分，再加入枸橼酸钠重悬液，枸橼酸根的负电荷与聚凝胺上的正电荷中和，非特异性凝集现象消失，而真正的凝集不会消失。第29页，课件共75页，创作于2023年2月+++聚凝胺+无凝集+有凝集反应-----枸橼酸纳-----第30页，课件共75页，创作于2023年2月聚凝胺试验优点：简便快捷，可用于某些不完全抗体检测。缺点：对无唾液酸的红细胞无作用， 例如多凝集红细胞。 可增强自身抗体或冷凝集素干扰。注意事项：抗原抗体比例适当 聚凝胺（1液）去除干净。

第31页，课件共75页，创作于2023年2月

微柱凝胶免疫学技术

聚凝胺试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术抗人球蛋白试验第32页，课件共75页，创作于2023年2月酶介质凝集试验

原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电荷，使红细胞相互排斥。蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的距离，使IgG分子能与有相应抗原的红细胞产生凝集。第33页，课件共75页，创作于2023年2月酶介质凝集试验

●常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花果酶。●方法：Ⅰ期法-酶液直接加入血清和细胞的混合物中。

Ⅱ期法-用酶处理细胞再与血清 进行反应。●两种方法比较：Ⅰ期法操作方便 Ⅱ期法敏感第34页，课件共75页，创作于2023年2月酶介质凝集试验

●优点：可以增强一些抗原抗体系统的反应活性Rh和Kidd系统最明显●缺点：会破坏一些抗原的结构(M、N、Fya、Fyb)酶液批次不同，都需标化最适孵育时间。操作繁复，少数人对酶液过敏。第35页，课件共75页，创作于2023年2月

微柱凝胶免疫学技术

聚凝胺试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术抗人球蛋白试验第36页，课件共75页，创作于2023年2月增强技术●白蛋白增强凝集法 ★原理：白蛋白能提高红细胞悬浮液中的介电常数，从而降低zete电位，缩小了细胞间距离，增加细胞与细胞的接触面。

★应用：血型鉴定和交叉配血 ★结果判定：出现凝集和溶血现象为阳性结果。

第37页，课件共75页，创作于2023年2月增强技术●低离子强度盐溶液（Liss）法

★原理：在凝集反应第一阶段，若降低介质的离子强度，就会减少红细胞周围的阳离子云，促进带正电荷的IgG与带负电荷的红细胞发生反应。★注意事项：不能增加额外血清量 延长孵育时间会使某些抗原 变质，如Fya。

第38页，课件共75页，创作于2023年2月抗体筛选及鉴定交叉配血红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术应用红细胞抗原抗体检测技术血型鉴定第39页，课件共75页，创作于2023年2月ABO血型鉴定

●方法：常用室温盐水技术检测红细胞上 的血型抗原，以及血清中存在的血型 抗体。结果判定参见凝集试验。●ABO血型鉴定的常规试验：

1、正定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。常规用抗A抗B

2、反定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。常规用A、B和O三种红细胞。第40页，课件共75页，创作于2023年2月正反定型的意义

◆准确的血型判定利于指导临床用血◆发现亚型◆抗原强度的改变与疾病相关◆新抗原出现与疾病相关◆排除假阴性或假阳性结果干扰第41页，课件共75页，创作于2023年2月ABO血型反应格局

血型正定型反定型抗A抗BAcBcOc

A+--+-B-++--O--++-AB++---第42页，课件共75页，创作于2023年2月CellsvSerumSerumvCells第43页，课件共75页，创作于2023年2月ABO亚型鉴定

◆亚型通常表现为凝集反应强度弱，或正、反定型不符◆增加试剂：抗A1-区分A1和A2 抗H-有较强的H抗原性 抗A,B-与Ax的反应强度增强◆增加方法：吸收放散试验 唾液中血型物质鉴定 PCR方法第44页，课件共75页，创作于2023年2月Rh血型鉴定

▲红细胞Rh表型可用特殊的具有抗D、C、c、E、和e抗血清检测来鉴定。但常规只用抗D血清检查有无D抗原

▲D抗原阳性者为Rh阳性，否则为阴性

第45页，课件共75页，创作于2023年2月Rh血型鉴定方法

●Rh抗体属IgG类，一般不能在盐水介质中与红细胞发生凝集，因此须采用以下鉴定方法（其中一种）：1、酶介质法2、抗人球蛋白法+增强试验（Liss/白蛋白技术）●RhD检测常用盐水法。第46页，课件共75页，创作于2023年2月血型鉴定交叉配血红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术应用红细胞抗原抗体检测技术抗体筛选及鉴定第47页，课件共75页，创作于2023年2月抗体筛选和鉴定

●有临床意义的抗体：能引起新生儿溶血病、引发溶血性输血反应，或者使输入的红细胞存活期减少，在37℃有反应的同种抗体。●意外抗体：抗A，抗B以外的抗体。第48页，课件共75页，创作于2023年2月目的和原则

▲目的：对受血者的血清或血浆，应常规作抗体筛选实验，以发 现有临床意义的意外抗体。▲原则：让受检血清或血浆与特殊的试剂红细胞（筛选细胞）起反应，以发现37℃有反应活性的抗体。第49页，课件共75页，创作于2023年2月对血清中抗体检测的要求

选择足够敏感、高特异性的技术检测出受检者血清中低水平的有临床意义的抗体。2.要高度注意，即使受血者血清中的抗体对输入的不相容红细胞抗原呈弱反应，也能够发生快速回忆反应，抗体迅速产生，破坏红细胞。第50页，课件共75页，创作于2023年2月对试剂红细胞的要求

●不能将多人份红细胞混合，一定要用2-3人份的试剂红细胞，以避免红细胞混合后，对弱抗原红细胞的稀释。●美国FDA对注册和批准作为商品供应的用作不规则抗体筛检的试剂红细胞的要求为必须表达：D、C、E、c、e、M、N、S、s，Pl、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb，JKa、JKb。第51页，课件共75页，创作于2023年2月第52页，课件共75页，创作于2023年2月

临床重要的人血清红细胞抗体

抗体自然发生免疫盐水Coombs/LISSHDNHTR相容表型抗-AyesyesmostmostyesyesB、O抗-ByesyesmostmostyesyesA、O抗-AByesyesmostmostyesyesO抗-HyesyesmostmostyesyesOh第53页，课件共75页，创作于2023年2月抗体自然发生免疫盐水Coombs/LISSHDNHTR相容表型抗Dyes罕见mostyesyesD阴性血抗Cyes罕见mostyesyesC阴性血抗EyessomemostyesyesC阴性血抗cyes罕见mostyesyesc阴性血抗eyes罕见mostyesyese阴性血第54页，课件共75页，创作于2023年2月抗体筛选方法

◆盐水凝集法◆抗人球蛋白法◆聚凝胺法◆微柱凝胶法◆LISS抗球蛋白法第55页，课件共75页，创作于2023年2月DCEce患者1患者21R1R1++00++-2R2R2+0++0++3rr000++--第56页，课件共75页，创作于2023年2月

结果的判读和解释

◆溶血和血液凝集意义相同，都是抗原抗体反应阳性结果。先观察有无溶血，后观察有无凝集。◆记录结果，并与以前结果对照。◆抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义的抗体。一些低频抗原的抗体或有剂量效应的抗体，可能被漏检。第57页，课件共75页，创作于2023年2月抗体鉴定

通过筛选，抗体一经检出，应进一步作抗体鉴定试验，以确定其特异性。自身细胞检查-排除非特异性2.谱红细胞检查第58页，课件共75页，创作于2023年2月谱红细胞：一般是由8-16人份的已知血型表现型O型红细胞组成，具有各种不同的抗原成分，根据谱红细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。方法：在盐水法基础上、灵活应用白蛋白介质法、酶技术及抗人球蛋白实验。第59页，课件共75页，创作于2023年2月血型鉴定抗体筛选及鉴定交叉配血红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术应用红细胞抗原抗体检测技术第60页，课件共75页，创作于2023年2月交叉配血

◆主侧：受血者血清+供者红细胞 检测对供者红细胞起反应的抗体◆次侧：受血者红细胞+供者血清 检测对受者红细胞起反应的抗体◆自身对照：受血者红细胞+受血者血清 排除自身抗体、直接抗球蛋白试验阳性及红细胞缗钱状凝集干扰第61页，课件共75页，创作于2023年2月接收申请单和血标本

核对无误（如有错误与医生/护士联系）进行交叉配血

相合结果输入微机不相合打印发血单血液中心交叉配血工作流程第62页，课件共75页，创作于2023年2月注意事项

◆用于交叉配血的标本应该是新获得的（3天之内）；供者血标本应刚从血袋上剪下。◆不能用玻片法作交叉配血。◆必要时用生理盐水洗涤细胞。◆红细胞浓度一般是2-5%。◆严格按照试剂说明书操作。第63页，课件共75页，创作于2023年2月抗筛和配血结果分析红细胞方面问题处理血清方面问题处理常见问题处理红细胞抗原抗体检测技术第64页，课件共75页，创作于2023年2月抗体筛选和交叉配血结果分析

抗体筛选阴性，交叉配血相合◆见于临床上绝大多数标本。◆抗体筛选阴性，血清中仍有可能含有临床有意义的抗体（方法或筛选细胞）◆盐水介质试验作配血可能漏检有意义的IgG类抗体。◆只有用非盐水介质交叉配血，才能保证待输的血和受者相合。第65页，课件共75页，创作于2023年2月抗体筛选和交叉配血结果分析

抗体筛选阴性，盐水直接离心交叉配血不合◆ABO血型错误。◆抗A1存在于A2或A2B，在直接盐水交叉配血实验中，抗A1能引起大部分A型红细胞不相合。◆存在室温反应的同种抗体，如抗M。第66页，课件共75页，创作于2023年2月抗体筛选和交叉配血结果分析

抗体筛选阴性，抗人球蛋白交叉配血不合◆献血者红细胞DAT阳性（约1/10000）◆患者抗体弱，献血者红细胞抗原性很强，表现为抗人球蛋白试验阳性。◆针对低频抗原的抗体，如Diego系统抗-Wra。第67页，课件共75页，创作于2023年2月抗体筛选和交叉配血结果分析

抗体筛选阳性，交叉配血不合◆同种抗体、自身抗体、试剂问题、缗钱状凝集，应在输血前查明原因。◆必须进行包括抗人球蛋白试验在内的交叉配血。◆紧急情况下无法找到血清学配合的血液时，输血科人员应告之主管医生此种情况下输血存在的可能危险。第68页，课件共75页，创作于2023年2月同种抗体的处理对策

◆交叉配合相合与否取决于涉及抗原的频率。◆鉴定抗体的特异性后，先用抗血清筛选相应抗原阴性者，再与受者血清作交叉配血。用受血者血清还是试剂抗血清筛选血液，应根据病人的血清反应强度，能得到的受者血清量以及抗血清的来源和费用等决定。◆医院库存血中难以找到配合血时，求助血液中心。第69页，课件共75页，创作于2023年2月自身抗体

◆冷自身抗体干扰血型鉴定、抗体筛选和鉴定以及交叉配血试验，结果判读困难。最常见的