甲状腺过氧化物酶抗体测定标准操作规程

甲状腺过氧化物酶抗体测定标准操作规程1.检验原理：采用两步法免疫检测，运用化学发光微粒子免疫检测（CMIA）技术与灵活的检测模式的结合，测定人血清和血浆中的甲状腺过氧化物酶抗体。第一步，将样本、项目稀释液和TPO包被的顺磁微粒子混合并孵育。将样本中甲状腺过氧化物酶抗体与甲状腺过氧化物酶抗体包被的微粒子结合。冲洗后进入第二步，加入吖啶酯标记的抗人IgG抗体结合物。再次孵育冲洗后，将预激发液和激发液加入反应混合物中；测量产生的化学发光反应，以相对发光单位（RLUs）表示。样本中的甲状腺过氧化物酶抗体的含量和ARCHITECTi光学系统检测到的RLUs值成正比。2.试剂主要组成成分：2.1试剂盒微粒子：甲状腺过氧化物酶（重组体）包被的微粒子，储存于含有蛋白（牛）稳定剂的2-（N-吗啡啉）乙磺酸（MES）缓冲液中。最低浓度：0.10%固体物质。防腐剂：抗菌剂。结合物：吖啶酯标记的抗人免疫球蛋白G(IgG)（小鼠、单克隆）结合物，储存于含有蛋白（牛）稳定剂的2-（N-吗啡啉）乙磺酸（MES）缓冲液中。最低浓度：80.0ng/mL.防腐剂：抗菌剂。项目稀释液：项目稀释液，储存于2-（N-吗啡啉）乙磺酸（MES）缓冲液中。防腐剂：抗菌剂。2.2需要但未提供的试剂预激发液：预激发液含有1.32%（W/V）过氧化氢激发液：激发液含有0.35N氢氧化钠浓缩清洗缓冲液：浓缩清洗缓冲液含有磷酸盐缓冲液。防腐剂：抗菌剂。3.样本要求：玻璃塑料血清无添加剂（没有涂层）血清分离管血浆肝素锂肝素锂肝素锂血浆分离管肝素锂血浆分离管EDTA肝素EDTA血清和血浆样本中应不含纤维蛋白、红细胞或其他颗粒物质。2-8℃可保存72小时；-10℃以下可保存30天。样本应避免反复冻融。4.检验方法：仪器法（详见雅培i1000标准操作规程）5.参考范围样本参考范围（IU/ml）血清或血浆≤5.616.检验结果的解释6.1甲状腺过氧化物酶抗体项目通过四参数Logistic曲线拟合数据约简法（4PLC,Y加权）生成一条校准曲线7.检验方法的局限性抗体测定是多标准诊断程序上的一个参数。诊断甲状腺疾病时，应该结合多种诊断方法的同时参考临床症状。7.2约20%的无症状患者样本中存在甲状腺过氧化物酶自身抗体，这说明此类抗体普遍存在于表现健康人体内。甲状腺过氧化物酶抗体存在的情况也取决于受试者的年龄、性别和地理分布。7.3一些样本不能线性稀释，这是因为自身抗体的理化性质不同造成的。7.4接受过小鼠单克隆抗体制剂诊断或治疗的患者，其样本中可能含有人小鼠抗体（HAMA）。使用含有小鼠单克隆抗体的试剂盒检测此样本时，检测值可能会假性升高或降低。如果检测结果和临床观察结果不一致，则可能需要其他信息用于诊断。7.5人血清中的异嗜性抗体可与试剂中的免疫球蛋白发生反应，干扰体外免疫测定。患者样本中存在异嗜性抗体时，可以使检测结果出现异常值。可能需要其他信息用于诊断。8.产品性能指标8.1精密度：甲状腺过氧化物酶抗体项目的精密度为总CV≤10%8.2功能灵敏度；甲状腺过氧化物酶抗体项目在CV值为20%时对应的最低浓度为0.50IU/ml。8.3分析灵敏度：甲状腺过氧化物酶抗体项目的分析灵敏度≦1.0IU/ml。8.4线性：甲状腺过氧化物酶抗体项目的线性范围在3.0-1000.0IU/ml之间。8.5自动稀释验证：甲状腺过氧化物酶抗体项目使用自动稀释程序得到的检测结果在使用手工稀释程序得到的检测结果的±15%内。8.6干扰性项目浓度平均干扰率血红蛋白1000mg/dL-3.6%-+3.7%胆红素20mg/dL-3.6%-+3.7%甘油三酯1000mg/dL-3.6%-+3.7%蛋白质g/dL和10g/dL-3.6%-+3.7%8.6临床灵敏度：在两项研究中，通过检测139份临床定义为桥本甲状腺炎的样本和125份Graves病的样本来计算临床灵敏度。临床诊断以相应实验室的标准为基础。不能把甲状腺球蛋白和/或甲状腺过氧化物酶自身抗体的存在作为诊断Graves病和桥本甲状腺炎的必要标准。8.7一致性：比较ARCHITECT甲状腺过氧化物酶抗体项目与商用免疫检测项目在检测甲状腺过氧化物酶抗体时的性能时，对共计500份样本进行了评估，包括表现健康个体与自身免疫性甲状腺疾病患者。一致性=92.6%。9.临床意义：在1957年，Trotter等人第一次证明了在许多桥本甲状腺炎（Hashimoto'sthyroiditis）患者的血液中可检测出自身抗体，这一点之后又被Roitt和Doniach于1958年证实。该抗体作用于甲状腺抗原，与甲状腺球蛋白明显不同。这种抗原被称作甲状腺微粒体，根据验证，几乎全部抗甲状腺微粒体自身抗体均可识别甲状腺过氧化物酶（TPO）。TPO是一种膜结合糖蛋白酶，分子量在107kD左右。其在体内的作用是碘化酪氨酸，以合成T3和T4。人们认为TPO的这种自身免疫反应产生的抗体是多克隆的，并且它们之间没有同源性，这些抗体至少可识别6个抗原决定簇（表位），包括构象表位和线性表位两种类型。此外，每种免疫球蛋白类别（G或M）或亚型（G1-G4）的比例及其亲和力会随患者的不同情况产生差异。与甲状腺球蛋白自身抗体（anti-Tg）不同，TPO自身抗体固定补体具潜在毒性，在自身免疫性甲状腺疾病中可能起致病作用。在多数桥本甲状腺炎、原发性黏液腺瘤和Graves病患者中，经常发现甲状腺过氧化物酶自身抗体与甲状腺球蛋白自身抗体同时存在。为更好地认识产后甲状腺疾病综合征，自身免疫性甲状腺疾病会对妊娠产生什么影响已成为重要研究课题。甲状腺过氧化物酶抗体在多数产后甲状腺炎病例中均可检测到，研究人员也发现，在妊娠中期，自身抗体的存在会导致无症状性产后甲状腺功能减退的风险升高。当没有甲状腺球蛋白自身抗体存在时，通常也可检测到甲状腺过氧化物酶抗体，特别是在甲状腺微肿患者和自身免疫性甲状腺功能减退病例（多达64%）体内，据报道这种情况仅与甲状腺过氧化物酶抗体有关。此外，甲状腺过氧化物酶抗体在其他自身免疫性疾病如类风湿关节炎