性病实验室梅毒SOP

山东省皮肤病医院性病试验室操作手册编码文件名称山东省皮肤病医院性病试验室操作手册编码文件名称梅毒螺旋体检测标准操作规程页数实施日期制订人审核人批准人制订日期审核日期1、标本的采集与处理标本采集的根本要求操作应标准化。全部标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套慎重操作。梅毒标本采集临床表现取材部位检查方法临床表现取材部位检查方法一期梅毒溃疡、淋巴结、血液暗视野检查、血清学检查二期梅毒皮损、淋巴结、血液暗视野检查、血清学检查埋伏梅毒血液血清学检查三期梅毒血液、脑脊液血清学检查神经梅毒血液、脑脊液血清学检查血液血清标本2-5ml，1-2小时〔37℃303000r/min分钟，分别颖血清，备用。也可承受保存于2-8℃或-20℃的血清。溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。血浆标本依据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5ml，轻轻颠倒混10-15EDTA〔RPR性反响〔需用血清复试，如用其他抗凝剂应首先评价后再用。末梢全血部。一次性采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。收集滴出的血液，马上用于检测。皮损部位组织液用于病原学检查用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损外表的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。用于核酸检测用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损外表的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损DNA〔1ml/管〕的标本管中，备用。淋巴液0.3ml2-3少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片后马上进展暗视野镜检或备用。脑脊液2%利多卡因自皮肤到椎间4-6cm，2-4cm。当针头穿过韧流出，至于适宜的容器中，备用。标本接收的标准存留的样品移出，对样品管和盛器消毒并做记录。通知运送机构。2、梅毒的试验室检查梅毒螺旋体暗视野显微镜检查原理2-417-106-24胎盘使胎儿受染。争论证明，在妊娠期7毒患者硬下疳、淋巴结、皮肤黏膜损害以及孕妇羊水中均可检查到梅毒螺旋体。体折射出亮光，从而可依据其特别形态和运动方式进展检测。方法仪器耗材：暗视野显微镜无菌纱布不锈钢刮刀灭菌棉拭子载玻片、盖玻片注射器，注射针头灭菌生理盐水检测流程将待检标本制成生理盐水涂片，加盖玻片后马上备检。之在载物台下方。有气泡。镜检：先低倍后高倍，查找有特征形态和运动方式的梅毒螺旋体。结果结果判读：6-20um,可推断为梅毒螺旋体。结果报告：的梅毒螺旋体则报告阴性结果。临床意义便利，易操作等特点。假设未能觉察梅毒螺旋体，不能排解梅毒诊断。阴性结果缘由可能为：标本中〔50%皮损已接近自然消退或取自非梅毒性皮损。无论暗视野显微镜检查的结果如何，都应进一步进展血清学检测。留意事项取材前，应用无菌生理盐水清洁皮肤外表，取材时应留意无菌操作。应取到组织渗出液，尽量避开出血，以提高检出阳性率。下降，导致镜下难以观看到阳性结果。动方式，应与其他螺旋体相区分。甲苯胺红不加热血清试验〔TRUST〕原理3-4〔亦称为反响素。这种抗体在体外可与心磷脂、卵磷脂和胆固醇等组成的抗原〔0.03%心磷脂、0.21%卵磷脂和0.90%胆固醇〕发生抗原-抗体反响。心磷脂、〔浆〕中的反响素结合，形成肉眼可见的红色絮状物。血清不需灭活，肉眼可观看结果。方法仪器耗材：TRUST时器和保湿盖〕无菌生理盐水〔0.9%〕检测流程：定性试验试剂预备：检测前将试剂盒置室温预温30分钟置试验卡片圈中，并均匀地涂布在整个卡圈内。不能将标本溢出环圈外面。加抗原：将抗原轻轻摇匀，在每个标本圈中，用专用滴管针头垂直滴加1滴〔60±1/ml，17μl/滴〕抗原,不需要手工混匀。反响：将卡片置水平旋转仪上，建议罩上保湿盖，〔100±2〕r/min8分钟。斜卡片可有助于弱阳性和阴性标本。定量试验1)141:2，1：4，1：8，1：161450μl50μl〔浆〕于圈15-6合圈1中的生理盐水和标本，但要避开产生气泡。从圈1〔1:2〕中移取50μl16450μl。依次从圈4-圈1将不同稀释度的标本涂布整个圈内。加抗原等以下试验步骤同定性试验的2-4。如阳性反响滴度大于1;16,则连续稀释以测定最高稀释反响滴度。结果结果判读阳性反响：圆圈内消灭中或大的红色絮状物，液体清亮；弱阳性反响：圆圈内消灭小的红色絮状物，液体混浊；阴性反响：圆圈内仅见炭颗粒集中于中心一点或均匀分散。2.3.3.2定性试验：消灭凝集反响报告阳性，不产生凝集反响报告阴性。定量试验：消灭凝集反响的血清最高稀释倍数为抗体滴度，结果报告滴度为1：X，X1、2、4临床意义〔一期、二期〕经足量规章抗梅毒治疗后3个月，TRUST抗体滴度可下降2个稀释度，6个月412转为阴性。但晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，250%病人血清反响仍为阳性。TRUSTTURST观看和判愈。留意事项螺旋体抗原血清学试验〔TPPA、ELISA〕等复检，以排解生物学假阳性，确认是否为梅毒螺旋体感染。称为前带现象。梅毒螺旋体明胶凝集试验〔TPPA〕原理梅毒螺旋体颗粒凝集试验〔TPPA〕是用超声裂解梅毒螺旋体抗原致敏明胶粒子，〔浆方法仪器耗材：TPPA移液器保湿盒检测流程：试剂预备：试验前30分钟将待检标本和试剂从冰箱中取出，恢复至室温。加稀释液：每份样本作4孔，用移液器将血清稀释液滴入微量反响板第1孔〔100μl2425μl。25μl12n14325μl425μl致敏粒子。混合：以不会导致微量反响板内容物溅出的强度混合30秒钟。录结果。附：重吸取试验操作的根底上进展再试验。取用定量的溶解液调制好的未致敏粒子0.95ml至小试管中。参与样品50μl混合，于室温〔15℃-30℃〕下放置20分钟以上。离心分别〔2023rpm、5，然后分别吸取上清液【吸取完毕的稀释样品〔1：20】50μl3l32n的方式进展稀释。之后的步骤同上。结果结果判读首先观看未致敏粒子反响孔是否消灭凝集〔3，推断试验有效性后，再依据致敏粒子与标本反响孔〔4〕1+～2+凝集反响凝集〔第3〕为无效试验，需要对标本进展重吸取试验后再进展检测。结果报告阳性：未致敏粒子反响孔〔第3〕不消灭凝集，致敏粒子反响孔〔第4〕消灭1+～2+凝集反响，报告阳性。阴性：未致敏粒子反响孔〔第3〕和致敏粒子反响孔〔第4〕均未消灭凝集反响，报告阴性。〕不消灭凝集，致敏粒子反响孔〔4〕消灭±凝集反响，报告弱阳性。临床意义往有过梅毒螺旋体感染。故梅毒螺旋体抗原血清学试验不能作为疗效观看的指标。进一步进展非梅毒螺旋体抗原血清试验，以推断是否为梅毒现症感染。留意事项其他方法复检。强度混合。清。致敏粒子以及未致敏粒子在使用之前均应混合均匀后再使用。并制止振摇。。IgM原理带用于确认病人样本和酶的加样。方法仪器耗材IgM移液器平台摇摆仪检测流程用钝头镊子按需将电泳条取出〔手不能遇到电泳条每槽一条，数字面对上。2.0ml释液/冲洗液至每一槽中，确保全部检测条浸湿，检测条不能局部漂于缓冲液面上。〔7°±2°,40-45/分钟580ul20ul病人血清标本，当缓冲液流至槽的前端时参与。45盒倒出液体。在每槽中参与2.0ml样本稀释液/冲洗液，置于平台摇摆仪摇摆5分钟6，72IgM15倾斜孵育盒倒出酶结合抗人IgM抗体在每槽中参与2.0样本稀释液/冲洗液，置于平台摇摆仪摇摆5分钟完全倒出小槽中液体，重复10，11步骤2次在每槽中参与2.0ml蒸馏水，置于平台摇摆仪摇摆1分钟。完全倒出小槽中液体5-10〔条带明显、清楚、清楚〕从平台摇摆仪取出孵育盒3用钝头镊子将湿检测条取出，放置在纸巾上自然风干〔勿置于阳光下〕结果47KD17KD15.5KDIgM47KD、17KD、15.5KD47KD、17KD、15.5KD三个位置全