生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座

试验一

蛙坐骨神经---腓肠肌标本制备生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座第1页1.学习生理学试验基本组织分离技术；2.学习和掌握制备蛙类坐骨神经---腓肠肌标本方法；【试验目标】生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座第2页【试验原理】蛙类一些基本生理活动规律与恒温动物相同，而维持其离体组织正常活动所需理化条件比较简单，易于建立和控制。所以，在试验中惯用蟾蜍或蛙坐骨神经腓肠肌标原来观察兴奋与兴奋性、刺激与肌肉收缩等基本生理现象和过程。故制备坐骨神经腓肠肌标本是生理试验中必须掌握一项基本技能。生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座第3页【试验对象】

蟾蜍或蛙

【试验器材和药品】

蛙板、普通剪刀、手术剪、镊子、探针、玻璃分针、蛙钉、滴管、培养皿、锌铜弓、任氏液。生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座第4页【试验方法】1.破坏脑和脊髓

取蟾蜍一只，用自来水冲洗洁净。左手握住蟾蜍，用食指按压其头部前端，拇指按压背部，右手持探针由枕骨大孔垂直刺入椎管。然后探针改向前刺入颅腔，左右搅动充分捣毁脑组织。然后将探针抽回至进针处，再向后刺入脊椎管，重复抽插捣毁脊髓（图1-1）。此时如蟾蜍四肢松软，呼吸消失，表明脑和脊髓已完全破坏，不然应按上法重复进行。生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座第5页图1-1图1-1破坏蟾蜍脑脊髓方法生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座第6页2.剪除躯干上部及内脏

左手捏住蟾蜍脊柱，右手持粗剪刀在前肢腋窝处连同皮肤、肌肉、脊柱一并剪断。左手握住蟾蜍后肢，用拇指压住骶骨，使蟾蜍头与内脏自然下垂，右手持普通剪刀，沿脊柱两侧剪除一切内脏及头胸部，留下后肢、骶骨、脊柱以及脊柱两侧坐骨神经（图1-2）剪除过程中注意勿损伤坐骨神经。图1-2剪除躯干上部及内脏图1-2生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座第7页3.剥皮

握紧脊柱断端（注意不要握住或压迫神经），右手握住其上皮肤边缘，用力向下剥掉全部后肢皮肤（图1-3）。把标本放入盛有任氏液培养皿中。将手及用过剪刀、镊等全部手术器械洗净，再进行下面步骤。图1-3生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座第8页4.分离两腿

用镊子夹住脊柱将标本提起，后面朝上，剪去向上突起尾骨（注意勿损伤坐骨神经）。然后沿正中线用剪刀将脊柱和耻骨联合中央辟开两侧大腿，并完全分离。将两条腿浸入任氏液培养皿中。5.制作坐骨神经腓肠肌标本取一蛙腿置于蛙板上玻璃板上。生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座第9页（1）游离坐骨神经

将腿标本腹面朝上放置，用玻璃针沿脊柱旁游离坐骨神经，将坐骨神经连同2～3节脊椎骨用粗剪刀从脊柱上剪下来。再将标本后面朝上放置，把梨状肌及其附近结缔组织剪去。循坐骨神经沟（股二头肌与半膜肌之间裂缝处），找出坐骨神经大腿段（图1-4）。用玻璃针仔细剥离游离至腘窝，然后剪去从脊柱根部至腘窝全部坐骨神经分支。图1-4生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座第10页（2）完成坐骨神经小腿标本

将游离洁净坐骨神经搭于腓肠肌上，在膝关节周围剪掉全部大腿肌肉，并用普通剪刀将股骨刮洁净，然后在股骨中部剪去上段股骨（保留足够股骨断端，用于固定），保留部分就是坐骨神经小腿标本。生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座第11页（3）完成坐骨神经腓肠肌标本

将上述坐骨神经小腿标本在跟腱处穿线结扎后，于结扎处远端剪断跟腱。游离腓肠肌至膝关节囊将小腿其余部分剪掉，这么就制得一个含有附着在股骨上腓肠肌并带有支配腓肌坐骨神经标本(图1-5)。生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座第12页6.检验标本兴奋性

用经任氏液润湿锌铜弓轻轻接触一下坐骨神经，如腓肠肌发生快速而显著收缩，则表明标本兴奋性良好，即可将标本放在盛有任氏液培养皿中，以备试验用。若无锌铜弓，亦可用中等强度单个电刺激作上述测试。图1-5生理学实验蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备专家讲座第13页

【试验要求】

掌握制备坐骨神经腓肠肌标本技能，并取得兴奋性良好标本。

【注意事项】1.操作过程中，勿污染、压榨、损伤、过分牵拉神经和肌肉。